2015-2016年北京市顺义区人源性副溶血性弧菌耐药性分析

李湛 李颖 荆红波 王彦波 朱美娟 张赫

副溶血性弧菌(vibrioparahaemolyticus，简称VP)主要来自鱼虾蟹等海产品及盐腌制品中，进食含该菌食物后可引起食物中毒[1]。由于水产养殖业及临床上抗生素的不规范使用导致副溶血性弧菌耐药性日益严重[2]，给临床治疗带来很大难度，严重威胁着人类健康。为了更好地了解感染性副溶血弧菌的耐药情况，现采用肉汤稀释定量的药敏检测方法，旨在对北京市顺义区人源性副溶血性弧菌的耐药状况及敏感抗生素是否存在,以及耐药风险进行分析。

1 材料与方法

1.1标本来源 标本分别来自2015年1月-2016年12月顺义区医院和顺义区空港医院肠道门诊腹泻病人粪便，两年间共采集粪便标本768份，标本采集均由临床医护人员按照规范操作方法，由腹泻病人留取粪便，采用无菌有盖容器，取有脓血、黏液部分的粪便3 g以上，液体粪便取3 mL以上置于无菌瓶中，立即送检，送检时间不超过1 h。

1.2试剂及实验方法

1.2.1试剂： 增菌使用3%NaCl碱性蛋白胨水，分离使用TCBS(硫代硫酸盐-柠檬酸盐-胆盐-蔗糖琼脂培养基)和科马嘉弧菌显色培养基分别购自北京陆桥(生产批号：1604127)、法国科马嘉公司(生产批号：P000410)。

1.2.2标准菌株： 大肠埃希菌ATCC 25922。

1.2.3实验方法： 菌株分离按照感染性腹泻诊断标准(WS/T 271-2007)进行。

1.2.4药敏试验： 采用上海兴佰生物技术公司生产的革兰阴性需氧菌药敏检测板检测(货号：D-016XS)，依据其说明书的检测原理及操作步骤完成：即每种抗生素都设有一系列倍比稀释浓度的抗生素试剂，通过加入待检细菌肉汤培养液稀释的菌悬液，经18～20 h 孵育后，用肉眼判读的方法对药敏板条进行读数，经数据分析得到最低抑菌浓度(MIC)值，并根据2015年美国临床实验室标准化委员会(CLSI)的相应标准获得相应敏感(S)、中度敏感(I)和耐药(R)的结果(表1)。

表1 46株副溶血弧菌药敏试验结果

注：复方磺胺全称为复方磺胺甲恶唑，为复方制剂，含活性成分磺胺甲恶唑和甲氧苄啶。

2 结果

2.12015-2016年标本检出情况 2015年和2016年分别采集383份和385份，共计768份粪便标本。2015年和2016年致病菌阳性标本分别为59份和109份，共计168株致病菌，包括致泻大肠埃细菌，志贺菌，沙门菌，空肠弯曲菌，副溶血性弧菌，腹泻病人感染致病菌的总阳性率为21.88%。2015年有11份为副溶血弧菌感染的腹泻病人标本，副溶血弧菌阳性率为2.87%；2016年副溶血弧菌阳性标本为35份，阳性率为9.91%。两年间共计有46株是副溶血弧菌阳性标本，感染副溶血弧菌的腹泻病人占总阳性率的27.38%。

2.2性别及不同年龄组副溶血弧菌检出情况 根据分析发现男性腹泻病人感染副溶血弧菌的阳性率为6.99%(33/472)，女性阳性率为4.39%(13/296)，感染副溶血弧菌的腹泻病人的年龄在22岁～74岁之间，青年组(18～30岁)、中年组(31～59岁)和老年组(≥60岁)分别占感染副溶血弧菌腹泻病人的52%、46%和2%。

2.3药敏结果分析 通过药敏实验，发现这46株副溶血性弧菌中有四株耐药株，主要耐药的抗生素是氨苄西林，耐药率为6.52%，共3株，且有41株副溶血弧菌对氨苄西林药敏结果是中度敏感，2株敏感。其次头孢西丁的耐药率是2.17%，共1株，其余45株均敏感。有1株对氨苄西林和舒巴坦联合抗菌药是中度敏感，其他45株为敏感。46株副溶血弧菌对其他八种抗生素中敏率和耐药率均为0(表1)。比较两年间的副溶血弧菌耐药情况发现，对氨苄西林耐药的三株菌都在2015年，而2016年几乎都对氨苄西林中度敏感。在2015年副溶血弧菌都对氨苄西林和舒巴坦敏感，但在2016年出现一株菌对两种抗生素中度敏感。在2015年出现一株对头孢西丁耐药，但其余都对其敏感，而在2016年有两株菌对头孢西丁中度敏感，无耐药株产生(表2)。根据不同类别的抗生素，对这十一种抗生素进行分类比较发现，副溶血弧菌对氨基糖胺类的庆大霉素，四环素类，氯霉素类，喹诺酮类的环丙沙星以及磺胺类的复方磺胺都很敏感，没有耐药株。而对β-内酰胺酶类的抗生素出现耐药菌株(表3)。

表2 2015-2016年副溶血弧菌耐药株情况比较(株)

表3 副溶血弧菌对β-内酰胺酶类抗生素的耐药情况比较(株)

3 讨论

3.1副溶血弧菌是我国沿海地区食物中毒和夏季腹泻的重要病原，我国由副溶血性弧菌引起的食物中毒在微生物性食物中毒中位居第三，沿海地区的城市更是位居细菌性食物中毒的首位[1-4]。北京市顺义区这次的调查结果，与三亚市、杭州市以及广东省等沿海地区食物中毒病人副溶血型弧菌耐药性研究相符，即都对青霉素类和头孢菌素具有很高的耐药率[5-7]。部分地区副溶血弧菌对氨基糖苷类的链霉素和庆大霉素有一定的耐药率，其中杭州市一些食物中毒的病人对环丙沙星有较低耐药率[6]。而顺义区这次调查的菌株对上述抗生素几乎都敏感，说明副溶血弧菌的耐药性差异可能与地区、医院和养殖业使用抗菌素的习惯及经验用药有关，以及菌株来源不同等因素综合所致。

3.2研究发现，男性腹泻病人要略多于女性，感染副溶血弧菌的腹泻病人多集中在青年和中年，两者总和高达98%，这与同期顺义区相关文献结果差异不大[8]。从耐药情况来看，46株感染性副溶血弧菌仅对氨苄西林和头孢西丁耐药，耐药率都低于10%，对其他抗生素都是敏感的，这与近年来通州区情况大致相同[9]，耐药情况与同期北京市调查结果相比较轻[10]，2016年调查顺义区副溶血弧菌耐药情况[11]，发现只对头孢类完全耐药，可以看出顺义区人源性副溶血性弧菌的耐药程度大致不变且并不是很严重。

3.3调查结果显示，氨苄西林的中敏率为89.13%，而敏感率仅为4.35%，菌株中敏率较高的情况需要重视。头孢西丁的中敏率为0，敏感率为97.83%，说明菌株对头孢西丁的耐药情况远没有氨苄西林严重。调查中还发现氨苄西林在2015年出现三株耐药，而2016年未产生耐药株。2015年存在一株头孢西丁耐药株，但在2016年也没有耐药株，需要加强监测副溶血弧菌对头孢西丁的耐药情况，查阅近几年文献结果发现副溶血性弧菌对氨苄西林都有耐药[12-13]；文献中大多对头孢唑林、头孢噻吩等第一代头孢菌类抗生素也具有较高耐药率。头孢西丁是一种半合成制得的抗生素，归类于第二代头孢菌素，文献报道耐药程度低于第一代头孢菌素和氨苄西林类，耐药株很少[14-15]。通过查阅北京地区相关文献，在调查北京市副溶血弧菌耐药情况，发现一代头孢已达到耐药，二代头孢达到中度敏感，建议临床使用三代头孢[16]。而此次出现1株，由于耐药谱很窄，尚不能说明副溶血弧菌也对其产生耐药。临床上经常使用舒巴坦氨苄西林联合抗菌，此次调查出现对这两种抗生素中度敏感的菌株，这在2016年房山区对副溶血弧菌的调查中也有显示[17]，菌株出现多重耐药现象，但顺义区还未出现多重耐药菌株的情况，但也需要提示临床上治疗由感染性副溶血性弧菌引起的腹泻应注意此类抗生素的使用。

3.4此次使用的肉汤稀释定量测定方法，使菌株可以对每种抗生素的敏感耐药情况进行定量，比纸片定性法更加准确，精确到菌株对某种抗生素的每一个稀释度的情况。建议临床应以肉汤稀释的药敏试验结果来选择最佳治疗方案，既合理使用抗生素，又可以监测地区副溶血弧菌的耐药情况，以此来减少副溶血性弧菌产生耐药菌株的风险。