儿童支气管哮喘血清25-OH-VD3与CD4+T淋巴细胞表达的相关性

马春艳　朱华　宋瑞霞　李俊力

[摘要]目的探讨血清25-OH-维生素D3（25-OH-VD3）的水平与支气管哮喘患儿CD4+T淋巴的细胞因子的相关性。方法选择5岁以上的临床控制良好能够接受管理和规范治疗的支气管哮喘患儿，在研究过程中所有患儿均没有急性发作，检测血清25-OH-维生素D3水平，选取能够接受规范化管理的哮喘患儿82例为研究对象，其中25-OH-维生素D3低于30ng/mL的患儿42例为研究组，维生素D大于30ng/L哮喘患儿40例为对照组，患儿在检测维生素D水平同时抽血检测血清γ干扰素（IFN-γ）、白介素4（IL-4）水平，监测患儿肺功能，所有患儿均按2016版儿童哮喘防治指南[1]规范治疗，研究组给予每天口服维生素D400U治疗3月后，分别抽血检测血清25-OH-VD3及血清IFN-γ、IL-4水平，并复查肺功能。结果（1）研究组及对照组维生素D水平差异有统计学意义（P<0.05）;研究组每天给予口服维生素D400IU治疗3月，复查维生素D水平与对照组维生素D水平比较差异无统计学意义（P>0.05））。（2）研究组治疗前与对照组患儿血清IL-4、IFN-γ及IL-4/IFN-γ比较差异有统计学意义（P<0.05），研究组经3月维生素D干预后与对照组比较IL-4、IFN-γ及IL-4/IFN-γ差异无统计学意义（P>0.05）。研究组经过维生素D干预后IL-4水平有下降，IFN-γ水平有下降，但IL-4/IFN-γ水平有所升高，差异有统计学意义（P<0.05）。（3）研究组治疗前肺功能结果，与维生素D干预治疗3月后肺功能结果比较，给与维生素D干预后肺功能最大呼气流量（PEF）及1秒率（FEV1/FVC），75%肺活量最大呼气流量（MEF25），50%肺活量最大呼气流量

（MEF50），25%肺活量最大呼气流量（MEF75）均有所改善，差异有统计学意义（P<0.05）。（4）研究组及对照组的维生素D水平与肺功能PEF%及FEV1/FVC%及EFE25%、EFE50%、EFE75%有相关性（P<0.05），维生素D与肺功能FVC无相关性（P>0.05）。结论25（OH）维生素D3水平可能通过影响哮喘患兒细胞因子的表达，而影响体液免疫，维生素D水平不足或缺乏可能影响哮喘患儿的肺通气功能，提

高维生素D水平对肺功能改善有帮助。

[关键词]哮喘;25（OH）维生素D3;IL-4;IFN-γ;肺功能

[中图分类号]R725.6

[文献标识码]A

[文章编号]2095-0616（2019）02-17-05

支气管哮喘是全球范围内严重威胁公众健康的一种呼吸道变应性疾病，是儿童最常见的慢性病，有研究表明减少阳光暴露与哮喘发病有关，而维生素D被认为是联系阳光暴露与哮喘发病之间的中介物。本研究旨在通过对哮喘患儿血清维生素D水平与CD4+T淋巴细胞表达及肺功能变化的之间关系进行临床研究，了解维生素D在哮喘发病中与炎症因子表达及肺功能之间的相互关系，进一步探讨维生素D营养水平与哮喘发病之间的关系，从而为维生素D是否可以作为儿童支气管哮喘的一种潜在的治疗选择提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2014年8月～2016年8月本院儿科门诊就诊及住院的哮喘患儿，符合2008年中华医学会儿科学分会呼吸学组制定的诊断标准[1]。病例入选标准：（1）年龄5～11岁，确诊为支气管哮喘。

（2）入选时为非急性发作期患儿，正在接受规范化哮喘治疗，观察期间没有哮喘急性发作。（3）患儿父母同意并能坚持配合治疗观察。排除标准：（1）合并有其它肺部疾病;（2）合并有严重心、肝、肾等疾病。本研究选择能够接受随诊的支气管哮喘患儿82例，血清25-OH-维生素D3低于30ng/mL为维生素D缺乏及不足[2]共42例为研究组，研究组全部患儿每日口服维生素D400治疗3月，分别为维生素D治疗前后组;血清25-OH-维生素D3大于30ng/L为维生素D充足[2]共40例为对照组。本探究已获得我院伦理委员会批准，患儿家属知情并签署知情同意书。研究组与对照组在诊断治疗管理方面无统计学差异。研究组男26例，女14例，平均年龄（7.9±2.3）岁，对照组男27例，女15例，平均年龄（8.4±2.0）岁，两组年龄性别比较差异均无统计学意义（P>0.05）。

1.2 方法

1.2.1 观察指标的检测所有研究组及对照组患儿于清晨空腹抽血，通过串联质谱法测定25-OH-维生素D3水平，血清25-OH-维生素D3低于30ng/mL患儿经每日口服维生素D400单位3月后复查25-OH-维生素D3水平。研究者及对照组组在检查25-OH-维生素D3水平同时留取血标本，通过酶联免疫法测定血清IL-4及IFN-γ。

1.2.2 肺功能检测所有患儿在抽血检查当天通过德国康讯肺功能测定常规肺通气功能各项指标，先让受试者练习至熟练掌握其步骤，然后重复测2～3次以上，肺功能仪根据受试者年龄、身高、性别、体重显示预计值，取重复测定中最佳值用于分析。测定指标一次同步测出。测定指标包括：用力肺活量（FVC%），最大呼气流量（PEF%），1秒率（FEV1/FVC%），25%肺活量最大呼气流量（MEF75%），50%肺活量最大呼气流量（MEF50%），75%肺活量最大呼气流量（MEF25%）。

1.3 统计学处理

采用统计学软件SPSS13.0对数据进行统计分析，计数资料以百分数（%），表示，采用χ2检验，计量资料以（x±s）表示，各指标均值两两比较采用t检验，三者之间比较采用方差分析，指标之间的相关性采用直线相关分析等。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 维生素D水平比较

研究组患儿血清25-OH-维生素D3水平与经过3月口服维生素D400IU/d干预后血清25-OH-维生素D3水平比较差异有统计学意义（P<0.05），见表1;对照组25-OH-维生素D3水平与研究组患儿经过维生素D治疗后患儿25-OH-维生素D3水平比较差异无统计学意义（P>0.05）。

2.2IL-4、IFN-γ及IL-4/IFN-γ水平比较研究组维生素D治疗前与维生素D治疗后及对照组比较血清IL-4水平、血清IFN-γ水平及IL-4/IFN-γ值均有明显差异（P<0.05）。见表1。2.3两组的肺功能比较

研究组治疗前肺功能结果，与维生素D干预治疗3月后肺功能结果比较，给与维生素D干预后肺功能PEF%及FEV1/FVC%，MEF25%，MEF50%，MEF75%均有所改善，差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。2.4维生素D水平与IL-4、IFN-γ及肺功能各指标的相关性比较

研究组及对照组的维生素D水平与肺功能PEF%及FEV1/FVC%及EFE25%、EFE50%、EFE75%有相关性（P<0.05），维生素D与肺功能FVC无相关性（P>0.05）。见表3～4。

3讨论

维生素D是人体必不可少的营养物质，但由于种族、生活习惯以及地区阳光照射量的影响，不同地区的维生素D3水平差别较大，目前国内外公认血清25-OH-维生素D3低于30ng/L为维生素D3不足，25-OH-维生素D3≤20ng/L为维生素D3缺乏，25-OH维生素D3≥30ng/L为维生素D3充足[2];本次研究参考上述标准，随机选择门诊随诊105例的哮喘患儿检测了25-OH-维生素D3水平，其中25-OH-维生素D3低于30ng/L的共47例，占比44.76%，接近半数患儿存在维生素D缺乏及不足，本研究中发现支气管哮喘患儿血清维生素D水平不足及缺乏的患儿为数众多，因为缺少本地区正常儿童维生素D水平的流行病学资料做对比，不能确认维生素D的缺乏与不足是否为哮喘患儿的特征，关于此问题有必要进行大样本的研究，尤其是正常儿童的数据进行对比研究。Brehm[3-4]研究证明，在赤道地区的哮喘儿童中，维生素D不足依然占28%，在北美哮喘儿童中，维生素D不足占35%，有研究认为维生素D缺乏儿童哮喘的风险是正常维生素D水平的6.3倍[5]，本研究也给我们一个提示：本地区哮喘患儿中维生素D不足或缺乏也是非常的常见。

本研究选择能够接受全部检查及按时随访的患儿入选研究组及对照组共82例，其中维生素D水平低于30ng/L的患儿为研究组共40例，维生素D水平高于30ng/L的患儿为对照组，共42例。研究组患儿给予每天口服400U维生素D治疗3月后，患儿维生素D3水平由此前的（24.617±5.199）ng/L，升高至（36.802±8.083）ng/L，维生素D3干预前后25-OH-维生素D3水平有差异，维生素D3干扰后25-OH-维生素D3水平与对照组接近，无统计学差异，可见经过适当的干预，哮喘患儿维生素D水平可以提高。哮喘是儿童最常见的慢性病，相关研究表明减少阳光暴露与哮喘发病有关，而维生素D被认为是联系阳光暴露与哮喘发病之间的中介物。因缺乏当地正常儿童维生素D水平正常值的流行病学资料作对比，也没有对哮喘患儿与健康患儿的生活习惯进行比较，故不能确定支气管哮喘患儿是否有更高的维生素D不足及缺乏的比例;哮喘患儿可能因为自身疾病的因素，部分患儿会被人为的减少户外活动以换取更少的咳嗽喘息的发作，本研究没有涉及到对哮喘患儿的生活方式进行观测，故也不能确定维生素D不足和缺乏是否与哮喘患儿户外活动减少有关？国外研究认为维生素D缺乏是儿童罹患哮喘的强预测因子[6]且與哮喘的严重程度相关[3]。本研究比较维生素D缺乏或不足的哮喘患儿与维生素D正常水平的哮喘患儿的通气肺功能中发现，在哮喘缓解期维生素D正常患儿通气肺功能各项指标：PEF%，FEV1/FVC%，MEF25%，MEF50%及MEF75%更接近理想状态，且两组肺功能差异有统计学意义，维生素D水平正常患儿肺功能经过口服补充维生素D治疗3月，原本不足或缺乏维生素D患儿通气肺功能指标均有所改善，故本研究可以认为维生素D的良好营养状态对哮喘患儿的肺功能维持正常更有帮助。研究认为低水平的25-OH-VD3可增加小气道的阻塞程度，增加气道的高反应性，增加哮喘急性发作的机会[7]，本研究显示研究组哮喘患儿的肺功能中反应气道阻塞的指标PEF%、FEV1/FVC%及MEF25%，MEF50%，MEF75%，与对照组比较有差异，给以维生素D治疗前后比较亦有差异的，治疗前肺功能指标低于对照组患儿，尤其表现在小气道功能上更为明显，经治疗维生素D治疗3月后肺功能各项指标均有升高，与对照组患儿肺功能水平接近。可见维生素D水平升高，对哮喘患儿肺通气功能，尤其是反应气道阻塞的指标改善是有帮助的。本研究中无论是研究组维生素D治疗前后以及对照组，在维生素D水平与肺功能指标的相关性的比较显示维生素D水平与PEF%及FEV1/FVC%之间呈正相关，提示维生素D水平的升高可能会对气道阻塞有改善作用，但维生素D水平与MEF25%，MEF50%及MEF75%无明显的相关性，也许与本研究样本量不足有关。本研究提示维生素D水平与哮喘患儿的肺功能有一定的关系，补充维生素D有可能改善哮喘患儿肺功能。

Meta分析[8]提示：维生素D缺乏或不足可以增加儿童哮喘的风险，Bener[9]及Sutherland[10]的研究结果显示，哮喘儿童血清维生素D水平较健康儿童明显降低。国内外研究均表明：维生素D的缺乏与哮喘患者的炎症、恶化和总体不良结局有关[11-13]，但机制不清。本研究显示研究组患儿在维生素D治疗前的IL-4水平及INF-γ均高于对照组，而IL4/INF-γ低于对照组;经过维生素D治疗3月后随着维生素D水平的升高，IL-4水平及INF-γ均有所降低，而IL4/INF-γ有所升高。研究组患儿的维生素D水平与免疫指标IL4、INF-γ及IL4/INF-γ的相关性研究中发现，维生素D水平在治疗前后均与IL4、INF-γ及IL4/INF-γ呈相关性。关于支气管哮喘的发病机制目前依然认为CD4+T淋巴细胞在支气管哮喘的发病过程中起重要的调控作用，Th1/Th2平衡理论是哮喘发病的一个最重要的免疫学机制，维生素D除具有调控钙、磷代谢和骨稳定状态等作用外，还参与了宿主防御、炎症、免疫调节和修复等一系列病理生理过程[14]。资料表明[15]：维生素D具有调节TH1/TH2、减轻气道炎症和气道高反应的作

用。本研究结果也显示：随着维生素D的干预治疗，维生素D水平升高，IL4、INF-γ水平均下降，IL4/INF-γ所升高，可见维生素D缺乏的改善可以改善Thl和Th2之间的失衡，经过纠正维生素D不足或缺乏或可影响哮喘患儿的免疫因子水平，维生素D的补充会让机体向更有利疾病康复的趋势发展。

儿童是维生素D不足的高危群体，哮喘患儿维生素D水平与哮喘疾病本身有密切相关性，维生素D是一种有效的免疫调节剂，可能抑制哮喘反应中涉及的几种细胞类型的炎症信号。鉴于过去几十年哮喘患病率的增加，使用维生素D作为一种潜在的治疗选择已经引起了医生的极大注意，哮喘患儿维生素D的营养状况需给予更多关注。维生素D是否可以作为哮喘治疗的辅助手段，维生素D水平与哮喘发病之间的关系如何，对哮喘治疗将产生什么影响尚需要更多的研究明确。

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