奥沙利铂长循环脂质体制备工艺优选

金晓野

摘  要：目的：根据试验数据选择奥沙利铂长循环脂质体制备最优工艺;方法：通过乙醇注入法制备药品，通过包封率指标判断工艺适宜性，再经由高效液相色谱法测定脂质体含量;结果：卵磷脂与胆固醇质量以5：1混合，奥沙利铂药物使用量为10mg，聚乙二醇药品选用0.05%浓度是最佳制备方法;结论：此种制备工艺较便捷，且流程简单，在脂质体制备过程中，稳定性较高，满足大批量生产的需求。

关键词：奥沙利铂;长循环脂质体;制备工艺

奥沙利铂是金属抗肿瘤药品，也是现阶段临场医疗中较常见的药物。虽然此类药物抗肿瘤效果明显，但是药品质量的差异性极易对患者身体造成不同程度的影响，甚至会促使其他病情恶化。根据以往资料可知，脂质体能够有效降低药品毒性，并能够使药品具备缓释性，使抗肿瘤药品的使用效果更加显著，使患者用药更加安全。因此，脂质体的制备应得以关注。

一、试验仪器与药品

试验仪器：高效液相色谱仪、集热式恒温加热磁力搅拌机、电子分析天平、高速离心机。

试验药品：奥沙利铂药品、奥沙利铂、聚乙二醇药品（化学纯）、无水乙醇（分析纯）、胆固醇、卵磷脂、甲醇（分析纯）。

二、试验方法与结果

1.色谱条件

色谱柱：C18（4.6mm×250mm，5μm）;流动相：甲醇-水（10∶90）;流速1.0mL·min-1;检测波长250nm;柱温：25℃;进样量：20μL。理论板数按奥沙利铂峰计算不低于2000。

2.脂质体的制备方法

采用乙醇注入法制备奥沙利铂长循环脂质体。精密称取处方量卵磷脂、胆固醇于50mL烧杯，加入无水乙醇10mL，使之完全溶解，量取10mL含一定浓度纯化水，加入精密称取的处方量奥沙利铂，置三颈瓶。水浴温度50℃，在磁力搅拌下用一次性无菌注射器，将上述油相缓慢匀速注入水相，恒温搅拌2h除去乙醇，将脂质体混悬液转移至10mL量瓶定容，过孔径0.22μm微孔滤膜，即得到最终产品。

3.药品包封率检测

（1）供试品制备

借助电子天平仪器精密称取奥沙利铂药品，加入纯化水中搅拌，确保溶解且稀释均匀，以此得到一定浓度的奥沙利铂溶液，期间，提取出定量溶液，经由流动相稀释后，可制得一定浓度的奥沙利铂供试品溶液。

（2）线性关系分析

称取奥沙利铂对照品0.102g，置于100mL量瓶，加纯化水溶解并稀释至刻度，摇匀，得每毫升含1.021mg的溶液。精密量取上述奥沙利铂溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0mL，分别置50mL量瓶，加流动相稀释至刻度，摇匀，分别得到20.42，40.84，61.26，81.68及102.1μg·mL-1溶液。分别精密吸取20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。以浓度（C，μg·mL-1）为横坐标，峰面积（A）为纵坐标，进行线性回归，得奥沙利铂标准曲线。回归方程为：A=5.3849C-3.68（n=5，R2=0.9999）。结果表明奥沙利铂在20.42～102.10μg·mL-1范围内浓度与峰面积呈线性关系。

（3）专属性分析

分别取空白脂质体、奥沙利铂对照品溶液和载药脂质体1mL，用甲醇定容至10mL，超声处理30min，取20μL进样。奥沙利铂在该色谱条件下于5min处出峰，而空白脂质体对奥沙利铂含量测定无干扰。

（4）精密度分析

取供试品溶液20μL进样，测定奥沙利铂峰面积，重复5次，记录色谱图。结果峰面积RSD为0.84%。

（5）重复性试验

根据上文供试品溶液制备方法，制备5份溶液，经由高效液相色谱法进样测定，记录色谱图。结果峰面积RSD为0.49%。

（6）稳定性分析

取奥沙利铂对照品溶液，在0，12，24，36，48h分别进样20μL，记录色谱图，计算得峰面积RSD为0.27%，表明奥沙利铂长循环脂质体在48h内稳定性良好。

（7）加样回收率

分别精密量取奥沙利铂长循环脂质体溶液（稀释至奥沙利铂浓度约20μg·mL-1）1mL，加入1，5，10mL奥沙利铂对照品溶液（100μg·mL-1）中各5份，甲醇破坏脂质体，用流动相稀释至25mL，HPLC法测定奥沙利铂含量，计算得平均加样回收率分别为99.79%，100.35%，98.80%，平均RSD为0.62%。

4.制备工艺优化方法

根据药品包封率数据可知不同制备工艺潜在的影响，通过检测脂质体质量便能够得知具体的工艺优化方向。

（1）磁力搅拌速率

此种工艺优化研究是基于不同搅拌速度分析对药品质量的影响，分析最适宜的速度数据。在此期间，可将试验分为多组，确保乙醇注入法频率与速率保持一致，将磁力攪拌速率分别设置为10、20、30r·min-1。经由观察可知，在10r·min-1的搅拌速率中，出现黄色悬浮物，如此可证明部分油相并未与纯化水反应完全;而在30r·min-1的速率中，可知有大量泡沫产出，不利于药品制备质量的保持。因此，20r·min-1的磁力搅拌速率为最优方案。

（2）水浴温度选择

在水浴温度选择方面，可设置多组水浴环境，将试验品分别加入40、50、60℃的平台内，期间保持水浴温度避免温度波动性，以便保障试验质量。而经过药品包封率检测可知，40℃的水浴环境中，溶液的清澈程度较低，在脂质体形成方面并不完全。而处于60℃时，经过检测可知内部磷脂氧化速率会加速提升，如此同样会对脂质体的形成造成影响。因此可知水温度在50℃环境中最适宜。

（3）溶液注射速率

为明确溶液注射速率对脂质体制备的影响，本次试验选用乙醇注入法制备脂质体。在其他环境等因素保持一致时，设立3组试验对象，分别将类酯溶液以1、5、10mL·min-1的速度注射入药品内，经由检测可知包封率分别为53.24%、39.64%与9.62%。

根据试验资料可知，类酯溶液注射速度越快，脂质体形成质量越低，其中絮状沉淀也更多;而类酯溶液注射速度越慢，形成的脂质体稳定性更好，并且包封率也会得以提升，因此选择1mL·min-1的速率更贴合药品制备要求。

三、试验结论分析

根据高效液相色谱法检测数据可知，上文乙醇注入法在制备奥沙利铂长循环脂质体过程中具备操作简单、工艺便捷、脂质体均匀且可大批量生产的优势。同时，药品性质与浓度、脂质体制备方法与流程、脂质体元素成分与稳定剂浓度，都会影响脂质体载药质量，因此为提高药品包封率，则通常需要药品类别选择适宜的稳定剂与分散剂结构，以此保障脂质体稳定性。而根据数据可知，奥沙利铂长循环脂质体制备最优工艺是卵磷脂与胆固醇质量以5：1混合，奥沙利铂药物使用量为10mg，聚乙二醇药品选用0.05%浓度。

另外，在制备脂质体时，必须以包封率作为主要核查指标，通过有机溶剂萃取法或破坏发将脂质体内药物释放，以此更准确的判定内部药物含量，以此准确测得相色谱峰，使药物回收率等数据贴合药品制备要求，以便药品服用安全性得以保障。

四、结语

奥沙利铂长循环脂质体制备工艺的有效选择，不但能够为后续奥沙利铂药品的使用奠定更扎实的医学基础，借助脂质体的应用有效降低药品对患者身体的损害，同时凭借脂质体稳定性等数据，更便于把控药品制备质量，使临床医疗工作的开展更具详细的数据参照。故而，在论述奥沙利铂长循环脂质体制备工艺优选期间，必须明确奥沙利铂药品服用的潜在风险，并基于不同风险类型与药物元素拟定详细的工艺方案，才能使后续药品服用安全性得到保障。

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