MicroRNA-452和microRNA-5100在NSCLC组织中的表达及其临床意义

程鹏

（南阳医学高等专科学校第一附属医院 肿瘤内科，河南 南阳 473000）

非小细胞肺癌（non-small cell lung cancer, NSCLC）是肺癌最常见的病理亚型[1]。NSCLC患者预后差，寻找能够预测患者预后的生物靶标，对提高NSCLC早期诊断率、改善患者预后有积极意义[2]。目前发现多个microRNA（miRNA）分子可作为NSCLC病情进展和预后评估的可靠预测分子[3-4]。近年来，microRNA-452（miR-452）和 microRNA-5100（miR-5100）成为miRNA研究领域的热点，而关于miR-452和miR-5100在NSCLC中的表达及对患者病情判断、预后的预测作用，国内尚无报道[5-6]。本研究旨在检测NSCLC癌组织中miR-452和miR-5100的表达水平，分析其在患者病情判断、预后预测中的作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2012年1月—2012年12月南阳医学高等专科学校第一附属医院收治的94例NSCLC患者的癌组织和距离癌组织＞5 cm的癌旁正常组织，手术过程中取出组织样本后，立即置于液氮中保存。纳入标准：术前未接受抗肿瘤治疗；术后经病理证实为NSCLC；具备完整的病历资料。排除标准：术前接受抗肿瘤治疗；合并其他恶性肿瘤；合并肺炎、肺结核等其他肺部疾病。以手术时间为起点，采用门诊或电话随访的方式，对患者进行1～60个月的随访，直至随访时间结束或患者死亡。本研究经本院伦理委员会审核批准。

1.2 实时聚合酶链反应

取出液氮保存的组织样本，切取适量组织，采用 Trizol试剂提取总RNA，TaqMan miRNA 试 剂盒进行逆转录，产物置于-80℃冰箱保存。采用miScript Reverse Transcription 试剂盒和 miScript SYBR Green PCR试剂盒进行实时聚合酶链反应（realtime polymerase chain reaction, real-time PCR）。反应条件：95℃预变性 10 min，95℃变性 15 s，60℃退火 1 min，共 45个循 环。miR-452正向引物：5’-GCGCAACTGTTTGCAGAG-3’，反向引物：5’-GTGCAGGGTCCGAGGT-3’；miR-5100正 向 引 物：5’-TGGCTCTGCCTTTATTCCCTAGT-3’，反向引物：5’-AAATAAGGTGCTTTGGGAATCTGT-3’；U6正向引物：5’-CTCGCTTCGGCAGCACA-3’，反向引物：5’-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3’。以U6为内参，用2-ΔΔCt法计算miR-452和miR-5100的相对表达量。

1.3 统计学方法

数据分析采用SPSS 19.0统计软件。计量资料以均数±标准差（±s）表示，比较用t检验；计数资料以率（%）表示，比较用χ2检验；Kaplan-Meier法绘制生存曲线，比较用Log-rank χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 NSCLC癌组织中miR-452和miR-5100的表达情况

NSCLC癌组织中miR-452和miR-5100相对表达量分别为（0.26±0.11）和（3.25±0.79），癌旁正常组织中miR-452和miR-5100相对表达量分别为（1.15±0.21）和（1.09±0.18），两者miR-452相对表达量比较，差异有统计学意义（t=36.399，P=0.000），NSCLC癌组织低于癌旁正常组织；两者miR-5100相对表达量比较，差异有统计学意义（t=-25.846，P=0.000），NSCLC癌组织高于癌旁正常组织。

2.2 miR-452、miR-5100表达水平与NSCLC患者临床病理特征的关系

NSCLC患者miR-452高表达49例。miR-452高表达与患者年龄、性别、是否吸烟、是否远处转移及TNM分期无相关性（P＞0.05），而与肿瘤病理类型、分化程度、肿瘤大小及淋巴结转移有相关性（P＜0.05）。见附表。

NSCLC患者miR-5100高表达47例。miR-5100高表达与患者年龄、性别、是否吸烟、肿瘤病理类型、肿瘤大小、淋巴结转移和远处转移无相关性（P＞0.05），而与肿瘤分化程度、TNM分期有相关性（P＜0.05）。见附表。

附表 不同影响因素下miR-452和miR-5100的高表达率比较

2.3 NSCLC癌组织中miR-452和miR-5100表达水平对患者预后的影响

NSCLC患者中miR-452高表达49例，低表达45例。miR-452高表达组患者的术后5年总生存率为51.02%（25/49），低表达组为22.22%（10/45），经χ2检验，差异有统计学意义（χ2=8.324，P=0.004）。miR-452高表达组患者的术后中位生存时间为43.00个月，低表达组为36.00个月，经Log-rank χ2检验，差异有统计学意义（χ2=7.318，P=0.007）。见图 1。

miR-5100高表达患者47例，低表达47例。miR-5100高表达组患者的术后5年总生存率为23.40%（11/47），低表达组为51.06%（24/47），经χ2检验，差异有统计学意义（χ2=7.693，P=0.006）。miR-5100高表达组患者的术后中位生存时间为36.00个月，低表达组为43.00个月，经Log-rank χ2检验，差异有统计学意义（χ2=8.174，P=0.004）。见图2。

图1 NSCLC患者miR-452表达的Kaplan-Meier生存曲线

图2 NSCLC患者miR-5100表达的Kaplan-Meier生存曲线

3 讨论

肺癌的发生、发展是多因素、多基因共同作用的过程。目前，大量研究致力于探究miRNA在肺癌发生、发展中的功能作用，let-7家族成员均与肺癌患者预后相关[7-8]。

miRNA通过特异性结合至信使RNA（mRNA）的3’-非翻译区，诱导mRNA降解或抑制翻译，进而调控基因表达，miRNA通过调节促癌基因或抑癌基因的表达，进而发挥功能[9-10]。研究证实，miR-452在恶性肿瘤中既可发挥促癌基因功能又具有抑癌基因功能，如在乳腺癌中，miR-452表达升高，而在食管癌中，miR-452表达降低[11-12]。本研究发现，与癌旁正常组织相比，miR-452在NSCLC癌组织中表达降低，与HE等[13]研究结果一致。由此推测，miR-452低表达在NSCLC肿瘤形成过程中发挥促进作用，miR-452在NSCLC中发挥抑癌基因功能。有研究发现，miR-452低表达与脑胶质瘤的临床分期和患者预后紧密相关[14]。本研究结果发现，miR-452高表达与肿瘤病理类型、分化程度、肿瘤大小及淋巴结转移有关，即肿瘤分化程度越高，miR-452表达水平越高，肿瘤直径越大、存在淋巴结转移，miR-452表达水平越低，提示miR-452低表达可能抑制肿瘤细胞分化，促进肿瘤细胞增殖及上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）过程。KRISTENSEN等[15]在前列腺癌细胞中的研究发现，miR-452可通过调节与细胞周期、细胞黏附或细胞能动性相关的信号通路活性，抑制细胞增殖、侵袭迁移，有研究证实，miR-452能抑制NSCLC细胞增殖和侵袭[16]。后续研究中，笔者将对miR-452影响NSCLC细胞分化、增殖及侵袭迁移的内在机制进行深入探究。

CHIJIIWA等[17]发现，在胰腺癌细胞中，外源性增加miR-5100表达可抑制细胞增殖和侵袭迁移；HUANG等[18]研究结果揭示，miR-5100在肺癌组织和肺癌细胞株中表达增加，且miR-5100具有促进细胞增殖的功能，由此推测，miR-5100可同时兼具促癌基因和抑癌基因的功能。本研究中real-time PCR结果显示，miR-5100在NSCLC癌组织中表达增加，提示其可能参与并促进NSCLC肿瘤形成，具有促癌基因功能。此外，本研究发现，在肿瘤分化程度低的NSCLC癌组织中，miR-5100表达水平较高，而miR-5100高表达与TNM分期有关，由此推测，miR-5100可抑制肿瘤细胞分化、诱导肿瘤恶性进展。LI等[19]研究发现，在肺上皮细胞中，miR-5100可激活Smad2/3，促进细胞发生EMT，目前关于miR-5100在NSCLC中的作用机制研究甚少。后续研究中，笔者将在体外细胞水平，通过改变miR-5100表达量，探究其在NSCLC中的具体作用机制。

Kaplan-Meier生存分析发现，在NSCLC癌组织中，miR-452低表达、miR-5100高表达，均预示患者较低的术后5年总生存率和较短的中位生存时间，miR-452和miR-5100可作为预测NSCLC患者预后的生物靶分子。

综上所述，本研究发现在NSCLC癌组织中，miR-452呈低表达、miR-5100呈高表达，且均与患者较差的临床病理特征和不良预后相关。miR-452和miR-5100可作为NSCLC患者病情进展评估、预后和治疗靶标的候选分子。