胡椒碱对家兔离体肠平滑肌收缩活动的影响及机制探讨

钟进典 黎庄 刘琼兰 邓子昕 张少莲 林明琴 李佩琼

【摘要】目的：研究胡椒碱对兔肠平滑肌的影响，并探讨其作用机制。方法：制备兔离体肠平滑肌肌条，采用BL一420E生物机能实验系统，观察胡椒碱对肠平滑肌收缩活动的影响;以乙酰胆碱、阿托品分别诱导或抑制肠平滑肌收缩后，观察胡椒碱对平滑肌收缩的影响，以期探明胡椒碱对肠平滑肌作用的机制。结果：胡椒碱呈浓度依赖性对兔肠平滑肌收缩的振幅有抑制作用，对收缩频率无影响。胡椒碱40mM可显著抑制0.1mM乙酰胆碱诱导肠平滑肌的收缩振幅及频率（P<0.05）;同时也可加强0.ImM阿托品对肠平滑肌收缩的抑制作用（P<0.05）。结论：胡椒碱对兔肠平滑肌收缩的振幅有抑制作用，对收缩频率无影响，其机制可能与阻断肠平滑肌上M受体有关。

【关键词】胡椒碱;兔肠平滑肌;收缩活动;影响

胡椒碱（Piperine）为胡椒等常用药物主要活性成分，具有止泻、解痉等多方面的药理作用脚。目前与胃肠道相关的研究主要集中在胡椒碱对小鼠或大鼠体内肠液分泌、胃肠排空的影响上吲，对小肠平滑肌收缩活动及机制研究尚未见报道。本文旨在通过胡椒碱灌流家兔离体肠标本，观察胡椒碱对肠平滑肌收缩活动的影响并探讨其作用机制。

1动物与试剂

1.1動物

新西兰大耳白10只，体重（2_2±0.3kg，雌雄各半。购自湖南斯莱克景达实验动物有限公司，许可证号：SCXK（湘）2009-0004）。

1.2药物及试剂

胡椒碱：批号：DH-23，阿托品：批号：20140601，（均购自上海笛柏化学品技术有限公司）;氯化乙酰胆碱（Ach）（上海麦克林化学技术有限公司，批号：C10052299）。

1.3仪器

BL-420E生物机能试验系统（成都泰盟科技有限公司），平滑肌离体灌流装置（上海豪敦工贸有限公司）。

2方法

2.1离体肠段制备及试验系统调整

取健康大耳白兔，禁食24h，不禁水，击兔头枕部致死后迅速切开腹部，取十二指肠肠管20cm，置于冰冻Tyr0de's液中，洗净肠内容物，将其剪成1-1.5cm的肠段作为实验标本。

打开BL-420E生物机能试验系统，调零，定标，在一通道输入接口处安装张力换能器。调节恒温平滑肌槽，使水温保持在37±0.5°，将台氏液加入预管内，药物管加入Tyr0de's液15ml。取一肠段，上端连接张力换能器，下端连于L一型通气钩上，将肠管放入药物管并固定，调节恒温平滑肌槽，持续通入混合气（96%02，4%C02），60-80个气泡/min，标准负荷lg，平衡30min，待试验系统稳定后，进行试验。

2.2胡椒碱对肠平滑肌自主活动的影响

按项下操作，描记一段小肠的正常收缩曲线后，累计加入胡椒碱吐温溶液，使终浓度分别为10、20、30、40、50mlVl，加药间隔5min，对照组加入等量吐温一80，累加5次，每次间隔5min，观察胡椒碱对小肠平滑肌收缩活动的影响，记录收缩频率及振幅，并计算抑制率。

2.3胡椒碱对乙酰胆碱诱导肠平滑肌收缩的抑制作用

按项下操作，描记一段小肠的正常收缩曲线后，分别加入Ach、阿托品（终浓度均为0.1mM），待曲线上升或下降稳定后再加入胡椒碱40mM，对照组加等量吐温一80，记录加入胡椒碱后收缩活动的频率和振幅，计算抑制率。

2.4数据分析与统计

采用SPSSl7.0进行统计分析，计量资料以x±s表示，进行t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。用区间测量法测量给药前lmin内和给药后3min内收缩曲线的平均振幅和频率，计算公式为：频率（或振幅）抑制率（%）一（给药前平均频率（或振幅）一给药后平均频率（或振幅））/给药前平均频率（或振幅）x100%。

3结果

3.1胡椒碱对小肠平滑肌自主活动的影响

吐温一80对家兔肠平滑肌运动波形无明显影响，胡椒碱在10-50mM的范围内可呈浓度依赖性抑制家兔肠平滑肌运动波形浓度在10mM时，与对照组相比，对肠平滑肌运动的幅度和频率影响很小;浓度在20-50mM时可显著性抑制肠平滑肌活动的振幅（P<0.05），抑制率随浓度的增加而增强，但对收缩频率抑制不明显，结果见表1。

3.2胡椒碱对Ach、阿托品干预后小肠平滑肌收缩的影响

当加入0.1mM ACh后，肠平滑肌正常运动波形急剧升高，频率加快，加入40mM胡椒碱后，可明显降低ACh诱导的肠平滑肌的收缩频率和振幅（P<0.01），

（结果见表2）。当加入0.1mM阿托品后，肠平滑肌正常收缩曲线被抑制，40mM胡椒碱可加强此抑制作用（P<0.05），（结果见表3）。

4讨论

胃肠痉挛的发生机制与神经递质（Ach、组胺、5-HT等）作用于胃肠平滑肌上相应受体有关。Ach激动M受体，引起细胞内IP3、ca2+浓度增加，从而使胃肠平滑肌收缩。阿托品为非选择性M受体拮抗剂，可抑制乙酰胆碱的作用，临床上常作解痉药使用。本试验进行了不同浓度胡椒碱对肠平滑肌收缩活动的影响以及Ach、阿托品分别干预后胡椒碱对肠平滑肌的作用。结果显示，胡椒碱对肠平滑肌收缩幅度有抑制作用，且呈剂量依赖性，但对收缩频率无影响;胡椒碱既能降低Ach诱导的肠平滑肌收缩幅度及频率;也可加强阿托品对肠平滑肌的抑制作用。以上结果推测胡椒碱对肠平滑肌的抑制作用可能与阻断肠平滑肌M受体有关，同时也提示抑制程度与肠平滑肌收缩状态有关，对正常状态的影响不明显，对处在兴奋状态（收缩振幅增大及频率加快）的有显著抑制作用。

（通讯作者：李佩琼）