参芝片对酒精所致大鼠实验性肝损伤的影响

张海山 ，卢泽源 ，王雨辰 ，李淑惠 ，于晓风 ，睢大筼 *

（1.吉林大学白求恩医学部，长春130021；2.吉林昆阆医药科技有限公司，蛟河132500）

人参为五加科人参属植物人参（Panax ginseng C.A Mayer）的根，是我国传统名贵中药，已有2000多年的应用历史，被誉为“百草之王”。国内外研究发现，人参能增加肝脏多种物质代谢酶的活性，使肝脏的解毒能力增强，从而提高机体对各种化学物质的耐受力。人参既能增强肝脏的解毒功能，亦具有抗肝损伤的作用[1、2]。灵芝为多孔菌科真菌赤芝Ganoderma Lucidium(Leyss.ex Fr.)Karst或紫芝G.sinensis Zhao,Xu et Zhang的干燥子实体。灵芝在民间有“仙草”之称，为中华传统医药中最负盛名的重要精品，其使用历史长达6000多年。灵芝三帖酸及灵芝多糖对多种理化及生物因素引起的肝损伤均有保护作用，能促进肝脏对药物、毒物的代谢，对于中毒性肝炎有确切的疗效[3、4]。昆阆牌“参芝片”是将我省长白山道地中药材人参和多孔菌科灵芝属真菌赤灵芝合理配伍研制的一种高端保健食品，按“有助于降低酒精性肝损伤危害”功效进行开发。目前尚未见有关将人参与灵芝配伍用于降低酒精性肝损伤的研究报道及保健食品问世。本文通过建立大鼠酒精性肝损伤模型，观察其对大鼠酒精所致实验性肝损伤的保护作用，为开发利用提供实验依据。

1 材料和方法

1.1 动物

清洁级 Wistar大鼠，雄性，体重 210～230g，合格证号SCXK-（吉）2007-0003，由吉林大学实验动物中心提供。

1.2 药品与试剂

参芝片由吉林昆阆医药科技有限公司提供，批号：20161120；以0.5%羧甲基纤维素钠配制成混悬液；水飞蓟宾胶囊由天津天士力制药股份有限公司生产，批号：20161015，以0.5%羧甲基纤维素钠配制成混悬液；总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-c）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-c）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷草转氨酶（ALT）及谷丙转氨酶（AST）测试盒均由南京建成生物工程研究所提供。

1.3 实验方法

雄性Wistar大鼠60只，取10只大鼠为正常组，其余大鼠建立酒精性肝损伤模型[5]：第1~4周灌胃给予40%白酒8g/kg，第5~8周给予50%白酒9g/kg，第9~16周给予50%白酒10g/kg[酒精剂量（g）=乙醇体积（mL）×预配酒精浓度（%）×酒精密度（0.8 g/mL）]。第9周造模大鼠根据体重随机分5组：模型组，参芝片400、800、1600 mg/kg组及阳性药水飞蓟宾胶囊 80 mg/kg组，各组大鼠分别每天灌胃给予相应药物1次，正常组及模型组给予同体积0.5%的羧甲基纤维素钠。给药8周后，大鼠以水合氯醛麻醉，腹主动脉取血，分离血清，检测 TC、TG、LDL-c、HDL-c、MDA 含量及SOD、AST、ALT活性；取部分肝脏制备匀浆，检测TC、TG、MDA含量及SOD活性。

1.4 统计学处理

实验数据以±s表示，多组间对比采用方差分析，两组间比较采用t检验统计分析。

2 结果

2.1 参芝片对酒精性肝损伤大鼠脂类代谢的影响

与正常组比较，模型组大鼠血清TC、TG、LDL-c含量及 TC/HDL-c、LDL-c/HDL-c比值均明显增加（P﹠0.05 或 P﹠0.01），HDL-c 含量明显降低（P﹠0.05）。与模型组比较，参芝片800、1600 mg/kg组和阳性药水飞蓟宾胶囊80 mg/kg组大鼠血清 TC、TG、LDL-c含量及 TC/HDL-c、LDL-c/HDL-c比值均明显降低（P﹠0.05 或 P﹠0.01），HDL-c 含量明显增加（P﹠0.05），结果见表1。

表1 参芝片对酒精性肝损伤大鼠脂类代谢的影响 (±s,n=10)

表1 参芝片对酒精性肝损伤大鼠脂类代谢的影响 (±s,n=10)

与正常组比较 #P﹠0.05，##P﹠0.01；与模型组比较 *P﹠0.05，**P﹠0.01

2.2 参芝片对酒精性肝损伤大鼠血清AST及ALT活性的影响

与正常组比较，模型组大鼠血清AST及ALT活性均明显升高（P﹠0.05或P﹠0.01）；与模型组比较，参芝片800、1600 mg/kg组和阳性药水飞蓟宾胶囊80 mg/kg组大鼠血清AST及ALT活性均明显降低 （P﹠0.05 或 P﹠0.01），结果见表 2。

表2 参芝片对酒精性肝损伤大鼠血清AST及ALT活性的影响 (±s,n=10)

表2 参芝片对酒精性肝损伤大鼠血清AST及ALT活性的影响 (±s,n=10)

与正常组比较 #P＜0.05，##P＜0.01；与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01

2.3 参芝片对酒精性肝损伤大鼠血清和肝组织MDA含量及SOD活性的影响

与正常组比较，模型组大鼠血清和肝组织MDA含量均明显增加，SOD活性明显降低 （P＜0.05或P＜0.01）。与模型组比较，参芝片800、1600 mg/kg组和阳性药水飞蓟宾胶囊80 mg/kg组大鼠血清和肝组织MDA含量均明显降低，SOD活性明显增加（P＜0.05或P＜0.01），结果见表 3。

表3 参芝片对酒精性肝损伤大鼠血清和肝组织MDA及SOD的影响 (±s,n=10)

表3 参芝片对酒精性肝损伤大鼠血清和肝组织MDA及SOD的影响 (±s,n=10)

与正常组比较 #P＜0.05，##P＜0.01；与模型组比较*P＜0.05，**P＜0.01

3 讨论

血脂代谢异常主要是指胆固醇和甘油三脂代谢的紊乱，当然这些都与高密度脂蛋白异常降低和低密度脂蛋白的异常升高有密切的联系。研究发现，TG升高常伴随HDL-c降低，导致胆固醇从周围组织转运到肝脏这种逆向运转减弱，促进动脉粥样硬化形成[5]。TG在肝细胞内大量积聚而导致肝细胞脂肪病变，使肝脏从脂肪氧化器官变为储脂器官，最终导致酒精性脂肪肝的形成[6、7]。本实验中，参芝片能明显降低酒精性肝损伤大鼠升高的 TC、TG、LDL-c含量及 TC/HDL-c、LDL-c/HDL-c比值，并升高HDL-c含量，提示其可清除外周组织细胞中过多的胆固醇，具有调节血脂代谢作用。

ALT存在于肝、肾、心肌、骨骼肌、红细胞和血清中，肝脏含量最高，主要存在于肝细胞胞浆中。肝内ALT含量约为血中的100倍，如果释放的酶全部保持活力，只要1%的肝细胞坏死，就可使血清酶活力增加1倍。AST以心肌含量最高，在肝细胞的胞浆内仅含20%，其余80%存在于线粒体内。血中AST显著增加时，在排除心肌病变后，应考虑肝线粒体大量破坏、肝细胞坏死[8]。血清转氨酶升高反映肝细胞受损，其增高程度越大，病变越严重[9]。本实验中，参芝片能明显降低血清AST、ALT活力，提示其保护肝细胞，降低血清转氨酶作用。

正常机体及肝组织中存在拮抗清除氧自由基系统，主要有超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽-过氧化物酶等酶类以及维生素E、还原型谷胱甘肽、维生素C、硒、疏基化合物等低分子物质。脂质过氧化反应能产生许多初级和次级代谢产物，MDA是其主要产物之一，其含量可反映机体内氧化反应的程度，间接反映细胞损伤程度；SOD可清除超氧阴离子自由基，降低MDA等的产生，保护细胞免受氧化损害，其活力可间接反映机体清除氧自由基的能力，是衡量机体抗氧化能力大小的重要因素[10、11]。本实验中，参芝片能显著明显降低酒精性肝损伤大鼠血清和肝组织MDA含量，增高SOD活性，提示其能提高自由基清除酶的活性，拮抗自由基介导的脂质过氧化反应，从而降低氧化损伤，保护肝脏。