地肤子配方颗粒的质量标准*

胡辉，翟红伟，刘源才，4

(1.劲牌生物医药有限公司，黄石 435000；2.劲牌有限公司，大冶 435100；3.劲牌研究院，黄石 435000；4.中药保健食品质量与安全湖北省重点实验室，大冶 435100)

地肤子又名独扫子、地埋、地葵、扫把子等[1-2]，始载于《神农本草经》，列为上品。具有清热利湿、祛风止痒之功效，用于小便涩痛、阴痒带下、风疹、湿疹、皮肤瘙痒等证[3]。中药配方颗粒是由单味中药饮片经水提、浓缩、干燥、制粒而成，在中医临床配方后供患者冲服使用。具有剂量小，服用、携带、贮存、运输方便等特点，弥补了传统饮片的不足，是对传统中药饮片的补充。中药配方颗粒相比传统饮片，具有质量稳定、可控的优势[4]。地肤子配方颗粒是藜科植物地肤[Kochiascoparia(L.) Schrad.] 的干燥成熟果实制成的配方颗粒，其有效成分和功效基本保持不变，由于地肤子配方颗粒缺乏可控的质量标准，因此，建立标准具有必要性。本实验参照2015年版《中华人民共和国药典》相关方法[5]，首次建立了地肤子配方颗粒的标准，包括水分、粒度、溶化性、浸出物等的检测及地肤子皂苷Ic的含量测定，并对10批地肤子配方颗粒进行了检测，制定了各检测项的限度，为控制地肤子配方颗粒的质量提供了科学依据。

1 仪器与试剂

1.1实验仪器 德国Thermo Fisher UltiMate 3000系列高效液相色谱仪(包括LPG-3400SDN四元梯度泵，WPS-3000SL自动进样器，TCC-3000RS柱温箱，VWD-3100检测器，DAD-3000检测器)；Sepax HP C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；Agilent SB Aq C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；Waters T3色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；纯水机(ELGA PURELAB Classic，超纯水系统)；电子分析天平(Sartorius SQP QUINTIX125D-1CN，感量0.01 mg)；超声提取器(SK8200HP，上海科导有限公司)。

1.2试剂 地肤子皂苷Ic对照品(中国食品药品检定研究院，含量83.6%，批号：111723-201404)；硅胶G薄层板(青岛海洋化工厂分厂)；乙腈(美国Fisher公司，Lot：172009)；磷酸、乙酸为色谱纯，水为超纯水，其他试剂为分析纯；地肤子饮片(湖北正光九资河药业有限公司，批号：160101，经中国医学科学院药用植物研究所郭宝林教授鉴定)；10批地肤子配方颗粒(样品批号：P20161023、P20161025、P20161027、P20161029、P20161030、P20161101、P20161102、P20161103、P20161105、P20161109，由劲牌生物医药有限公司提供，规格：每袋1.5 g)。

2 方法与结果

2.1薄层色谱鉴别 取地肤子配方颗粒粉末1 g，共3批，加甲醇10 mL，超声处理30 min ，滤过，滤液作为供试品溶液。另取地肤子皂苷Ic对照品，加甲醇制成每毫升含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(通则0502)实验，吸取上述两种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(16：9：2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的紫红色斑点，结果见图1。

2.2检查

2.2.1水分测定 分别取10批地肤子配方颗粒样品粉末(过孔径850 μm筛)约2 g，精密称定，参照《中华人民共和国药典》2015年版四部通则0832项下水分测定法第一法进行测定。地肤子配方颗粒水分测定结果为5.78%～6.50%(表1)，水分平均含量为6.06%，符合《中华人民共和国药典》2015年版四部颗粒剂项下水分要求。

1.地肤子配方颗粒(P20161025)；2.地肤子配方颗粒(P20161030)；3.地肤子配方颗粒(P20161105)；4.地肤子皂苷Ic对照品(111723-201404)

图1 地肤子配方颗粒薄层色谱图

1.KochiaScopariadispensing granules(P20161025)；2.KochiaScopariadispensing granules(P20161030)；3.KochiaScopariadispensing granules(P20161105)； 4.momordin Ic(111723-201404)

Fig.1Thin-layerchromatogramofKochiaScopariadispensinggranules

表1 10批地肤子配方颗粒水分、粒度、装量差异结果

Tab.1Resultsofwatercontent,particlesizeandcontentuniformityfortenbatchesofKochiaScopariadispensinggranules

%

2.2.2粒度测定 取地肤子配方颗粒样品10批，参照《中华人民共和国药典》2015年版四部通则0982第二法双筛分法测定，结果见表1，10批地肤子配方颗粒的粒度均小于15%，符合《中华人民共和国药典》2015年版四部颗粒剂项下粒度要求。

2.2.3溶化性测定 分别取供试品10 g，加入热水200 mL，搅拌5 min ，立即观察，清澈无异物或焦屑，说明10批地肤子颗粒剂的溶化性符合要求。

2.2.4装量差异检查 取地肤子配方颗粒样品10批，参照《中华人民共和国药典》2015年版四部通则0104颗粒剂项下单剂量包装的颗粒剂装量差异方法检查，结果见表1，10批地肤子配方颗粒的装量差异限度均在±8%(每袋1.5 g)范围内，符合装量差异要求。

2.2.5微生物限度检查 按照非无菌产品微生物限度检查，结果见表2，均符合要求：菌落总数≤1000 CFU·g-1；真菌及酵母菌≤100 CFU·g-1；大肠埃希菌不得检出(1 g)。

表2 10批地肤子配方颗粒微生物限度检查结果

Tab.2ResultsofmicrobiallimittestontenbatchesofKochiaScoparidispensinggranulesCFU·g-1

批号菌落总数真菌及酵母菌大肠埃希菌P2016102314938未检出P2016102513735未检出P201610278412未检出P2016102916928未检出P201610306423未检出P201611015457未检出P201611024467未检出P201611034022未检出P201611058333未检出P2016110910758未检出

2.3浸出物含量测定 分别取10批地肤子配方颗粒样品粉末(过孔径850 μm筛)约2 g，精密称定，按《中华人民共和国药典》2015年版四部通则2201项下的热浸法进行测定，用乙醇为溶剂，测得浸出物含量为27.44%～30.95%，平均28.85%。

2.4含量测定

2.4.1对照品溶液的制备 取地肤子皂苷Ic对照品适量，精密称定，加甲醇制成每毫升含0.5 mg的溶液，即得。

2.4.2供试品溶液的制备 取本品粉末约0.1 g，精密称定，加70%甲醇定容至10 mL，放置过夜，超声使其溶解后混匀，用直径0.22 μm针头过滤器滤过，即得。

2.4.3色谱条件与系统适用性实验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-1.3%醋酸溶液(85：15)为流动相；蒸发光散射检测器检测，漂移管温度100 ℃，载气流速2.5 L·min-1。理论板数按地肤子皂苷Ic峰计算应不低于3000。

2.4.4专属性实验 取对照品溶液及供试品溶液，按上述色谱条件进行分析。见图2，结果表明，供试品溶液与对照品溶液在相同的保留时间上都有色谱峰。

1.地肤子皂苷Ic

图2 对照品溶液(A)和供试品溶液(B)HPLC色谱图

1.momordin Ic

Fig.2HPLCchromatographyofreferencesubstanceandtestsample

2.4.5线性关系考察 精密称取对照品地肤子皂苷Ic17.96 mg，加甲醇溶解并定容至25 mL，摇匀，得浓度为600.5824 mg·L-1对照品储备液，取对照品储备液5 mL，加甲醇定容至10 mL，得浓度为300.291 2 mg·L-1的溶液。将该溶液稀释2倍，以后浓度均以上一高浓度为母液次递稀释2倍，即得不同浓度的对照品溶液。在上述色谱条件下进行色谱分析，得到各浓度色谱峰的峰面积，以色谱峰面积(A)的对数为横坐标，相对应浓度的对数(C)为纵坐标建立标准曲线为：Y=0.660 48X+1.480 20，R2=0.999 5，结果表明地肤子皂苷Ic在18.768 2～600.582 4 mg·L-1呈良好的线性关系。

2.4.6精密度实验 取“2.4.5”项中300.291 2 mg·L-1的对照品溶液作为精密度实验的供试品溶液。取该溶液在上述色谱条件下连续进样分析6次，得到各次分析时地肤子皂苷Ic的含量，计算得到地肤子皂苷Ic精密度实验的RSD为0.84%。结果表明仪器的精密度良好。

2.4.7稳定性实验 取“2.4.5”项中300.291 2 mg·L-1的对照品溶液作为稳定性实验的供试品溶液，按上述色谱条件，分别于1，1.5，2，2.5，4，7 h进样，得到各时间对照品的峰面积，根据标准曲线计算地肤子皂苷Ic含量并计算RSD值，得地肤子皂苷Ic稳定性实验的RSD为2.24%。结果表明地肤子皂苷Ic在7 h内稳定。

2.4.8重复性实验 取同一批号配方颗粒(P20161023)，按“2.4.2” 项方法制备供试品溶液6份，分别测定地肤子皂苷Ic的峰面积并计算含量，见表3。地肤子皂苷Ic的平均含量为0.978 6%，RSD值为0.90%。结果表明该方法的重复性良好。

表3 供试品溶液重复性实验结果

Tab.3Dataofrepeatabilitytestoftestsamplesolutionn=6

称样量/mg供试品含量/(mg·L-1)含量/%95.0192.287 40.971 3100.2797.586 60.973 2101.8699.844 20.980 2100.4397.840 50.974 2102.38100.025 60.977 0101.75101.284 40.995 4

2.4.9加样回收实验 取已知含量的同一批样品(P20161023)9份，精密称定，分别精密加入各对照品溶液适量，按“2.4.2 ”项方法，制备供试品溶液，进样测定，见表4。地肤子配方颗粒中添加地肤子皂苷Ic的回收率为102.04%，RSD值为0.98%。结果表明该方法准确可靠。

表4 地肤子皂苷Ic加样回收实验结果

Tab.4DataofrecoverytestofmomordinIcmg，n=9

取样量原有量加入量测得量回收率/%54.350.565 30.384 40.929 894.8254.600.568 40.384 40.933 995.0856.370.531 90.384 40.950 6108.9256.080.534 30.480 51.049 6107.2456.970.551 60.480 51.058 2105.4355.530.548 80.480 51.037 6101.7355.820.557 50.576 61.134 099.9855.950.543 40.576 61.148 3104.9155.070.546 30.576 61.124 6100.29

2.4.10样品含量测定 分别取10批地肤子配方颗粒，按照上述含量测定方法操作，计算每批样品中地肤子皂苷Ic的含量，见表5。结果表明10批样品含量稳定，地肤子皂苷Ic含量测定数据为0.97%～0.99%，根据测定结果，结合生产数据，暂定本品按干燥品计算，含地肤子皂苷Ic不得少于0.20%。

表5 10批样品含量检测结果

Tab.5Resultsofcontentdeterminationontenbatchesofsample%

样品批号第1次第2次平均值P201610230.981 40.978 80.980 1P201610250.989 50.990 10.989 8P201610270.988 70.981 70.985 2P201610290.983 70.980 40.982 0P201610300.988 30.985 40.986 8P201611010.988 90.980 40.984 6P201611020.985 60.979 30.982 4P201611030.987 10.989 50.988 3P201611050.988 00.988 20.988 1P201611090.984 90.981 00.983 0

2.5指纹图谱研究

2.5.1色谱条件与系统适应性实验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.1%磷酸溶液为流动相，按表6中的规定进行梯度洗脱；检测波长为210 nm。理论板数按地肤子皂苷Ic峰计算应不低于3000。

表6 梯度洗脱

2.5.2对照品溶液的制备 取地肤子皂苷Ic对照品适量，精密称定，加甲醇制成每毫升含地肤子皂苷Ic 0.5 mg的溶液，即得。

2.5.3供试品溶液的制备 取本品粉末约0.1 g，精密称定，加20%甲醇定容至10 mL，超声溶解后混匀，用孔径0.22 μm针头过滤器滤过，即得。

2.5.4测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定，即得。

2.5.5系统耐用性实验 取同一样品分别采用同一台Thermo Fisher UltiMate 3000系列高效液相色谱仪、相同的色谱分析条件，不同的色谱柱对同一样品进行色谱分析。分析用的色谱柱如下：Sepax HP C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)、A gilent SB Aq C18色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)、Waters T3色谱柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)。结果各色谱柱分离效果均较好，表明方法具有良好的系统耐用性。

2.5.6专属性实验 取对照品溶液及供试品溶液，按上述色谱条件进行分析。见图3。结果表明，供试品溶液与对照品溶液在相同的保留时间上都有色谱峰。

1.地肤子皂苷Ic

图3 地肤子皂苷Ic对照品(A)、供试品(B)色谱图比较

1.momordin Ic

Fig.3Comparisonofthechromatographybetweenreferencesubstance(A)andtestsample(B)ofmomordinIc

2.5.7精密度实验 取同一供试品溶液连续进样6次。其指纹图谱及相似度计算结果相似度系数>0.99，符合指纹图谱技术要求(≥0.95)，其结果表明仪器精密度良好。

2.5.8稳定性实验 取同一样品溶液分别在1.5，5，9，17，25，33 h进样，其考察图谱及相似度计算结果相似度系数>0.96，符合指纹图谱技术要求(≥0.95)。结果表明33 h内测定，样品溶液稳定。

2.5.9重复性实验 取同一批号的地肤子配方颗粒，按供试液制备方法及检测方法操作6次，其指纹图谱及相似度计算结果相似度系数在0.96以上，符合指纹图谱技术要求(不小于0.95)。其结果表明方法重复性较好。

2.5.10样品检测 对收集的10批地肤子配方颗粒样品进行了指纹图谱考察，图谱见图4，5。结果表明10批样品均能检出地肤子皂苷Ic，且相似度良好(表7，相似度系数>0.95)。

图4 样品的对照图谱

图5 10批样品色谱图

3 讨论

地肤子为常用的中药之一，具有较强的抗病原微生物、抗炎及抗变态反应活性[6]，以地肤子为主的复方制剂可用于治疗皮肤瘙痒等多种皮肤疾病，还能用于治疗尿路感染、急性乳腺炎、前列腺炎等症[7-10]。将地肤子制备成颗粒剂既保留原药材的性味、有效成分和功能，又能提高使用的便捷性和调配的灵活性。

按照《中华人民共和国药典》2015年版相关方法测定地肤子的粒度、水分、溶化性，结果均符合颗粒剂项下要求。

地肤子配方颗粒浸出物的测定采用醇溶性热浸法，以乙醇为溶剂测定，结果10批地肤子配方颗粒的浸出物含量为27.44%～30.95%，平均含量为28.85%，根据结果，醇溶性浸出物按平均值下浮20%，拟定地肤子配方颗粒浸出物不得少23.08%。

表7 相似度测定结果

10批地肤子配方颗粒中地肤子皂苷Ic的含量为0.97%～0.99%，平均含量为0.98%，根据结果，地肤子皂苷Ic含量按平均值下浮20%，拟定地肤子配方颗粒含地肤子皂苷Ic不得少于0.7881%。10批次地肤子配方颗粒指纹图谱，按中药色谱指纹图谱相似度评价系统计算，相似度应不低于0.90。

本研究建立的地肤子配方颗粒质量标准方法操作简便，准确可靠，重复性好，可用于地肤子配方颗粒的质量控制。地肤子配方颗粒指纹图谱的建立，也能用于配方颗粒及所用药材的质量评价和鉴定[11-12]。