人参皂苷Rg3对胃癌（SNU-216）细胞的生长抑制作用

汪彦君 ，胡海燕 ，王 婷 ，陈 蕾

（1.长春中医药大学，长春130021；2.吉林大学第一医院，长春130021）

人参皂苷Rg3是五加科人参属植物的主要有效成分，具有多种生物学活性。近年来研究表明人参皂苷Rg3对肺癌、肝癌、乳腺癌、膀胱癌、前列腺癌、卵巢癌等多种肿瘤的发生、发展有抑制作用。肿瘤血管是肿瘤细胞生长和转移的形态学基础,肿瘤血管除向肿瘤细胞提供营养外,还不断地向人体其它部位输送肿瘤细胞,导致恶性肿瘤的生长和转移。人参皂苷Rg3具有抑制肿瘤转移作用,其机理与抑制抑瘤细胞的粘附、浸润、以及抗新生血管的形成有关[1～5]。本研究探讨人参皂苷Rg3在体外抑制肿瘤细胞的增长，将不同浓度的人参皂苷Rg3作用到体外培养胃癌 (SNU-216))细胞,观察人参皂苷Rg3以不同浓度、不同作用时间对胃癌(SNU-216)细胞的生长抑制效应。为今后人参皂苷Rg3活性研究和抗肿瘤药物的开发提供依据。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 主要试剂

DMEM培养基和胎牛血清购自美国iGbco公司；四甲基偶氮唑盐(MTT)和二甲基亚砜(DMSO)购自美国Sigma公司；胰蛋白酶购自Genview公司；胃癌(SNU-216)细胞购自中科院上海细胞生物学研究所；人参皂苷Rg3吉林大学药学院馈赠；其余试剂均为国产分析纯。

1.1.2 主要仪器

倒置显微镜(OLYMPUS日本)；C02培养箱(SANYO 日本);酶标仪（BioTeK 美国）;离心机(上海安亭)。

1.2 方法

胃癌(SNU-216)细胞用含10%小牛血清的DMEM培养基置于37℃、5%CO2条件下培养箱内培养。人参皂苷Rg3固体用DMSO溶解制成储液,浓度为200mg/mL。

实验分组：I组对照组不给药组;II人参皂苷Rg30.020μmol/L组；III人参皂苷 Rg3 0.040μmol/L组;IV人参皂苷Rg30.080μmol/L组。取对数生长期的胃癌(SNU-216)细胞接种于 96孔平底板(4×103/孔),培养贴壁后,加入不同浓度的药物。 对照细胞加入无血清培养液，每组6个复孔。分别在加人参皂苷Rg3培养 24、48 及 72h 后,加入 MTT(5mg/ml),每孔 20μl,继续培养4h。3500转离心10min,弃上清,每孔加入150μl二甲基亚枫(DMSO),充分震荡,待孔内蓝色结晶完全溶解,酶标仪测定490nm吸光度值(A值),并计算细胞生长抑制率。抑制率=(1-实验组A值/对照组A值)×100%。

1.3 统计学处理

采用SPSS10.0统计学软件处理，t检验判断组间差异显著性，±s表示P＜0.05有统计学意义。

2 结果

三种剂量的人参皂苷Rg3均可以抑制胃癌（SNU-216）细胞生长。抑制率以剂量依赖方式增殖。结果表明：剂量为 0.020、0.040、0.080μmol/L 的人参皂苷Rg3实验组与对照组比较具有显著性差异 (P＜0.01),并且随着人参皂苷Rg3浓度增高,抑制效率也在增强。其中在72 h以内作用时间增加,抑制效率增强,,但在三种剂量的人参皂苷Rg3作用48 h和72 h两组间比较,抑制效率差异较24h相差较大。胃癌（SNU-216）细胞生长抑制率见表1。

表1 人参皂苷Rg3不同药物浓度组对SNU-216细胞的生长抑制率的变化(%,±s,n=6)

表1 人参皂苷Rg3不同药物浓度组对SNU-216细胞的生长抑制率的变化(%,±s,n=6)

注：II组、III组、IV 组与 I组比较 *P＜0.01

样本数n=6抑制率(%)24h 48h 72h 24h 48h 72h OD 值(490nm)±s组别I 对照组 6 1.54±0.11 1.52±0.12 1.55±0.11 0 0 0 II Rg30.020umol/L 6 0.46±0.08 0.42±0.10 0.45±0.10 70.13* 72.37* 70.97*IIIRg3 0.040umol/L 6 0.32±0.08 0.30±0.10 0.33±0.09 79.22* 80.26* 78.71*IV Rg30.080uml/L 6 0.26±0.09 0.22±0.06 0.23±0.06 83.11* 85.53* 85.16*

3 讨论

本实验将人参Rg3作用到体外培养胃癌 （SNU-216）细胞,观察不同剂量人参皂苷Rg3对胃癌（SNU-216）细胞的生长抑制作用。结果表明人参Rg3各种剂量对胃癌（SNU-216）细胞具有明显地抑制作用(P＜0.01),并且随着药物浓度增高抑制效率增强,并呈剂量依赖关系。不同剂量人参皂苷Rg3作用于胃癌（SNU-216）细胞时间方面观察,在72h抑制效率最强。72h抑制效率虽然最强，但是在4h8到72h观察抑制效率，两组间比较,抑制效率变化并没有显著性差异。

人参皂苷Rg3作为从人参皂苷中分离出的一种单体,研究发现人参皂苷Rg3是一种有效的分化诱导剂,服用人参皂苷Rg3可延缓疾病进展,提高患者的生存率〔6～7〕。 近年来胃癌发病率呈上升趋势，人参皂苷Rg3可作为临床治疗胃癌的辅助用药,能够降低化疗药的副作用[8]。许多研究报道,含有人参皂苷Rg3中药制剂能抑制多种肿瘤细胞生长,诱导肿瘤细胞的分化,尤其对胃癌、食道癌、肺癌、肝癌、乳腺癌、膀胱癌、前列腺癌、卵巢癌、白血病等多种肿瘤的发生、发展有明显的抑制作用。本实验结果与文献报道相似，人参Rg3对体外培养胃癌（SNU-216）细胞具有抑制作用。本研究为进一步研究开发利用人参皂苷Rg3作为胃癌治疗药物提供借鉴。