PCR检验在肺结核早期诊断中的应用价值及效果探讨

袁红英

肺结核是由结核分枝杆菌引发的肺部感染性疾病，其具有强烈的传染性[1]，临床主要表现为发热、咳嗽、咳痰、咯血、胸痛和呼吸困难，严重影响患者的生活质量。研究表明[2-3]，肺结核的临床表现很不典型，起病隐匿，若得不到及时的治疗会严重影响患者的身心健康，严重者危及患者的生命安全。因此，尽早诊断肺结核对治疗该病具有重要的意义。聚合酶链式反应检验(PCR)是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊DNA复制，PCR的最大特点是能将微量的DNA大幅增加，从而更容易准确诊断肺结核[4]。已有研究报道[5-6]，PCR检验在肺结核早期诊断中的应用价值较高且准确率高。因此，为了进一步探讨PCR检验在肺结核早期诊断中的应用价值及效果，选取2016年2月至2018年2月我院接诊的130例肺结核患者进行研究。现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2016年2月至2018年2月我院接诊的130例肺结核患者作为研究对象。130例患者先应用皮肤结核菌素纯蛋白衍生物(PPD)检验法进行诊断，然后130例患者再应用PCR检验法进行诊断。纳入标准：①患者均已诊断为肺结核。②患者及其家属均知情本次研究，且在知情同意书上签字，并通过我院伦理委员会认证。排除标准：①不接受本次诊断者或不配合本次研究者。②精神障碍者。③并发心、肝、肾等严重疾病者。130例患者男78例，女52例；年龄23～72岁，平均年龄(46.37±7.28)岁；病程2～10个月，平均病程(6.14±2.34)个月。

1.2 方法 PPD诊断：用生理盐水将PPD(北京祥瑞生物制品有限公司，国药准字S10960017)稀释后，取0.1 mL于左或右前臂内侧行皮内注射，48～72 h后测量和记录反应面积。

用PCR诊断：取0.5 mL患者清晨深咳后的第一口痰液，加入5 μL浓度为1 mol/L的NaOH溶液并混合均匀，放置在37℃下静止40 min。然后在离心机(10 000 r/min，5 min)上对混合液进行离心，去除上清液并以生理盐水洗脱液洗脱。同时取患者胸水、血清各1 mL进行离心沉淀处理，再加入50 μL裂解液行沸水浴10 min，接着进行离心处理(10 000 r/min，5 min)，将15 μL反应液加入0.2 μL Taq酶中混合均匀，再加入石蜡油20 μL封顶，最后加入5 μL上清液形成TB-DNA模板。在不同温度下扩增循环35次后取PCR扩增液20 mL进行电泳。

1.3 观察指标 比较两种诊断方法的阳性率，其中PPD检测72 h内观察到患者局部肿结直径大于5～10 mm则判别为阳性。而PCR检测在紫外线下有160 bp橙黄色荧光带则判别为阳性。其中阳性率＝阳性人数/总人数×100%。比较两种诊断方法的在肺结核早期诊断中的应用价值，采用受试者工作特征曲线(ROC)进行分析。其中ROC曲线下的面积(AUC)越大，诊断价值越佳。

1.4 统计学分析 采用SPSS 18.0统计学软件进行数据分析，计量资料用(±s)表示，两组间比较采用t检验；计数资料采用率表示，组间比较采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两种诊断方法的阳性率比较 PCR检验的阳性率为86.15%，明显高于PPD检验的43.85%，差异具有统计学意义(P＜0.05，表1)。

表1 两种诊断方法的阳性率比较(n)

2.2 两种诊断方法在肺结核早期诊断中的应用价值比较 两种诊断方法在肺结核早期诊断中具有一定的诊断价值，且PCR检验的AUC明显大于PPD检验，其诊断价值明显高于对照组，差异有统计学意义(P＜0.05，表2)。

表2 两种诊断方法在肺结核早期诊断中的应用价值比较(±s)

表2 两种诊断方法在肺结核早期诊断中的应用价值比较(±s)

方法 例数 AUC PCR检验 130 0.812±0.144 PPD检验 130 0.521±0.103 t值P值18.740 5 0.000 0

3 讨论

近年来，随着环境污染的加重及各种传染疾病的传播，肺结核发病率逐渐增加[7]。该病无非常特异性的临床表现，有些患者甚至没有任何症状，起病隐匿[8]，急性起病时，症状危重，甚至会导致死亡，严重影响患者的生命安全[9-10]。大量研究表明[11-12]，尽早明确诊断、采取适当治疗方案是治疗该病的关键。到目前为止，PDD法进行皮肤试验，根据皮肤反应结果来判断，是诊断肺结核的有效方法之一。遗憾的是，有研究报道[13-15]，PDD法诊断准确率低，而PCR将微量的DNA大幅增加，更容易准确诊断肺结核，且诊断率高。

基于以上研究，为了进一步探讨PCR检验在肺结核早期诊断中的应用价值及效果，选取2016年2月至2018年2月我院接诊的130例肺结核患者进行研究。在本次研究中，我们分别用PCR检验法和PDD检验法对肺结核患者进行诊断，PCR检验法的阳性率为86.15%，明显高于PDD检验法的43.85%。这说明PCR的诊断准确率明显高于PDD的诊断准确率。这可能是与PDD液纯度不够有关。

AUC为ROC曲线下的面积，当两种或两种以上不同诊断试验对疾病识别能力的比较时，哪一种试验的AUC最大，则哪一种试验的诊断价值最佳。在本次研究中我们发现，两种诊断方法在肺结核早期诊断中具有一定的诊断价值，其中PCR检验法的AUC明显高于PDD检验法，这说明PCR检验法具有较高的诊断价值。这是由于PCR检测法能有效避免体内因子，未产生变态反应、抗体等影响，从而具有较高的诊断价值和诊断准确率。

综上所述，PCR检验诊断早期肺结核的准确率高，且在肺结核早期诊断中的应用价值较高，值得在临床中广泛推广。