关于土壤及植被中真菌多样性分析的意义及其方法

朱继承 刘子超

一、意义：

1）真菌在自然界的作用：真菌的种类多，数量大，繁殖快，适应性强，分布广，与人类关系密切，是一类丰富的生物资源。真菌具有高度分解和合成多种复杂有机物质的能力，特别对分解纤维素，半纤维素和木质素等更具特色。因而在自然界，它们与细菌等共同协力，进行着缓慢而持续不断的转化作用，将动物、植物，特别是植物的残体分解为简单的物质，重新归还给大自然，成为绿色植物的养料，帮助植物界自我施肥，使绿色植物不断地茂盛生长，间接地为人类提供必需的生活资源。同时，绿色植物光合作用所需要的二氧化碳，主要来自于有机物的分解，而植物光合作用所释放的氧，又是人和动物所必需的。

2）真菌对近代工业的作用：真菌除了应用于酿酒、制酱和其他发酵食品外，在近代工业、农业和医药业等方面作用也很可观。由于真菌能产生多种酶，它在工业方面发挥非同小可的作用，涉及到国民经济的各个领域，从甘油发酵，有机酸和酶制剂生产，到纺织、造纸、制革和石油发酵等等，均有方方面面的用处。例如，用其发酵作用，可以生产许多有机酸，其中最主要的有：柠檬酸、乳酸、葡萄糖酸等。这些有机酸在食品、化工、医药等方面都有很多用处。

现已发现400多种酶与真菌有关。可是酶工业中，能真正利用真菌制成的酶制剂仅有十多种，这些制剂已广泛应用于食品、制药、纺织和制革等部门。工业上采用重要的真菌酶类有淀粉酶、蛋白酶、葡萄糖氧化酶、果胶酶、纤维素酶、脂肪酶和核糖核酸酶等。

3）真菌在农林业中的作用：真菌在农业和林业生产，同样发挥极大的作用，它除了供植物光合作用所需的二氧化碳外，有的真菌能与植物结成“菌根”，帮助植物吸收水分和养料;有的真菌则能消灭或抑制危害植物的其他生物，如昆虫、线虫和一些对植物有害的真菌等;有的能产生生长素和抗生素，以促进动物、植物的生长发育。

4）真菌在制药业中的作用：早在本世纪40年代，人们就已经认识真菌是药业的好原料和助手

5）真菌引起的人类疾病：引起人类疾病的真菌只占真菌的一小部。据文献报道，可使人致病的真菌约有278种。致病真菌分为两大类，一类是病原性真菌，另一类是条件致病性真菌。后者平时不致病，在机体免疫力降低时才可致病。按真菌侵犯人体组织和器官的不同，又将真菌分为引起皮肤病的浅部真菌，引起深部组织器官疾病的深部真菌。寄生或腐生于角蛋白组织的表皮角质层、毛发和甲板的真菌统称为浅部真菌。它们引起的疾病统称为浅部真菌病，简称为癣。目前已报道的皮肤癣菌有40多种，其中一部分仅感染动物，确认对人类致病的有20余种。上述的皮肤丝状真菌分别属于下面三个属：即毛癣菌属、小孢子菌属和表皮癣菌属。侵入表皮以外的真皮、粘膜和内脏组织或器官的真菌，统称为深部真菌。它们引起的疾病统称为深部真菌病。随着科学的发展和新技术向医学的渗透，虽然临床诊断技术和治疗方法不断更新和增多，然而深部真菌病亦有增多的趋势。侵入深部器官引起深部真菌病的有隐球菌、念珠菌、球孢子菌、组织胞浆菌、孢子丝菌、着色真菌、鼻孢子菌、曲霉和毛霉等。它们虽然不像细菌或病毒那样，普遍引起的疾病，但却有地区流行特点，而且在人群中易发生隐性感染。

6）真菌引起的霉腐：在温暖潮湿地区，有些真菌能引起粮食、饲料、食品、水果、蔬菜、肉类和蛋品等发霉变质，不仅造成经济损失，而且会引起人畜中毒或其他损害，有些且能使实验动物致癌。

二、研究现状：

1）对于真菌的研究价值大多体现在药用方面。虽然我国利用真菌作为药物具有悠久的历史，但真菌在药物中所占比例很少，在我国近一万种中药材中，植物药占绝对优势，其次为动物药，传统上没有真菌药，而是将真菌药归属于植物药。 所以，对于真菌多样性分析，有利于发现新的菌株，更有利于对药用菌的研究。

2）除药用外，真菌在食用，养殖方面也有着很大的潜力，研究真菌多样性有利于发现新的可食用菌。

三、步骤：

1、分离：取待测地区的土壤样品若干克，带回实验室内保存。制作PDA培养基若干，于培养基内滴加少量乳酸，以抑制细菌生长，备用。取5只三角烧瓶，每只放90ml蒸馏水，封住瓶口，同时取35只试管，每只试管放9ml蒸馏水，塞住口，和上述三角烧瓶一同放入高温高压灭菌锅中进行灭菌。完成后，取土壤5份，每份10克，于上述三角烧瓶中，震荡均匀，取上清液1ml加入试管1中，震荡均匀，再从试管1中取1ml加入试管2中，震荡均匀，重复上述操作至試管7。此时试管1～7的菌的浓度分别为10-2，10-3～10-8。再从试管1中取少量液体，用涂布法接种于事先准备好的PDA培养基中，编号（编号时注意写明制作日期及制作者姓名，以免混淆），放入25摄氏度的恒温培养箱中培养数日。

植被中真菌的分离（以竹子为例）：取目标地区的竹子少许，用酒精喷于表面，再用蒸馏水冲洗，以达到除菌的效果。在无菌操作台下，用刀削去竹子表皮，取内部新鲜部位少许，接种于PDA培养基中，分别编号，放入恒温培养箱中培养。

2、纯化：培养数日后，将上述培养皿取出观察，观察菌的生长状况，待其生长旺盛时取出。如果污染了细菌，则放弃该平板（细菌菌落为湿润光滑状，且生长速度普遍比真菌迅速）。放在显微镜下，观察其无杂菌的部分，再挑出无杂菌的一小块接种于新的培养基内。如果是土壤中的真菌，可以将整个一小块菌落全部挑出来。继续放入恒温培养箱中培养、观察。

3、鉴定：待上述真菌生长旺盛后，放在显微镜下观察其结构，并判断其属于何种菌。真菌的鉴定主要从其繁殖结构上判断。