黄刺玫果提取物对小鼠急性酒精性氧化应激反应的影响※

2019-03-15薛润苗张文琴王晓燕

中国药物经济学 2019年2期

薛润苗张文琴王美王晓燕

酒精性肝病是我国常见的肝脏疾病之一[1]，其发病涉及多种机制，但脂质过氧化是酒精性肝损伤的早期表现[2]。黄刺玫果为蔷薇科蔷薇属野生落叶灌木黄刺玫（Rosa xanthina Lindl.）的成熟果实，广泛分布于我国北方各省的山区和丘陵地带[3]。众多研究表明，刺玫果具有抗氧化、抗衰老、增强免疫力等多种生物学功能[4-7]。本研究探讨黄刺玫果提取物的抗氧化作用，为黄刺玫果开发功能性食品提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 样品黄刺玫果提取物（由本课题组自行制备：挑选、清洗黄刺玫鲜果→破碎→料液比为1∶5的70%乙醇提取1.0 h→过滤→滤液浓缩至目标浓度→6000 r/min离心15 min→冷冻干燥→粉碎）。

1.1.2 实验动物昆明小鼠50只，清洁级，雄性，体重18～22 g，购自中国食品药品检定研究院，许可证号：SCXK（京）2014-0013，实验环境温度（22.0±2.0）℃，相对湿度（50±10）%。

1.1.3 主要仪器与试剂BSM-220.3电子天平（上海卓精电子科技有限公司）；高剪切分散乳化机（上海弗鲁克流体机械制造有限公司）；TGL-18台式高速冷冻离心机（四川蜀科仪器有限公司）；全自动生化分析仪（Awareness Technology，inc.Palm City，FL34990）；Infinite M200 Pro多功能酶标仪（Chemwell Industry Co.,Ltd）。

总蛋白定量试剂盒（货号：A045-4，批号：20170413）；丙二醛（MDA）试剂盒（货号：A003-1，批号：20170323）；超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒（货号：A001-3，批号：20070413）；谷胱甘肽（GSH）试剂盒（货号：A006-2，批号：20170325）；蛋白质羰基含量测定试剂盒（南京建成生物工程研究所，批号：20170414）；无水乙醇（分析纯，天津市北辰方正试剂厂）；乙酸乙酯（分析纯，天津市风船化学试剂科技有限公司）；0.9%氯化钠注射液（石家庄四药有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 动物分组适应性饲养7 d后，将小鼠随机分为5组，每组10只，分别是空白对照组、模型组及黄刺玫果提取物低剂量组、中剂量组、高剂量组。

1.2.2 模型制备每日1次经口灌胃给予低剂量组、中剂量组、高剂量组小鼠黄刺玫果提取物500、1000 、2000 mg/kg（相当于人体推荐剂量的5、10、20倍），空白对照组及模型组给予等体积蒸馏水。连续灌胃30 d，每3天称1次体重，按体重调整给药剂量。第31天造模，5组小鼠禁食16 h（过夜）后1次性灌胃给予50%乙醇12 ml/kgBW（空白对照组不作处理，不禁食）。

1.2.3 样品采集给予乙醇6 h后，摘眼球取血，以3500 rpm 离心15 min（离心半径为13.5 cm），离心后分离血清备用。解剖取肝脏，剔除筋膜后在预冷的灭菌 0.9%氯化钠注射液中漂洗并用滤纸吸干水分，切取同一部位肝组织0.4 g加3.6 ml灭菌冰0.9%氯化钠注射液以3500 rpm 离心15 min，离心后取上清液备用。采用试剂盒分别测小鼠血清和肝组织中SOD、GSH、MDA及蛋白质羰基含量。

1.3 结果判定

根据《保健食品检验与评价技术规范—2003》判定，在模型成立的前提下，SOD、GSH、MDA、蛋白质羰基含量任意三项为阳性，可判定受试样品抗氧化动物实验结果阳性。

1.4 统计学分析

采用SPSS 21.0统计软件进行数据分析，采用方差分析，先进行方差齐性检验，方差齐，组间比较采用F检验，两两比较采用q检验，P＜0.05为差异有统计学意义；对非正态或方差不齐的数据进行适当的变量转换，待满足正态或方差齐要求后，再进行统计学分析；若变量转换后仍未达正态或方差齐，改用秩和检验。

2 结果

2.1 5组小鼠给药前后体重比较

给药前，5组小鼠体重比较差异无统计学意义（P＞0.05）；给药后，5组小鼠体重与给药前比较均明显增加（均P＜0.05），但组间比较差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 5组小鼠给药前后体重比较(g,±s)

注：与给药前比较，aP＜0.05

组别只数给药前终末体重空白对照组 10 27.85±2.10 37.07±3.55a模型组 10 29.00±1.42 37.20±4.76a低剂量组 10 28.16±2.71 37.19±3.03a中剂量组 10 29.10±1.92 38.21±1.74a高剂量组 10 28.66±2.00 38.79±2.39a

2.2 黄刺玫果提取物对小鼠血清中 SOD活力及GSH、MDA、蛋白质羰基含量的影响

模型组和空白对照组比较，小鼠血清中SOD活力、GSH含量均显著降低，MDA 、蛋白质羰基含量均显著升高，差异均有统计学意义（均P＜0.05），说明乙醇氧化模型造模成功。小鼠血清中SOD活力，各剂量组与模型组比较均显著升高（P＜0.05）；GSH含量，中剂量组和大剂量组与模型组比较均显著升高（P＜0.05）；MDA含量，各剂量组与模型组比较有所下降，其中中剂量组和大剂量组下降显著（P＜0.05）；蛋白质羰基含量，各剂量组与模型组比较有所下降，其中中剂量组和大剂量组下降显著（P＜0.05），差异均有统计学意义。见表2。

表2 黄刺玫果提取物对小鼠血清中SOD活力及GSH、MDA、蛋白质羰基的影响(±s)

注：与模型组比较，aP＜0.05

组别只数 SOD活力(U/ml) GSH含量(μmol/L) MDA含量(Nmol/ml) 蛋白质羰基含量(Nmol/mgprot)空白对照组 10 21.44±0.76a 279.07±58.20a 36.75±1.13a 0.40±0.06a模型组 10 20.24±1.23 229.92±43.19 37.81±1.07 0.57±0.17小剂量组 10 20.43±0.80a 228.48±23.48 37.27±0.82 0.45±0.18中剂量组 10 21.37±0.62a 269.40±32.65a 36.85±0.92a 0.38±0.17a大剂量组 10 21.45±0.79a 285.45±51.71a 36.76±0.99a 0.38±0.13a

表3 黄刺玫果提取物对小鼠肝脏组织中SOD活力及GSH、MDA、蛋白质羰基含量的影响(s)

注：与模型组比较，aP＜0.05，bP＜0.01

组别只数 SOD活力(U/ml) GSH含量(μmol/L) MDA含量(Nmol/ml) 蛋白质羰基含量(Nmol/mgprot)空白对照组 10 155.51±11.36a 6.37±1.43a 19.85±3.02a 0.50±0.13a模型组 10 134.85±18.21 5.24±0.73 23.62±3.83 0.69±0.17小剂量组 10 147.22±16.79 5.18±0.97 20.26±3.65 0.57±0.13中剂量组 10 156.95±18.66a 6.16±1.13a 20.80±2.28 0.47±0.23a大剂量组 10 164.50±19.29ab 6.37±1.85 20.52±2.84 0.50±0.16a

2.3 黄刺玫果提取物对小鼠肝脏组织中 SOD活力及GSH、MDA、蛋白质羰基含量的影响

模型组与空白对照组比较，小鼠肝脏组织中SOD活力、GSH含量均显著降低，MDA含量、蛋白质羰基含量均显著升高，差异均有统计学意义（均P＜0.05），说明乙醇氧化模型造模成功。小鼠肝脏组织中SOD活力，各剂量组与模型组比较均有所升高，其中中剂量组升高明显（P＜0.05），大剂量组更明显（P＜0.01）；中剂量组与模型组的GSH含量比较，升高显著（P＜0.05）；各剂量组MDA含量与模型组比较有所降低，但差异无统计学意义（P＞0.05）；蛋白质羰基含量，各剂量组与模型组比较均有所降低，其中中剂量组和大剂量组降低显著（P＜0.05），差异有统计学意义。见表3。

3 讨论

大量乙醇一次性进入人体后，在乙醇脱氢酶催化下脱氢氧化为乙醛和乙酸盐，使三羧酸循环障碍和脂肪酸氧化减弱而影响脂肪代谢。乙醇损伤各种细胞器和酶的结构功能，引起脂质过氧化反应，抑制谷胱甘肽的生物合成，减弱超过氧化酶的抗氧化能力[8]，乙醇还能激活氧分子产生自由基，导致组织细胞过氧化效应及体内还原性谷胱甘肽的耗竭。SOD是存在于生物体内的一种重要的金属酶，其能催化生物氧化而产生的超氧阴离子转化为 H2O2和H2，再由其他抗氧化酶作用生成水，这样可以清除O2-对细胞的损伤作用[9]。MDA是脂质过氧化反应的产物，可间接反应体内自由基生成与清除的平衡状态[10]。GSH是一种抗氧化剂，对自由基具有较强清除作用[11-12]，缺乏或耗竭GSH会促使许多化学物质或环境因素产生中毒作用，GSH含量是衡量机体抗氧化能力大小的重要因素[13]。蛋白质羰基形成是多种氨基酸在蛋白质的氧化修饰过程中的早期标志，随着年龄增长而增加，其可直接反映蛋白质氧化损伤的程度[14]。

本研究结果显示，给药后对小鼠体重的影响不显著；乙醇氧化模型造模成功；中剂量组和大剂量组小鼠血清中SOD活力及GSH、MDA、蛋白质羰基含量与模型组比较，结果阳性；中剂量组、大剂量组小鼠肝组织中SOD活力及GSH、蛋白质羰基含量与模型组比较，结果阳性。

综上所述，根据《保健食品检验与评价技术规范—2003》判定黄刺玫果提取物对小鼠急性酒精性氧化应激反应具有抗氧化作用。