常用血清学诊断方法之凝集反应

2019-02-13毕长红

饲料博览 2019年9期

关键词：玻片悬浮液氏杆菌

毕长红

（吉林省德惠市动物疫病预防控制中心，吉林德惠 130300）

习惯上把体内的抗原抗体反应称为免疫反应，体外的抗原抗体反应因为主要依靠于存在于血清中的抗体来进行，所以称为血清学反应。

1 血清学反应的特点

抗原抗体反应具有比较严格的特异性。例如布氏杆菌的抗原只能与布氏杆菌的抗体发生反应；破伤风毒素只能与破伤风抗毒素反应等。

合适的比例。一定量的抗原只能与一定量的抗体结合才出现可见反应。一般认为抗原分子是多价的，可以结合多个抗体分子（一般可结合3～6 个抗体分子），而抗体分子是双价的，可与两个抗原分子结合，只有两者比例合适，才能构成较大的集团，发生可见的凝集或沉淀反应。

可逆性。抗原抗体结合是表面分子的结合，具有相对稳定性。在某种情况下，能出现可逆反应。例如毒素和抗毒素结合后仍可将其完整的分离开，并不影响毒素的毒性。

2 实验方法

2.1 直接凝集反应（细菌凝集反应）

有玻片法和试管法两种。玻片法是将已知的免疫血清（或待检血清）与未知的抗原（或已知的抗原）各1 滴，在玻片上混合，晃动玻片1～2 min，出现可见的凝集现象者为阳性反应。在兽医实践工作中，常用于传染病的诊断，如布氏杆菌病及鸡白痢等。此外，还可用于各型沙门氏杆菌的定性。试管法通常用已知抗原检查待检血清中相应抗体的有无及其含量（凝集价）。在一系列试管中，将被检血清用生理盐水作倍比稀释，各加入等量已知抗原，以最高稀释度仍有明显凝集现象者为该被检血清的效价。本法也常用于布氏杆菌及马副伤寒等病的诊断。

2.2 间接凝集反应

可溶性抗原与其相应的抗体不能发生肉眼可见的凝集反应，若将其吸附在颗粒性物体表面（称为致敏）再与相应抗体结合，便可出现可见的凝集现象，称为间接凝集反应。若用红细胞作为载体，便称为间接血细胞凝集试验（简称间接血凝）。本法敏感性极高，能测出极微量的抗体，兽医工作中常用来检查炭疽杆菌病、钩端螺旋体病等多种畜禽传染病的诊断和鉴定菌型的工作中。

2.2.1 红细胞悬浮液的准备

无菌采取绵羊脱纤维血，用pH 7.2磷酸盐缓冲液洗涤3次，制成3%红细胞悬浮液。为了提高红细胞同抗原的结合能力，在敏化前先经鞣酸处理或在致敏时加入重偶氮联苯胺。为了延长致敏红细胞的保存时间，可在敏化之前或之后做醛化处理。

醛化处理：红细胞悬浮液100 mL，加甲醛溶液40 mL，置37 ℃水浴中90 min～2 h，取出用生理盐水洗涤3～4 次，最后制成3%红细胞悬浮液，。

鞣酸化处理：红细胞悬浮液加等量的鞣酸生理盐水溶液（1：30 000），置37 ℃水浴中15 min，取出用生理盐水洗涤2～3次，最后制成3%红细胞悬浮液。

2.2.2 红细胞敏化

取抗原与3%红细胞悬浮液（经醛化和鞣化处理）等量混合，置37 ℃水浴中15 min，取出用磷酸缓冲液（加有1%兔血清，pH 7.2）洗涤3次，最后制成3%红细胞悬浮液，即为致敏红细胞液。

2.2.3 被检血清

以常法获得血清，以生理盐水做1：5 稀释，在56 ℃水浴中灭活30 min。

2.2.4 操作方法

取有凹孔的塑料板一块（亦可用小试管）按规定将不同稀释度的被检血清加入各凹孔中，每孔加入已致敏的红细胞悬浮液一滴，混匀，置37 ℃温箱中1～2 h后观察结果。

2.2.5 判定结果

红细胞在孔底形成不规则的网状凝集物为阳性反应。红细胞沉降于孔底呈圆点状，无凝集现象为阴性反应。

2.3 病毒的血细胞凝集和血细胞凝集抑制实验

有些病毒（如流感病毒、鸡新城疫病毒）与动物红细胞混悬液混合后能使红细胞发生凝集，但这种凝集作用可为相应的抗体所抑制。因此，可以用已知的免疫血清（抗体）鉴定未知的病毒（抗原）。亦可以用已知的病毒（抗原）来检查病畜血清中的抗体和抗体的抑制价。前者称为血细胞凝集试验，后者称为血细胞凝集抑制实验。兽医工作中常用于诊断鸡新城疫等病。