首乌地黄酒制备工艺的优化

2019-03-05徐晶晶张可擎林丽珍向云亚

酿酒科技 2019年2期

徐晶晶，张可擎，林丽珍，向云亚

（1.厦门医学院药学系，福建厦门361023； 2.河南应用技术职业学院，河南郑州450000）

随着生活节奏的加快，环境的不断恶化，以及不良的饮食习惯，脱发甚至秃顶患者越来越多，这给其生活带来了诸多不便。本课题组在前期的研究中已优化了一款外用生发酒的制备工艺[1]。中医治疗脱发的要点是辨病与辨证相结合，内服中药和外用搽剂密切配合，缺一不可[2]。因此，本研究拟开发一款供内服的生发药酒。

脱发、斑秃辨证无论病因如何，形式各异，最终必然导致机体肝肾机能下降、精血亏虚，这是本病的主要病因，而情志不畅是本病的诱因。所以应以养血益肾为主，当归、首乌、地黄为必用之药[3]。司氏[4]检索1980年至2014年中国期刊全文数据库收录的中医及中西医结合诊治脱发、白发的临床研究和个人经验类文献，共涉及中药统计有269味，发现使用频率最高的5味药依次为何首乌、当归、熟地黄、川芎、女贞子，这也体现了中医对于脱发的治法以补肾养血活血为主。首乌地黄酒由制首乌、熟地、黄芪、当归、川芎、枸杞6味中药组成，全方具有补肝肾、和气血、乌须发的作用，用于精血不足、未老先衰、须发脱落或早白[5]。

目前酒剂的常用制备方法为浸渍法(冷浸法和热浸法)、渗漉法和回流提取法等[6]。中药有效成分是中药复方发挥治疗作用的物质基础，而总固体含量影响制剂澄清度和成品的稳定性[7-8]。本实验以该方中君药何首乌的主要活性成分游离蒽醌含量为主要考察指标，通过正交实验对该药酒制备工艺进行优化，同时结合总固体量综合优选出最佳提取工艺，可为首乌地黄酒的质量控制提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料、试剂及仪器

制首乌、熟地、黄芪、当归、川芎、枸杞药材均购自北京同仁堂，均符合2015年版《中国药典》一部各药材项下规定的标准。

试剂：大黄素(四川省维克奇生物科技有限公司，批号为wkq16071004，纯度＞98%)，大黄素甲醚(四川省维克奇生物科技有限公司，批号为wkq16070403，纯度＞98%)，水为纯净水，甲醇、乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

仪器：Waters2695型高效液相色谱仪，美国Waters公司；CP124C型电子天平，奥豪斯仪器(上海)有限公司；RT-04型粉碎机，北京兴时利和科技发展有限公司；DK-S28电热恒温水浴锅，上海精宏实验设备有限公司。

1.2 实验方法

1.2.1 游离蒽醌的含量测定

1.2.1.1 样品前处理

取首乌地黄酒适量，进样前用0.45 μm微孔滤膜滤过。

1.2.1.2 色谱条件

Kromasil C18色谱柱（4.6 mm×250 mm,5 μm），流动相为甲醇-0.1%磷酸溶液（80∶20），检测波长为254 nm，体积流量1.0 mL/min，柱温25℃，进样量10 μL。

1.2.1.3 标准曲线绘制

精密称取大黄素对照品5.06 mg，大黄素甲醚对照品2.44 mg，分别置于50 mL棕色容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得对照品储备液。精密吸取大黄素和大黄素甲醚对照品溶液0.5 mL、1 mL、2 mL、4 mL、6 mL、8 mL、10 mL，分别置于10 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，得大黄素和大黄素甲醚系列对照品溶液。将各对照品溶液在选定的色谱条件下测定，以浓度为纵坐标、峰面积为横坐标，绘制标准曲线。

1.2.2 总固体含量的测定

精密量取供试品上清液50 mL，置于已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，在105℃干燥3 h，移至干燥器中，冷却30 min，迅速精密称定重量[9]。

1.2.3 正交实验设计

选用L9(34)正交实验，以游离蒽醌含量（含游离蒽醌以大黄素和大黄素甲醚的总量计）、总固体含量的综合评分为指标考察乙醇体积分数(A)、料液比(B)和提取时间(C)对提取效果的影响，从而确定最佳提取工艺条件。权重分配游离蒽醌含量占0.7，总固体含量占0.3。具体计算方法为9个样品中，每个样品的游离蒽醌含量、总固体含量分别除以9个样品中游离蒽醌含量、总固体含量的最大值，然后乘以权重系数，得到游离蒽醌含量、总固体含量在该样本中的综合评分的贡献值，同一样品的游离蒽醌含量、总固体含量贡献值之和即为该样品的综合评分[10]。因素水平见表1。

表1 首乌地黄酒的制备工艺正交实验因素水平

1.2.4 验证实验

按比例称取各药材粗末适量，按最佳工艺条件重复3次实验，检测游离蒽醌含量和总固体含量，验证该工艺条件的稳定性。

2 结果与分析

2.1 游离蒽醌的含量测定

2.1.1 色谱条件的确定

2015版《中国药典》及严氏对何首乌中游离蒽醌进行色谱分离时，使用的流动相均为甲醇∶0.1%磷酸溶液=80∶20[11-12]。通过实验发现此条件对于首乌地黄酒中游离蒽醌的分离同样适用，可以实现2种待测物质大黄素、大黄素甲醚与药酒中其他化合物的分离，杂质干扰少。见图1。

图1 首乌地黄酒的HPLC色谱图

2.1.2 标准曲线及线性范围

以质量浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，大黄素和大黄素甲醚回归方程分别为Y=32961X+2254.4（R2=0.9998）；Y=10238X+3497.3（R2=0.9995），线性范围分别为2.53～50.6 μg/mL和2.44～48.8 μg/mL，线性较好。

2.1.3 稳定性实验

取同一供试品溶液，分别放置0、2 h、4 h、6 h、12 h、24 h按照1.2.1.2处的色谱条件进样，测得大黄素和大黄素甲醚质量浓度的RSD分别为0.8%、1.0%。表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.1.4 精密度试验

分别取1.2.1.3项的大黄素和大黄素甲醚高、中、低3个质量浓度的对照品溶液，按照1.2.1.2处色谱条件每个浓度分别重复进样5次，大黄素和大黄素甲醚高、中、低质量浓度的RSD分别为0.5%、0.4%、1.0%；0.4%、0.5%、0.8%。表明仪器的精密度良好。

2.1.5 重复性实验

取首乌地黄酒样品，按照1.2.1.1处的处理方法平行制备5份，按照1.2.1.2项的色谱条件进样，计算含量。其大黄素和大黄素甲醚含量RSD分别为0.8%、0.6%。表明该方法重复性良好。

2.1.6 加样回收率实验

精密量取已知含量的首乌地黄酒1 mL，分别按含量的80%、100%、120%加入大黄素和大黄素甲醚对照品溶液，按照1.2.1.2处色谱条件进样，计算大黄素和大黄素甲醚的平均加样回收率分别为100.5%、100.1%、100.7%；100.8%、101.0%、100.6%，RSD为0.8%、0.9%、1.2%；1.6%、0.7%、0.9%，结果见表2。