粉花山扁豆茎叶中1个新的黄酮类化合物

王闪闪，黄文忠，高雪梅，曾广智，陶春瑶，崔 笛，朱 鸿，张 再，李干鹏，蒋孟圆

(1. 云南民族大学 民族药资源化学国家民族事务委员会-教育部重点实验室，云南 昆明 650500；2. 昆明学院 化学科学与技术系，云南 昆明 650500)

粉花山扁豆(CassianodosaBuch.-Ham.ex Boxb)，又称节果决明、塔槐，为豆科(Leguminosae)苏木亚科决明属(CassiaL.)植物[1].我国云南的西双版纳、广东、广西等地有栽培，印度、缅甸、柬埔寨、泰国南部及越南南部也广泛分布，夏威夷群岛引种作行道树.据文献[2]报道粉花山扁豆的果实，能解痘毒.国内外学者对决明属植物进行过一些研究，主要报道有色酮类、黄酮类、萜类、甾体类、生物碱类等化学成分，但对粉花山扁豆植物的化学成分鲜有报道[3-6].为充分利用我国丰富的资源提供科学依据，进一步寻找新的活性天然产物，本文对粉花山扁豆的化学成分进行研究，从中分离鉴定1个新的黄酮类化合物，命名为山奈酚-3-O-[(4″,5″-O-异丙叉基)-α-L-吡喃鼠李糖苷(1)，以及4个已知化合物.

1 实验部分

1.1 仪器与材料

Bruker AM-400超导核磁共振仪(德国Bruker公司)；VG Antospec-3000质谱仪(英国VG公司)；旋光仪Jasco DIP-1000(日本Spectroscopic公司)；Perkin Elmer spectrum100 FT-IR红外光谱仪(美国Perkin Elmer公司)；Agilent 1100高效液相色谱仪，色谱柱为Zorbax SB-C18柱(21.2 mm×25 cm).100～200、200～300目硅胶和GF254硅胶板，青岛海洋化工厂产品；工业级：二氯甲烷、甲醇、乙酸乙酯，云南祥瑞化玻教仪研发有限公司；分析纯：甲醇，天津市瑞金特化学品有限公司；薄层色谱法显色，显色剂为5%H2SO4乙醇显色剂，喷洒后适当加热即可；纯净水，娃哈哈饮用纯净水.

实验用决明属植物粉花山扁豆2015年10月采于云南省西双版纳州，经中科院西双版纳植物园马宏鉴定为豆科苏木亚科决明属植物粉花山扁豆CassianodosaBuch.-Ham.ex Boxb.的茎叶.

1.2 提取与分离

取晒干的粉花山扁豆茎叶12 kg，粉碎过0.441 mm 筛，然后用体积分数90%乙醇水溶液室温下提取3次，每次用量为20 L，室温浸泡、超声3次(每次4 min)，过滤，减压浓缩，得到浸膏2.7 kg，经硅胶柱柱色谱粗分，用不同体积分数的二氯甲烷-甲醇流动相进行梯度洗脱，得到6个极性段A～F(20∶1,9∶1,8∶2,7∶3,6∶4和1∶1)，B部分(V(二氯甲烷)∶V(乙酸乙酯)=9∶1,18.9 g)经200～300目硅胶柱色谱，V(二氯甲烷)∶V(乙酸乙酯)=(30∶1、20∶1、9∶1、8∶2、7∶3、6∶4、1∶1)梯度洗脱，分成7个部分，B1～B7.B3部分(V(二氯甲烷)∶V(乙酸乙酯)=6∶4，55 mg)用HPLC进一步分离.采用Agilent Zorbax SB-C18反相色谱柱(22 mm×250 mm，5 μm)，以40%甲醇水溶液为流动相，流速为 3 mL/min，分别得到化合物1(5.8 mg)、2(6.7 mg)、3(8.2 mg)、4(7.2 mg)、5(4.3 mg).

2 结构鉴定

化合物1淡黄色无定形粉末.HR-ESI-MS显示其准分子离子峰为m/z471.4408[M-H]-，(计算值471.440 4)，结合13C NMR谱数据确定分子式为C24H24O10，不饱和度为13.红外光谱显示该化合物含羟基(3 425 cm-1)、羰基(1 656 cm-1)及苯基(1 609和1 507 cm-1)等官能团.根据其紫外光谱在265、345 nm有最大吸收,推测化合物1为黄酮类化合物[7]，化合物1的1H NMR和13C NMR数据归属，见表1.在黄酮的A环处存在2处单峰信号[δH6.33(1H,s,H-8)和6.15(1H,s,H-6)]以及由H-2′/H-6′和H-3′/H-5′的对称性推导出B环[δH7.75(2H,d,J=8.0 Hz,H-2′,6′)和6.88(2H,d,J=8.0 Hz,H-3′,5′)]为1个苯环A2X2自旋系统[7],此外，通过化学位移为5.66(1H,s,H-1″)和0.73(3H,d,J=4.0 Hz,H-9′′)的质子信号以及HMBC谱(图1)中，δ5.66(H-1″)的糖端基氢信号与δ135.5(C-3)的碳信号远程相关，提示黄酮3位连有1个α-鼠李吡喃糖.化合物1的13C NMR谱(表1)显示存在24个碳信号(其中2组为对称碳，δC132.1和δC116.7处的C-2′/C-6′和C-3′/C-5′)，24个碳信号包括15个黄酮骨架上的碳，鼠李吡喃糖上的6个碳和二氧异丙基上的3个碳[δC110.5(s,C-6″),26.7(q,C-7″),28.5(q,C-8″).通过查阅文献[7]，对比相关数据，发现化合物1与已知化合物quercetin-3-O-α-L-rhamnopyranoside最为相似，其不同在于鼠李吡喃糖的化学位移变化以及额外的二氧异丙基信号.在1H NMR光谱中，H-5″的化学位移从3.99升高到4.47(Δ+0.48)和H-4″的化学位移从3.52升高到3.90(Δ+0.38).13C NMR谱中，C-1″的化学位移从102.3降低至99.8(Δ-2.5)和C-3″的化学位移从71.6升到74.8(Δ+3.2)，C-4″化学位移从71.1升高到79.6(Δ+8.5)以及C-5″化学位移从70.8升高为77.3(Δ+6.5)；在HMBC谱(图1)中，δ3.90(H-4″)，δ4.47(H-5″)，δ1.33(H-7″)，δ1.40(H-8″)的氢信号与δ110.5(C-6″)的碳信号有相关，提示鼠李吡喃糖的4″和5″位连有1个二氧异丙叉基.综上所述可推断化合物的结构，确定化合物1为山奈酚-3-O-[(4″,5″-O-异丙叉基)-α-L-吡喃鼠李糖苷].

表1 化合物1的 1H NMR和 13 C NMR数据(400/100 MHz,CD3OD)

化合物1[α]22.3D=-129.1(c=0.11,MeOH);UVλMeOH max(nm):345(3.76),265(3.91);IRνKBr max(cm-1):3 425,1 656,1 609,1 507,1 450,1 361,1 176,1 086,839.

化合物2黄色针晶(甲醇).ESI-MS(m/z):433.1[M+H]+,分子式为C21H20O10.1H NMR(400 MHz,CD3OD)δ:7.71(2H,ss,2′-H,6′-H),6.88(2H,ss,3′-H,5′-H),6.32(1H,d,J=2.1 Hz,6-H),6.14(1H,d,J=2.0 Hz,8-H),5.33(1H,d,J=1.5Hz,1″-H),4.19(1H,dd,J=3.2,1.7 Hz,2″-H),3.67(1H,m,3″-H),3.28(2H,m,4″-H,5″-H),0.87(3H,d,J=5.6Hz,6″-H),13C NMR(100 MHz,CD3OD)δ:179.4(C-4),165.5(C-2),162.9(C-4′),161.3(C-9),159.1(C-7),158.3(C-5),136.2(C-6),132.0(C-2′,C-6′),122.6(C-1′),116.5(C-3′,C-5′),105.9(C-10),103.4(C-1′′),99.9(C-8),94.9(C-3),73.2(C-5″),72.1(C-4″),72.0(C-3″),71.9(C-2″),17.7(C-6″).以上数据与文献报道[8]一致，故鉴定化合物2为山奈酚-3-O-β-D-吡喃鼠李糖苷,结构见图2.

化合物3黄色针晶(吡啶).ESI-MS(m/z)303.2[M+H]+,分子式为C15H10O7.1H NMR(400 MHz,C5D5N)δ:6.75(1H,d,J=2.5 Hz,8-H),6.79(1H,d,J=2.1 Hz,6-H),7.4(1H,dd,J=8.4,2.7 Hz,5′-H),8.10(1H,dd,J=8.4,2.4 Hz,6′-H),8.66(1H,d,J=2.2 Hz,2′-H),13C NMR(100 MHz,C5D5N)δ:177.75(C-4),165.97(C-7),162.88(C-5),157.88(C-9),148.17(C-3′),147.56(C-2),138.38(C-3),121.48(C-6′),117.11(C-2′,C-5′),104.89(C-10),99.65(C-6),94.73(C-8).以上数据与文献报道基本一致[9]，故鉴定化合物3为3,5,7,3′,4′-五羟基黄酮,结构见图2.

化合物4黄色粉末(甲醇).ESI-MS(m/z):287.1[M+H]+,分子式为C15H10O6.1H NMR(400 MHz,CD3OD)δ:6.21(1H,s,8-H),6.42(1H,s,3-H),6.94(2H,d,J=8.0 Hz,3′,5′-H),8.12(2H,d,J=8.0 Hz,2′,6′-H).13C NMR(100 MHz,CD3OD)δ:177.6(C-4),165.7(C-2),162.7(C-4′),160.7(C-9),158.4(C-7),148.2(C-5),137.3(C-6),130.8(C-2′,C-6′),123.9(C-1′),116.5(C-3′,C-5′),104.7(C-10),99.4(C-8),94.6(C-3).以上数据与文献报道[10]一致，故鉴定化合物4为高山黄芩素,结构见图2.

化合物5黄色针晶(吡啶).ESI-MS(m/z):287.1[M+H]+,分子式为C15H10O6.1H NMR(400 MHz,C5D5N)δ:8.28(1H,d,J=1.4 Hz,H-8),7.94(1H,s,H-6),7.89(1H,dd,J=1.6,1.2Hz,H-2′),7.67(1H,d,J=8.0 Hz,H-6),7.29(1H,H-3,H-5′).13C NMR(100 MHz,C5D5N)δ:183.1(C-4),166.1(C-7),165.2(C-2),163.4(C-9),158.8(C-5),152.0(C-4′),148.1(C-3′),123.2(C-1′),119.8(C-6′),117.2(C-5′),114.9(C-2′),105.3(C-10),104.3(C-3),100.2(C-6),95.1(C-8).以上数据与文献报道[11]一致，故鉴定化合物5为5,7,3′,4′-四羟基黄酮,结构见图2.

3 结语

对粉花山扁豆茎叶体积分数90%乙醇提取物V(二氯甲烷)∶V(甲醇)=9∶1部分进行了化学成分研究，分离得到5个黄酮类化合物，包括1个未见报道的黄酮类化合物(1)，以及4个已知的黄酮类化合物(2～5).根据化合物的理化性质、波谱数据及查阅相关文献，分别将其鉴定为山奈酚-3-O-[(4″,5″-O-异丙叉基)-α-L-吡喃鼠李糖苷(1),山奈酚-3-O-β-D-吡喃鼠李糖(2),3,5,7,3′,4′-五羟基黄酮(3),高山黄芩素(4),5,7,3′,4′-四羟基黄酮(5).苏木亚科决明属(CassiaL.)植物在抗炎、抗病毒等方面也显示出较大的药用潜力，在以后的工作中，将对所分离的化合物进行相关药理活性筛选力争从该属植物中分离鉴定出更多具有药理活性的化合物.