γ-干扰素的释放对肺结核的辅助诊断价值分析

蒋丽

结核病是慢性消耗性疾病，感染性较强。我国结核病发病率较高，我国≥15岁人口中有高达499万的活动性结核病患者[1]。细菌学检查是活动性肺结核的常用方法，但因结核菌培养时间长，在临床上会出现误诊或漏诊。结核菌素试验作为辅助诊断肺结核的重要指标，因抗原纯蛋白衍生物与卡介苗的抗原有某些相同而引发特异性降低，当人体免疫功能降低时，结核菌素试验(TST)诊断的敏感性也不断下降[2]。因此，探寻一种快速、准确的检测方法，对于结核病的预防尤为重要。γ-干扰素(IFN-γ)是特异性细胞因子，由结核致敏的T淋巴细胞释放。近年来γ-干扰素释放试验(IGRAs)作为一种新型的免疫学诊断方法，已经逐步应用在肺结核的临床诊断中[3]。本文对IGRAs对肺结核的辅助诊断价值报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取我院2017年5月至2018年5月初次确诊为活动性肺结核病患者120例，作为观察组，均经过病理学确诊，男69例，女51例，年龄43～80岁，平均年龄(47.15±7.83)；选取同期非活动性肺结核病患者120例，作为对照组，男63例，女57例，年龄41～82岁，平均年龄(45.48±6.73)岁。两组均行人类免疫缺陷病毒抗体检测，均未使用免疫抑制剂或增强剂，结果均显阴性且无合并妊娠，无心肝肾功能衰竭史，所有受试者均知情同意参与。两组患者的性别、年龄差异均无统计学意义(P＞0.05)。

1.2 方法 两组研究对象均行IGRAs检测及TST检测。

1.2.1 IGRAs检测 采用Oxford Immunotec公司的IGRAs试剂盒，治疗前取5 mL枸橼酸钠抗凝静脉血进行检测。分离外周血得到单个核细胞，制备成浓度为2.0×106/mL的细胞悬液。细胞培养液和植物血凝素PHA分别作为阴性和阳性对照，结核菌特异性抗原 ESAT-6和CFP-10作为刺激抗原。微孔板中各孔均加入含2.5×105个细胞的细胞悬液，将其放在含5%二氧化碳的培养箱中培养18～20 h，洗板后加入生物素标记的二抗，在2～8℃环境下反应1 h，后加入显色底物液，室温静置7 min，加入去离子水终止反应。采用CTL酶联免疫斑点系统记录斑点数。

1.2.2 TST检测方法 在研究对象左侧前臂1/3皮下注射PPD试剂 (北京祥瑞生物制品有限公司生产)，72 h后观察硬结情况。.

1.3 评判标准 IGRAs检测评判标准[4]：当空白对照孔内斑点数＜6时，任一试验孔斑点数减去空白孔斑点数≥6，结果即为阳性；若空白对照孔斑点数≥6，任一试验孔斑点数≥2倍空白孔斑点数结果也为阳性。

TST检测评判标准[5]：主要参照《全国结核病防治工作手册》，患者有直径≥15 mm红肿硬结或有水泡或破溃者判为阳性，否则判为阴性。

1.4 观察指标 观察灵敏度、特异度、阳性率、阴性率指标。灵敏度＝真阳性/(真阳性＋假阴性)×100%；特异度＝真阴性/(真阴性＋假阳性)×100%；阳性率＝真阳性/(真阳性＋假阳性)×100%；阴性率＝真阴性/(真阴性＋假阴性)×100%

1.5 统计学分析 采用SPSS 18.0分析，两种检测方法的诊断准确度采用率表示，行χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 IGRAs及TST检测结果阳性率比较 本次研究中，观察组和对照组经IGRAs确诊的结核病患者分别有112例和9例，对应IGRAs对结核病检测阳性率分别为93.3%(112/120)、7.5%(9/120)；观察组和对照组经TST确诊的结核病患者分别有55例和19例，对应TST对结核病检测阳性率分别为45.8%(55/120)、15.8%(19/120)，IGRAs对结核病检测阳性率(93.3%)明显高于TST(45.8%)，组间比较，差异有统计学意义(P＜0.05，表1)。

表1 IGRAs及TST检测结果阳性率比较[n(%)]

2.2 观察组IGRAs及TST试验在诊断结核病敏感性和特异性上的比较 我们对观察组患者进行影像学及组织病理学检查，以其结果为金标准判断，统计观察组患者进行IGRAs及TST试验的敏感性、特异性、阳性率及阴性率。IGRAs试验中真阳性69例，真阴性41例，假阴性6例，假阳4性例，其对敏感性、特异性、阳性率、阴性率分别为92.0%、91.1%、94.4%、93.8%；TST试验中真阳性38例，真阴性35例，假阴性37例，假阳性10例，其对敏感性、特异性、阳性率、阴性率分别为50.7%、77.8%、81.9%、79.2%。IGRAs试验敏感性、特异性、阳性率、阴性率显著高于TST试验方法，差异有统计学意义(P＜0.05，表2)。

表2 观察组IGRAs及TST试验在诊断结核病敏感性和特异性上的比较 单位：%

3 讨论

结核病是一种慢性消耗性疾病，由结核分枝杆菌侵入人体后引起的，具有极强的感染性。我国结核病发病率非常高，我国≥15岁人口中有高达499万的活动性结核病患者。细菌学检查是活动性肺结核的金标准，但因结核菌培养时间长，在临床上会出现误诊或漏诊。TST作为辅助诊断肺结核的重要指标，因抗原纯蛋白衍生物与卡介苗的抗原有某些相同而引发特异性降低，且当人体免疫功能降低时，TST检测的敏感度也随之大幅降低。所以，对于肺结核的控制及预防，准确快速的试验方法起到了关键性作用。

IGRAs是一种诊断结核病的新型检测方法，其由酶联免疫斑点演变而来。患者感染肺结核后，结核分枝杆菌可产生CFP-10和ESAT-6两种特有抗原，抗原刺激T淋巴细胞后，反应产生γ-干扰素使得患者外周血γ-干扰素水平异常，从而来诊断是否感染结核分枝杆菌，此抗原可区分真性结核感染，排除疫苗接种及非结核病感染的干扰[6]。传统的结核病菌素试验是基于Ⅳ型反应的临床检测方法，其原理是向患者上臂注射结核菌素蛋白衍生物，观察患者3 d后皮肤反应情况。因结核菌素蛋白衍生物含有CFP-10和ESAT-6特异性抗原，能够与卡介苗产生反应，如若患者不清楚自己是否打过卡介苗，可能会产生误诊，从而一定程度降低了TST的特异度。我们研究结果显示，观察组中120例初诊结核病患者通过IGRAs试验检查发现阳性112例，阳性率为93.3%；观察组经TST确诊的结核病患者有55例，对应TST对结核病检测阳性率为45.8%，IGRAs对结核病检测阳性率(93.3%)明显高于TST检测(45.8%)。研究结果表明[7-10]，IGRAs诊断方法表现出较高的敏感性及特异性，对于活动性肺结核可以起到较好的辅助诊断作用。

当患者IGRAs检测为阳性且具有结核病临床特征时，IGRAs诊断方法的灵敏度和特异度均明显提高，为结核病的治疗提供参考。此外，我们在关注IGRAs诊断方法在提高诊断效率的同时，也要考虑其降低耗费成本问题。实际临床治疗中，更早期的对结核病做出准确的诊断，可节省部分治疗费用，患者可早日康复。

综上所述，IGRAs诊断方法相比于TST诊断方法，对于肺结核病的诊断具有更高的阳性率、阴性率、敏感性及特异性，且操作简便，从而有着良好的临床应用前景。