不同发育天数冻融囊胚移植的临床结局比较

何丽娟 毕世杰 蒋庆峰

[摘要] 目的 观察比较不同发育天数冻融囊胚移植的临床结局。方法 回顾性分析该院2014年1月—2017年12月438例行冻融复苏胚移植患者临床诊疗资料，所有患者在征得个体同意的情况下，按照囊胚不同发育天数将所有患者均分为A组与B组，A组219例患者待个体患者子宫内膜厚度在8 mm以上，胚胎发育5 d，复苏5 h后移植，B组219例患者待个体患者子宫内膜厚度在8 mm以上，胚胎发育6 d，复苏5 h后移植，比较两组患者冻融复苏胚移植结果。 结果 A组患者胚胎复张率、妊娠率分别为97.7%、66.2%，均明显高于B组（χ2=6.576、6.587，P<0.05）。A组患者流产率、异位妊娠率分别为6.4%、1.4%，均明显低于B组（χ2=5.987、5.891，P<0.O5）。 结论 胚胎发育天数可影响冻融胚胎移植成功率，胚胎发育5 d更有利于胚胎着床，从而提高个体妊娠率，降低流产以及异位妊娠发生率。

[关键词] 不同发育天数；冻融囊胚移植；临床结局

[中图分类号] R711.6 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2019）02（b）-0062-03

Comparison of Clinical Outcomes of Freeze-thaw Blastocyst Transfer in Different Development Days

HE Li-juan， BI Shi-jie， JIANG Qing-feng

Department of Reproductive Medicine， Chuxiong People's Hospital， Chuxiong， Yunnan Province， 675000 China

[Abstract] Objective To observe the clinical outcomes of freeze-thaw blastocyst transfer with different development days. Methods A retrospective analysis of 438 cases of frozen-thawed resuscitation embryo transfer in our hospital from January 2014 to December 2017. All patients were enrolled in accordance with the different development days of blastocysts and were divided into group A and group B， group A of 219 patients with individual patients with endometrial thickness of 8mm or more， embryo development for 5 days， resuscitation after 5 hours of transplantation， group B of 219 patients to individual patients with endometrial thickness of 8 mm or more， the embryos were developed for 6 days and transplanted 5 hours after resuscitation. The results of freeze-thaw resuscitation embryo transfer in the two groups were compared. Results The embryo recruitment rate and pregnancy rate in group A were 97.7% and 66.2%， respectively， which were significantly higher than those in group B（χ2=6.576， 6.587， P<0.05）. The abortion rate and ectopic pregnancy rate of group A were 6.4% and 1.4%， respectively， which were significantly lower than those of group B（χ2=5.987， 5.891， P<0.05）. Conclusion The number of embryo development days can affect the success rate of frozen-thawed embryo transfer. Embryo development for 5 days is more conducive to embryo implantation， thus improving individual pregnancy rate and reducing the incidence of abortion and ectopic pregnancy.

[Key words] Different development days； Freeze-thaw blastocyst transfer； Clinical outcome

近年些胚胎移移植技术在不断的完善和发展，胚胎移植成功率与个体胚胎质量、母体准备情况具有紧密的联系，在保证卵子以及精子质量良好的情况下，进行囊胚培养对挑选优质胚胎，提高个体妊娠率显的格外重要，囊胚移植前冻融归于囊胚培养的关键一步[1-3]。該次实验回顾性分析该院2014年1月—2017年12月438例行冻融复苏胚移植患者临床诊疗资料，探究囊胚不同发育天数冻融复苏胚移植结果的影响。

1 资料与方法

1.1 一般资料

该次研究经医院伦理会同意，方便选取该院接收的438例行冻融复苏胚移植患者为该次研究对象，在征得个体患者同意的情况下按照囊胚不同发育天数将所有患者均分为A组（219例）与B组（219例），A组219例行冻融复苏胚移植患者，年龄在29～37岁，患者平均年龄在（32.6±2.3）岁，不孕时间最短为1年，不孕时间最长为3年以上，患者平均不孕时间在（2.4±0.5）年，患者胚胎移植口内膜平均厚度（9.54±0.56）mm。B组219例行冻融复苏胚移植患者，年龄在28～39岁，患者平均年龄在（31.7±2.1）岁，不孕时间最短为1年，不孕时间最长为3年以上，患者平均不孕时间在（2.3±0.4）年，患者胚胎移植口内膜平均厚度（9.51±0.56）mm。两组患者在年龄、不孕时间、胚胎移植口内膜平均厚度等一般资料，差异无统计学意义（P>0.05）。该次研究均采用双囊胚移植，患者年龄在40岁以内，子宫内膜厚度在8～12 mm，均严格按照相关系统操作常规促排卵治疗后预排卵日，B超引导下经阴道穿刺取卵。

1.2 方法

1.2.1 囊胚培养 对个体患者进行胚胎移植前个体评分，而后给予个体患者常规长方案或短方案进行促排卵治疗，将卵子与精子通过常规体外授精以及卵胞浆内单精子注射技术进行诱使其受精。受精第3天将胚胎移植至G2培养液中进行培养。A组在培养第5天后选择囊胚扩张，透明带变薄，囊胚开始孵化或已完全孵化，上皮细胞结构疏松的囊胚进行冻融。B组在培养第6 d后选择囊胚扩张，透明带变薄，囊胚开始孵化或已完全孵化，上皮细胞结构疏松的囊胚进行冻融.

1.2.2 囊胚冷冻与复苏 将选择好的囊胚放入30 uL培养液中利用激光破膜仪系统对其进行人工皱缩。当囊腔接近完全皱缩时将囊胚放入冷冻平衡液中1 min，而后将其放入ES基础平衡液中2 min，期间用吸管反复吹吸胚胎，使其处于平衡状态，将胚胎放于载体上用液氮进行保存。取出待复苏囊胚，进行解冻抑制。实验组与对照组两组患者均进行胚胎移植，一次移植2枚胚胎，实验组与对照组两组患者解冻1、2 h后均在显微镜下观察单个囊胚恢复情况，并在B超下经阴道行宫腔内囊胚移植术，囊胚移植2周后检测两组患者血人绒毛膜促性腺激素（HCG），若患者血HCG检测为阳性，在移植4周后行B超检查，B超检测时检出孕囊胎心则表示临床妊娠，若妊娠12周后胎停发育或妊娠物排出则诊断为早期流产。

1.3 观察指标

①观察比较A、B两组个体胚胎复张率、妊娠率。

②观察比较A、B两组个体流产率、异位妊娠率。

1.4 统计方法

采用SPSS 18.0统计学软件统计分析资料；其中计量资料用（x±s）表示，进行t检验；计数资料用[n（%）]表示，进行χ2检验；P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 胚胎移植情况比较

观察比较A、B两组个体胚胎复张率、妊娠率，具体情况，A组患者胚胎复张率明显高于B组（97.7% vs 93.6%），A组患者妊娠率明显高于B组（66.2% vs 51.6%），数据差异有统计学意义（P<0.05）。见表1。

2.2 胚胎移植结果比较

观察比较A、B两组个体流产率、异位妊娠率，具体情况，A组患者流产率明显低于B组（6.4% vs 8.7%）、A组患者异位妊娠率明显低于B组（1.4% vs 2.8%），数据差异有统计学意义（P<0.05）。见表2。

3 讨论

胚胎移植又被称为受精卵移植，通过体外受精方式或其他方式得到胚胎，并将其移植到同种生理状态雌性个体体内，从而促使其发育成新个体的一种技术[4-5]。近些年我国接受胚胎移植的个体例数逐渐增多，提高胚胎移植成功率，降低胚胎移植后流产率以及异位妊娠率具有较高的临床意义[6]。囊胚具有着床能力，相关研究显示双囊胚移植与单囊胚移植相比，可有效提高妊娠率，故囊胚移植过程中多移植两个囊胚。除此之外，相关临床研究认为囊胚移植过程中囊胚冻融可在一定程度提高母体内膜对囊胚的耐受性，但目前对囊胚发育天数存在一定的争议。囊胚在冻融前应合理评估囊胚质量，挑选优质囊胚，淘汰质量较差的囊胚，从而保证囊胚正常发育与子宫内膜发育同步。相关研究学者人为囊胚发育时间越短，囊胚细胞中DNA等遗传因子损失也就越少，发育6 d的囊胚与发育5 d的囊胚因所含DNA等微量元素的缺失，其发育速度较慢，发育6 d的囊胚冻融复苏过程中抗冷冻能力较低，可在一定程度上影响胚胎移植成功率，降低胚胎复张率、妊娠率，提高妊娠后流产以及异位妊娠发生率[7-13]。囊胚冻融后是否出现冻融损伤可直接影响囊胚发育潜能，因此在囊胚解冻后1～2 h内应使用显微镜观察囊胚，从囊胚形态上判断囊胚各个细胞细胞膜折光性及透明带完整性，囊胚解冻后观察囊胚外形是目前判断囊胚潜在发育能力的重要标志之一。相关临床研究显示冻融囊胚在解冻后15 min即可观察后囊胚腔增大的现象，解冻后2 h观察囊胚腔扩张情况，会有部分囊胚出现孵出现象，有一部分才刚刚开始扩张，因此囊胚质量及冻融损伤均是影响囊胚腔扩容重要影响因素，在冻融的过程中可出现部分囊胚细胞死亡，从而致使囊胚解冻过程中囊胚腔的生成。冻融囊胚解冻过程中观察囊胚腔扩张直接预示着囊胚冻融后滋养层细胞与囊胚内部细胞团的关系，可是冻融囊胚发育潜能重要标志之一，若囊胚冻融患后滋养层细胞与囊胚内部细胞团分离，冻融囊胚则失去扩张能力以及后续发育潜能，这样的囊胚移植后不能着床，着床后其流产率高。吕兴钰等临床研究显示发育5 d的囊胚苏醒移植后与发育6 d的囊胚相比，其临床结局不存在明显差异[14]。但是有部分研究结论与该次研究结果相反，李城，等临床研究显示发育5 d的的囊胚冷冻复苏胚胎移植后其妊娠率为56.48%，明显高于发育6 d的冻融胚胎妊娠率44.85%，该研究认为发育6 d的囊胚其发育潜能低于发育5 d的囊胚，胚胎发育天数可直接影响胚胎发育速度。该次研究显示发育5 d的囊胚冷冻复苏胚胎移植后其妊娠率为66.2%，明显高于发育6 d的冻融胚胎妊娠率，与李城等临床研究结果一致[15]。该次研究在既往临床研究的基础上比较发育5 d与发育6 d的囊胚冷冻复苏胚胎移植后其胚胎复张率、流产率以及异位妊娠发生率等相关数据，研究具有一定的进步意义。该次研究显示为发育5 d的囊胚冷冻复苏胚胎移植后其胚胎复张率97.7%，明显高于发育6 d的冻融胚胎胚胎复张率，且发育5 d的囊胚冷冻复苏胚胎移植后其流产率为6.4%，明显高于发育6 d的冻融胚胎流产率，且发育5 d的囊胚冷冻复苏胚胎移植后其异位妊娠率为1.4%，明顯高于发育6 d的冻融胚胎异位妊娠率，由此可见，发育5 d后进行冻融胚胎移植与发育6 d后进行冻融胚胎移植相比，发育5 d后进行冻融胚胎移植更有利于胚胎着床。

综上所述，发育5 d后进行冻融胚胎移植能有效提高妊娠率，降低流产以及异位妊娠率，有较高的临床推广价值。

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（收稿日期：2018-11-14）