氯化琥珀胆碱注射液不同溶剂中降解杂质的检测

马 延，陈 涛，卢伍党，赵 妮，李 斐

（西安力邦医药科技有限责任公司，陕西 西安 710065）

氯化琥珀胆碱是一种用于静脉给药的超短效去极化骨骼肌肉松弛剂，通用名为琥珀胆碱、司可林，化学名为二氯化2′，2-〔（1，4-二氧代-1，4-亚丁基）双（氧）〕双〔N，N，N-三甲基乙胺〕二水合物。氯化琥珀胆碱可替代乙酰胆碱，与胆碱能受体的运动终板结合产生去极化，肌松（弛缓性麻痹）作用起效很快（静脉注射后1 min内起效），单剂量给药大约可持续4～6 min。氯化琥珀胆碱起效快，肌松完全，代谢迅速，临床得以广泛应用，目前尚无一种非去极化肌松药能完全具备其优点。氯化琥珀胆碱能提供较满意的气管内插管条件，已成为使用时间最长的肌松药，是目前困难插管和紧急插管时唯一被选用的肌松药[1-7]。但由于本品结构中含有酯键，不稳定，易发生水解反应。氯化琥珀胆碱在水溶液中主要水解产生琥珀酸、氯化胆碱和氯化琥珀单胆碱，在丙二醇溶液中主要水解杂质与丙二醇发生反应，产生新的降解杂质。氯化琥珀胆碱中降解杂质文献[8-9]有报道，但杂质检测不全。美国药典委员会（USP）收载的标准中未检测注射液中的杂质，原料药标准中对主要降解杂质琥珀酸、氯化琥珀单胆碱和氯化胆碱进行检测。氯化琥珀胆碱注射液的国内报道文献和标准中，仅对降解杂质氯化胆碱进行了检测。本研究中参照USP标准[9]，采用高效液相色谱（HPLC）法检测氯化琥珀胆碱在不同溶剂注射液中的主要降解杂质。现报道如下。

1 仪器与试药

仪器：Thermo Ultimate 3000型高效液相色谱仪，Chromeleon色谱工作站（Thermo Fisher Scientific），Sartorious BS210S型电子天平（德国赛多利斯）。

试药：乙腈（色谱纯，Merck公司，批号为20160824）；戊烷磺酸钠（批号为20161028）、氯化钠（批号为20160824）、硫酸（批号为20160504）均为分析纯，购自国药集团化学试剂有限责任公司；氯化琥珀单胆碱对照品（USPReference standard，批号为H01364）；琥珀酸对照品（Dr．Ehrenstorfer GmbH，批号为91511）；氯化琥珀胆碱对照品（USP Reference standard，批号为R071NO）氯化琥珀胆碱注射液（西安汉丰药业有限责任公司，水溶剂，批号为1701101；丙二醇溶剂，批号为1701161，规格为每支2 mL∶100 mg）。

2 方法与结果

2．1 色谱条件

色谱柱：Shimadzu GL柱（250 mm×4．6 mm，5μm）；流动相：缓冲盐（取戊烷磺酸钠3．85 g，氯化钠2．9 g，2 mol／L的硫酸溶液10 mL，置1 000 mL水中，溶解，摇匀）-乙腈（95∶5）；检测波长：214 nm；流速：1．0 mL／min；进样量：50μL；柱温：30°C。

2．2 溶液制备

称取琥珀酸对照品约12．5 mg，精密称定，置25 mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液；再各称取氯化琥珀单胆碱对照品和氯化琥珀胆碱对照品约20 mg，精密称定，置10 mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为贮备液；分别精密量取贮备液各1 mL，置同一10 mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密吸取氯化琥珀胆碱注射液2 mL，置10 mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2．3 样品杂质测定

取样品，按2．2项下方法配制对照品溶液和供试品溶液，分别进样，并进样空白溶剂。结果，空白溶剂不干扰杂质测定，各杂质与主峰分离度良好，不同溶剂的氯化琥珀胆碱注射液降解产生不同的杂质。详见图1。

2．4 结构解析

USP标准中仅给出降解杂质琥珀酸和氯化琥珀单胆碱。氯化琥珀胆碱注射液（水溶剂）均检出2个杂质，为琥珀酸和氯化琥珀单胆碱，无未知杂质检出；氯化琥珀胆碱注射液（丙二醇溶剂）未检出琥珀酸和氯化琥珀单胆碱，检出2个含量较高的未知杂质，对其进行结构确认。经液相色谱质谱联用（LC-MS）检测，采用ESI离子源，正离子模式进行扫描。在正离子模式下，出现质荷比（m／z）为262．3碎片峰，减少相对分子质量35，推测失去Cl-；出现m／z为197．2碎片峰，推测为氯化胆碱酯键断裂后的[C7H11O5＋Na-H]＋碎片；m／z为297和299处有M峰和M＋2峰的分子离子峰，丰度比为3∶1，符合Cl-特征峰。因此该杂质的相对分子质量为297，与杂质A的相对分子质量一致。在正离子模式下，出现m／z为197．1碎片峰，为单酯断裂的[C7H11O5＋Na-H]＋碎片峰；同时出现对称的m／z为139．1和255．0碎片峰，分别为对称2个酯键断裂的碎片峰，因此该杂质的相对分子质量为234，与杂质B一致。

图1 高效液相色谱图

2．5 强制降解

取样品（批号为1701101），按拟订色谱条件进行强制降解试验。

未降解：取样品5支，混匀，移取2．0 mL，置10 mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，进样测定。

酸降解：取样品5支，混匀，移取2．0 mL，置10 mL容量瓶中，加1．0mol／L盐酸溶液1mL，放置0．5 h，再加1．0 mol／L氢氧化钠溶液1 mL中和，加流动相稀释至刻度，摇匀，进样测定。

碱降解：取样品5支，混匀，移取2．0 mL，置10 mL容量瓶中，加0．1 mol／L氢氧化钠溶液0．5 mL，放置10 min，再加0．1 mol／L盐酸溶液0．5 mL中和，加流动相稀释至刻度，摇匀，进样测定。

氧化降解：取样品5支，混匀，移取2．0 mL，置10 mL容量瓶中，加30%双氧水1 mL，室温放置1 h，加流动相稀释至刻度，摇匀，进样测定。

光照降解：取光照样品（4 500 lx，72 h）5支，混匀，移取2．0 mL，置10 mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，进样测定。

高温降解：取高温样品（40℃，1个月）5支，混匀，室温放置，移取2．0 mL置10 mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，进样测定。

由试验结果（图2）可见，样品（水溶剂）中，氯化琥珀单胆碱和琥珀酸主要在酸碱及高温条件下降解产生，且均为主要降解杂质，是由本品结构中的酯键断裂形成。其他条件下，几乎无杂质降解产生。在各降解条件下，杂质之间及杂质与主峰之间的分离度良好。

2．6 重复性试验

图2 供试品溶液（水溶剂）强制降解高效液相色谱图

取样品（批号为1701101）5支，混匀，移取2 mL，置10 mL容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，平行配制6份，精密吸取50μL，进样，记录色谱图，按外标法计算杂质量。结果供试品溶液中，琥珀酸含量平均为0．06%，氯化琥珀单胆碱平均含量为1．83%，RSD为0．21%（n=6），表明方法重复性良好。

2．7 稳定性试验

取样品（批号为1701101）5支，混匀，移取2 mL，置10 mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，放置室温条件下，分别于0，2，4，6，8 h时进样，记录色谱图，外标法计算各杂质含量。结果供试品溶液随着放置时间的延长，琥珀酸的含量均保持在0．05%，氯化琥珀单胆碱含量逐渐水解增大，在8 h内由1．88%增长至1．93%，增长了0．05%。提示供试品溶液8 h内不稳定，需临用新制。

3 讨论

琥珀酸和氯化琥珀单胆碱的检测中，改变流动相中2 mol／L硫酸溶液的加入量，分别加入10，8，0 mL，不改变其他色谱条件，分别测定流动相的pH，结果为3．09，3．20，4．90。取对照品溶液，分别在不同流动相条件下进样，结果加入硫酸溶液为0 mL时各杂质不能检出，加入10，8 mL时各杂质均有较好的分离度。根据预强制降解试验，样品溶液在酸性条件下稳定性较好，故选择加入2 mol／L硫酸溶液的量为10 mL，流动相pH约为3．1。

杂质A与杂质B为氯化琥珀胆碱注射液（丙二醇溶剂）特有的未知杂质，氯化琥珀单胆碱中的羧基与丙二醇中的醇羟基缩合得到新的杂质（杂质A）；琥珀酸中的羧基继续与两分子丙二醇反应，得到新的降解杂质（杂质B）。因此，在氯化琥珀胆碱注射液（丙二醇溶剂）中未检出琥珀酸与氯化琥珀单胆碱，降解产生的琥珀酸与氯化琥珀单胆碱继续参与反应，与丙二醇溶剂脱水得到杂质A和杂质B。氯化琥珀胆碱在体内经水解酶水解后，代谢产生琥珀酸与氯化琥珀单胆碱[10]，为体内代谢产物，其安全性可预知。杂质A与杂质B为丙二醇溶剂与降解杂质的反应产物，无相关文献报道其体内的代谢途径与安全性。以丙二醇为溶剂的注射液，临床安全性较低[11]。氯化琥珀胆碱注射液（水溶剂）的产品质量优于氯化琥珀胆碱注射液（丙二醇溶剂）。