大豆淫羊藿骨碎补片增加骨密度功能实验研究

禹珊珊，赵倩倩，高洋，高卓林，王莹，金向群

（吉林大学药学院，长春 130021）

骨质疏松症在中老年人群中发病率较高，是一种以骨密度降低、骨质变薄、骨脆性增加和患者骨折率增加为主要特征的骨骼性疾病[1]。随着社会老龄化的加剧，患骨质疏松症的人群逐渐增加，许多医药研究者都在致力于开发一种预防和治疗骨质疏松症的药物。因此，许多具有改善骨质疏松功能的中药保健品应运而生。大豆淫羊藿骨碎补片是由大豆、淫羊藿及骨碎补组成的复方制剂，它具有增加骨密度、预防骨质疏松的功能。本实验对大豆淫羊藿骨碎补片进行了增加骨密度的动物实验研究。

1 材料与仪器

1.1 实验动物

动物数量与标准：60 只SD 雌性大鼠，SPF 级，体重240～279 g，购自上海杰思捷实验动物有限公司，生产许可证号：SCXK（沪）2013-0006，动物使用许可证号：SYXK（沪）2013-0008。

动物饲养条件：饲养室相对湿度为40%～53%，温度为20 ℃～24 ℃；实验动物大鼠所用的基础饲料由上海福贝宠物有限公司提供，登记证号：沪饲证（2014）04002。

1.2 材料与试剂

大豆淫羊藿骨碎补片（长春英平药业有限公司，规格0.6 g/片，批号：20161116）。

硝酸、高氯酸、2%氧化镧钙标准溶液（配制成钙含量为500g/mL 的溶液）。

1.3 仪器

PL3002 型电子天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）；ACS-3A型电子秤（上海太和衡器厂）；AA-300 型原子吸收分光光度计（铂金埃尔默公司）；Discovery-wi型双能X 线骨密度仪（美国Hologic 公司）。

2 实验方法

2.1 骨密度和骨钙含量测定试验

将60 只大鼠分于12 个笼内，每笼饲养5 只，适应性饲养1 周后开始实验。整个实验过程中（包括适应性饲养阶段）大鼠饮用去离子水。

对50 只大鼠进行去势手术处理：用戊巴比妥钠溶液按照30 mg/kg的剂量对大鼠进行腹腔注射麻醉，去除大鼠背部肋脊角处的毛，用碘伏进行消毒处理，将双侧卵巢切除。其余10 只大鼠作为假手术对照组，并做相应的假手术处理：大鼠按照去势手术方法处理，但保留双侧卵巢，仅切除部分脂肪。

大鼠去势后，按照体重随机分组，每组10 只，共5组：阳性对照组、模型对照组、大豆淫羊藿骨碎补片低、中、高剂量组。假手术对照组和模型对照组大鼠均用去离子水灌胃；阳性对照组大鼠用1.0 mg/kg的雌二醇灌胃；低、中、高3 个剂量组分别用人体推荐剂量的5倍（0.2 g/kg）、10 倍（0.4 g/kg）、30 倍（1.2 g/kg）的大豆淫羊藿骨碎补片供试液灌胃。以上各组每天灌胃1次，灌胃容量为10 mL/kg，连续12 周。每周记录大鼠体重。12 周之后，处死大鼠，把各组大鼠右侧的股骨分离出来，烘干至恒重并称量，记录各组大鼠的股骨干重。测量各组股骨远心端和股骨中点的骨密度。骨密度测完后，股骨经消化后利用原子吸收法进行骨钙含量的测定。

2.2 数据处理和统计

对实验数据进行方差分析和统计学处理统计，采用SPSS22.0 软件对数据的方差齐性进行检验，采用单因素方差分析对方差齐性数据进行比较，发现差异后，用Dunnett 法进行多个剂量组与1 个对照组均数间比较。而对于方差不齐的数据，用Dunnett T3 检验进行两两比较。P ＜0.05，差异有显著性。

3 结果

3.1 实验各组对大鼠体重的影响

模型对照组从第1 周末开始，体重和体重增重均明显高于假手术对照组（P ＜0.05），可以说明大鼠骨密度低下模型造模成功。大鼠体重异常变化的原因可能是大鼠的卵巢被切除后，雌激素迅速减少，进而引起激素水平紊乱而导致的。与模型对照组相比，阳性对照组和假手术对照组每周体重和体重增重均显著降低（P＜0.05），而后两者变化无明显差异；大豆淫羊藿骨碎补低、中、高剂量组初始体重、每周体重和试验末体重增重均无显著性差异（P ＞0.05）。见表1。

表1 实验各组对大鼠体重的影响Table 1 Effect of every experimental group on body weight of rats

续表1

3.2 实验各组对大鼠股骨的干重、骨钙含量及骨密度的影响

由表2 可见，假手术对照组与模型对照组相比，前者的骨钙含量和骨密度均显著高于后者（P ＜0.05），证明大鼠骨密度低下的模型造模成功；与模型对照组相比，大豆淫羊藿骨碎补片中、低剂量组的骨钙含量和骨密度值均无显著性差异（P ＞0.05），高剂量组中两者均有显著增加（P ＜0.05）；所有剂量组的股骨干重与模型对照组比较均未见明显差异（P ＞0.05）。

表2 实验各组对大鼠股骨的重量、骨钙及骨密度的影响Table 2 Effects of every experimental group on femur weight,bone calcium and bone mineral density in rats

4 结论

大豆淫羊藿骨碎补片选用大豆、淫羊藿、骨碎补为原料，是专为骨质疏松人群设计的一种具有增加骨密度、改善骨质疏松症功能的保健型片剂。本实验表明，大豆淫羊藿骨碎补片具有增加大鼠骨密度和骨钙含量的作用。

临床上利用饮食调节、运动和药物（钙剂、氟化物、激素等）[2]等常规方式对骨质疏松的治疗虽然起效，但却存在各种（诸如骨硬化、便秘等）不良反应。近年来，更多的医、药学研究者致力于研究采用中药治疗骨质疏松并取得良好的效果[3-5]。大豆中的大豆异黄酮能够促进大鼠成骨细胞的增殖[6]；淫羊藿中的淫羊藿苷可以促进成骨细胞的生长[7]，并抑制破骨细胞的生成[8]；骨碎补也可促进成骨细胞增殖并抑制破骨细胞对骨的吸收[9]。大豆淫羊藿骨碎补片以大豆、淫羊藿、骨碎补三味中药材为主要原料，起到了很好的治疗骨质疏松、增加骨密度的作用，具有良好的开发前景。