简述纳他霉素生产菌种选育最常用的几种方法

李 梅

(浦城县投资开发公司，福建 浦城 353400)

纳他霉素作为天然广谱抗真菌剂，纳他霉素生产菌是一种链霉菌，在链霉菌中大多存在野生型菌种抗生素产量低和遗传不稳定的现象，因此，纳他霉素生产菌种的选育工作成为各个纳他霉素生产企业和科研单位研究的热点。本文介绍的纳他霉素育种主要是诱变育种。

1 纳他霉素生产茵的菌种选育

1.1 自然分离

最早的纳他霉素生产菌的育种方法是自然分离，但长期使用自然选育挑选的生产菌种生产容易出现不稳定，效价跌幅较大，生产周期拉长，生产的产量低，质量不稳定的特点。

1.2 诱变育种

1.2.1 紫外线诱变

紫外线诱变是纳他霉素企业生产育种最常用手段，在纳他霉素生产菌的育种工作中发挥了重要作用。

1.2.1.1 出发菌种的制备

把沙土管菌种接到斜面培养中30℃恒温培养3天，观察无染菌，菌苔呈灰色，生产的菌落正常再转接2～3次无异常的菌种为诱变育种的出发菌株。

1.2.1.2 紫外线诱变

将培养好的出发菌种刮入装有生理盐水的平皿中，用功率15 W、波长256 nm的紫外灯距离25 cm处照射2 min，然后进行稀释10-8稀释自然分离，挑单菌落转入斜面培养。上摇瓶考核，生产性能稳定，效价高于出发菌株10%菌种作为生产菌种进沙土管冰箱保存备用。

1.2.2 紫外线复合诱变

经紫外线诱变后的菌种再接入含有0.001%化学诱变剂的生理盐水的平皿中处理30 min。然后进行稀释10-6稀释自然分离，挑单菌落转入斜面培养。上摇瓶考核，效价高于紫外线诱变的菌株15%的菌种为生产菌种进沙土管冰箱保存备用。经过紫外线复合诱变挑出的菌种要转接3代并在中试车间做综合性实验。

1.3 原生质体育种

纳他霉素素原生质体育种在生产企业和科研单位中主要采用的是原生质体诱变育种和原生质体融合育种两种方法，但由于操作要求较高，平时用的比较少。

1.3.1 原生质体诱变育种

原生质体诱变育种是以原生质体为材料，采用物理诱变剂和化学诱变剂进行适当的处理，然后分离到培养基中进行再生，挑单菌落进行摇瓶考核筛选出生产稳定性好的高产菌株。

1.3.2 原生质体融合育种

原生质体融合育种是通过两个或两个以上的遗传性状不同的亲株原生质体融合而进行杂交。挑单菌落进行摇瓶考核从中筛选出生产稳定性好的高产菌株。

1.4 基因工程育种

近年来，有一部份的纳他霉素科研单位开始使用基因工程育种。基因工程育种是一种定向选育，能有效的提高目标产物的产量。

2 总结

目前纳他霉素生产菌菌株选育的手段有自然分离、诱变育种、原生质体育种和基因工程育种。诱变育种在生产中是最常规育种手段，不需要了解菌株的遗传背景，其操作简单、成本低；但诱变育种也存在正突变率比较低，筛选工作量比较大的缺点，今后生产企业也应进行基因工程的定向育种为大生产的高产量和质量服务。