慢性乙型肝炎后肝硬化患者血清中HBV-DNA 病毒载量表达水平与肝纤维化肝纤四项关系的研究

鲁惠

慢性乙型肝炎（chronic Hepatitis B）是严重威胁我国人民健康的重大传染性疾病[1]。HBV的持续感染即HBV-DNA病毒载量的持续增高引起的病理损伤是导致肝硬化最主要原因。而肝纤四项即透明质酸（HA）、层粘连蛋白（LN）、Ⅲ型前胶原N端肽（PⅢNP）、Ⅳ型胶原（CⅣ）已被认为是理想的诊断慢性肝病、衡量肝病患者炎症活动度以及纤维化严重程度的重要指标[2，3]。因此，我们根据上述特点，研究鄂尔多斯地区慢性乙型肝炎后肝硬化患者血清中HBVDNA病毒载量表达水平与肝纤维化主要指标肝纤四项的关系，为临床诊断及治疗提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 研究对象收集2013～2015年在鄂尔多斯市中心医院住院的、确诊为慢性乙型肝炎患者75例为研究对象。年龄46～65岁，平均（59.3±2.5）岁。入选标准：①HBsAg阳性超过6个月以上，乙肝病毒标志物HBsAg、HBeAg、HBcAb 阳性，HBsAb、HBeAb 阴性，HBV-DNA定量测定阳性。②研究对象既往半年内未接受过任何抗病毒、肾上腺皮质激素等免疫抑制剂及降酶药物治疗。排除标准：HAV、HCV、HDV、HEV 感染以及药物性肝炎、酒精性肝炎、自身免疫性肝炎、肝硬化、肝癌等疾病[4]。按照HBV-DNA 病毒载量的高低分为两组，其中≥105copies/ml 为高病毒载量组，＜105copies/ml为低病毒载量组。

1.2 试剂和仪器AutoLumo A2000全自动化学发光测定仪及其相关肝纤四项检测配套试剂盒（HA、LN、PⅢNP、CⅣ）和标准品购于郑州安图股份有限公司（仪器编号为7011001553）；质控品购于美国伯乐公司；台式离心机购于美国贝克曼公司。HBVDNA 病毒载量检测仪器购自罗氏公司的LightCycler480实时荧光定量PCR仪，试剂由湖南圣湘生物有限公司提供。

1.3 标本采集及要求均于入院后立即按照无菌要求空腹抽取静脉血，并将血置于黄色盖子含有分离胶的真空采血容器中，采血后立即与抗凝剂混匀，在试管外壁贴上单据号等信息或检验联号后，放置室温立即送检，以5 000r/min，离心5min后取患者血清进行肝纤四项及HBV-DNA病毒载量的检测。

1.4 肝纤四项检测采用AutoLumo A2000 全自动化学发光测定仪分析系统，严格按照微粒子化学发光分析法的标准操作规程，检测血清中HA、LN、PⅢNP、CⅣ表达水平。

1.5 HBV-DNA 病毒载量检测采用湖南圣湘生物有限公司提供的HBV-DNA提取试剂盒及罗氏公司生产的LightCycler480 实时荧光定量PCR 检测系统进行检测。

1.6 统计学方法采用SPSS 15.0 软件进行统计分析，计量资料以均数±标准差表示，差异性比较采用t检验，并进行相关分析，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 纤维化主要指标肝纤四项检测结果两组患者肝纤四项结果均高于正常参考值上限（P＜0.05）。高病毒载量组明显高于低病毒载量组，差异均具有统计学意义（P＜0.05），见表1。

2.2 肝纤四项与HBV-DNA 病毒载量相关性分析HBV-DNA病毒载量水平与血清肝纤维化主要指标肝纤四项之间存在明显相关性，差异均具有统计学意义（P＜0.05），但不存在明显直线趋势的相关关系，见表2。

表1 纤维化主要指标肝纤四项检测结果（±s）

表1 纤维化主要指标肝纤四项检测结果（±s）

肝纤四项（ng/ml）HA LN PⅢNP CⅣ高病毒载量组（n=37）207±60.1 272±66.5 147±38.4 260±47.5低病毒载量组（n=38）160±24.2 192±41.9 63±22.2 155±50.1正常值（ng/ml）0～120 0～130 0～15 0～95

表2 肝纤四项与HBV-DNA病毒载量相关性

3 讨论

肝纤维化是各种急慢性肝炎的病理发展过程，部分患者还可能发展为肝硬化，甚至癌变。但是在肝硬化之前，有一个较长的可逆转的肝纤维化过程。如何及早发现肝纤维化，并进行干预，从而延缓病情进展，对各种肝炎患者的治疗具有指导作用[5]。肝纤维化的诊断主要有肝活检样本的组织学检查、影像学检测和血清学检测。目前评价肝纤维化程度及其活动度的指标，最可靠的仍是肝活检样本的组织学检查，被称为诊断肝纤维化的“金标准”。但血清学检测可以对肝组织纤维化不同阶段做出相对准确而且早期的诊断，反映肝脏纤维化的发展变化情况，也可大致反映抗纤维化治疗的临床效果。

Ⅳ型胶原（CⅣ）是最早反映肝纤维化程度的指标；层粘连蛋白（LN）主要反映炎性细胞浸润程度及肝纤维化程度的指标；透明质酸（HA）主要反映肝细胞生成的纤维量及受损情况；Ⅲ型前胶原N端肽（PⅢNP）是反映肝内Ⅲ型胶原的合成水平的指标，PⅢNP水平越高，肝纤维化程度越强[6]。因此，肝纤四项可从不同角度反映患者肝细胞炎症活动、损害程度及肝纤维化程度[7]。基于此，本研究应用微粒子化学发光分析法对75例乙型肝炎患者进行检测，发现两组患者所有肝纤四项结果均明显高于正常参考值上线，而且高病毒载量组明显高于低病毒载量组，差异均具有统计学意义（P＜0.05）。提示肝纤维化持续存在，而且高病毒载量的患者更易导致肝硬化。

同时，本研究发现HBV-DNA 病毒载量水平与血清肝纤维化主要指标肝纤四项之间存在明显相关性，差异均具有统计学意义（P＜0.05），但不存在明显直线趋势的相关关系。因此，提示抗感染的治疗，降低体内病毒的含量，有助于延缓肝纤维化的进展甚至逆转肝纤维化情况[8]。