核桃中乙烯利农药残留分析方法

李 煜，王晨晨

（1.安徽赛如分析检测科技有限公司，安徽 合肥 238080；2.安徽省农产品安全重点实验室，安徽 合肥 238000）

乙烯利纯品为晶状固体，学名为2-氯乙基膦，分子式 C2H6ClO3P，分子量 144.5，CAS 号为16672-87-0。熔点 74 ～75℃，沸点约265℃ （分解），蒸气压 ＜0.01mPa（20℃），密度 1.409 ±0.02 （20℃，原药），溶解度水约1kg/L（23℃），溶于乙醇，甲醇，异丙醇，丙酮，乙酸乙酯和其它极性有机溶剂，微溶于非极性有机溶剂如苯，甲苯，不溶于煤油，柴油，pH＜3.5 时水溶液中稳定，随pH值升高。水解释放出乙烯，对紫外光敏感，75℃以下稳定。乙烯利是促进成熟的植物生长调节剂。是促进成熟的植物生长调节剂。在酸介质中十分稳定，而在pH4 以上，则分解释放出乙稀。一般植物细胞液的pH皆在4 以上，乙稀利经由植物的叶片、树皮、果实或种子进入植物体内，然后传导到起作用的部位，便释放出乙稀 ，能起内源激素乙稀所起的生理功能，如促进果实成熟及叶片、果实的脱落 ，矮化植株，改变雌雄花的比率，诱导某些作物雄性不育等。乙烯利广泛应用于番茄、蘑菇、苹果、桃等水果和蔬菜的催熟，也逐渐应用于大米等谷物以及核桃等坚果类。

近年来，乙烯利在果蔬、谷物中的残留分析方法已有大量文献介绍，但在核桃等坚果中的残留分析方法还未见报道，因此制定一种坚果中残留量的测定方法十分必要。为此，研究建立了一种LC-MS/MS 方法测定核桃中乙烯利残留量的方法。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂 色谱乙腈、色谱甲醇、甲酸（色谱纯）、PSA（粒径 40 ～63μm 60A）、C18-SPE小柱 （500mg/3mL）。

1.2 标准品 乙烯利标准品：纯度96.0%。

1.3 仪器设备 超高效液相色谱串联质谱仪、十万分之一电子天平 （sartorius BT25S 型）、电子天平 （B5002）、水浴恒温振荡器 （WHY-2）、超声波清洗器 （KQ-600B型）、低速离心机 （SC-3610）、玻璃仪器气流烘干器 （KQC）、容量瓶和玻璃移液管等。

1.4 试验方法

1.4.1 标准溶液配制 准确称取一定量的乙烯利标准品，用色谱乙腈溶解定容至10mL，转移到棕色标准品储备瓶中保存，然后再稀释至100mg/L备用。将100mg/L的乙烯利标准溶液用其核桃空白基质稀释至2 000、1 000、500、200、100、50、20μg/L的标准溶液。在质谱条件下进行测定，以乙烯利标准工作溶液进样浓度为横坐标，峰面积为纵坐标绘制标准曲线。

1.4.2 添加回收试验 准确称取处理好的核桃空白样品5.00g，分别添加乙烯利标准工作液浓度，添加浓度为 0.1、0.5、5mg/kg，共计 3 个添加水平，每个添加水平5 个平行，同时测定空白样品浓度。

1.4.3 样品提取进化方法 准确称取处理好的核桃样品 5.00g于 50mL 离心管中，加入20mL0.1%甲酸溶液，超声波提取20min，机械振荡提取 30min，然后以 4 000 r/min 离心 5 min，取5mL上清液转移至10mL离心管中，12 000 r/min 离心 10 min，待净化。

依次用3mL甲醇、3mL纯水活化C18-SPE小柱，待柱子流尽干，移取4mL上述提取液于C18-SPE小柱，弃去前面1mL淋洗液，然后收集于15mL离心管中，混匀，过0.22μm亲水滤膜，供 LC-MS/MS 测定。

1.4.4 仪器测定条件 色谱柱：Waters ACQUITY UPLC R BEH C18，100mm ×2.1mm ×1.7μm；柱温：40℃；流动相：水/甲醇 （V/V=98/2） +0.1%甲酸：0.1%甲酸甲醇=95：5；流速：0.3mL/min；进样量：10μL。

电离方式：ESI-；细管电压：2.5kv；离子源温度：150℃；锥孔反吹气流量：50L/Hr；脱溶剂气温度：350℃；脱溶剂气流量：700L/Hr；监测模式：MRM模式

其他质谱条件如下：

*定量离子

2 结果

2.1 残留量及回收率计算 采用外标法定量。待测样液中乙烯利的响应值应在标准曲线线性范围内，超过线性范围则应稀释后再进样分析。计算公式如下：

测定结果保留两位有效数字，其中空白样本未检出。

式中：

X——样本中乙烯利残留量，mg/kg；

c——由校准曲线得出的测定液中乙烯利的浓度，μg/mL；

V——测定液定容体积，mL；

f——稀释倍数；

m——样本质量，g。

式中：

y——回收率，%；

X——空白样本加标后的实际测定值，mg/kg；

X0——空白样本加标后的理论测定值，mg/kg。

2.2 添加回收试验结果

2.2.1 标准溶液测定结果 在超高效液相色谱串联质谱仪上检测标准工作溶液2 000、1 000、500、200、100、50、20μg/L。结果表明，此浓度范围内质谱峰面积与浓度呈良好的线性关系，乙烯利的准曲线方程为：y=9.464 5x-133.24，R2=0.999 9，结果 （表 1）。

表1 标准溶液测定结果

2.2.2 添加回收试验结果 称取处理好的核桃空白样品5.0g，分别添加乙烯利标准工作液浓度至0.1、0.5、5.0mg/kg，按以上方法提取净化检测，每个添加浓度5 次重复，回收率结果（表2）。

表2 乙烯利在核桃上的添加回收试验结果

乙烯利在0.1 ～5.0mg/kg添加水平，平均回收率为 94% ～105%，相对标准偏差为0.82%～2.64%。以添加回收试验中最小添加浓度为定量限，乙烯利的定量限为0.1mg/kg。

3 讨论与分析

对不同浓度的乙烯利的标准曲线进行重复检测，其重现性很好，线性关系符合农作物中农药残留准则要求。核桃按 0.1、0.5、5.0mg/kg进行方法的添加回收试验，结果表明，乙烯利在核桃中的平均回收率为94% ～105%，相对标准偏差为0.82% ～2.64%。以添加回收试验中最小添加浓度为定量限，乙烯利的定量限为0.1mg/kg。该方法线性良好、灵敏度高、正确度和精密度好，满足农作物中农药残留试验准则的要求。均符合农作物中农药残留准则要求。