治带片中4种药物的薄层鉴别

黄志端，吴敏，魏茂陈

（1.贵阳职业技术学院，贵州 贵阳 550000；2.贵阳新天药业股份有限公司，贵州 贵阳 550000）

0 引言

治带片的处方含有苦参、苍术、墓头回、知母、金樱子五味药材，其功效在于止带、清利湿热，在临床中常常用以治疗女性白带、赤带、黄带等症。《中华人民共和国卫生部药品标准》(中药成方制剂)第一册第104页[标准编号：WS3-B-0102-89]所收载的品种治带片是其处方来源[1]。在原有的标准项之中，并不存在鉴别项，为对其质量作出很好地把控，使其质量标准更为严格，本试验最终确定以药典法[2]，通过薄层色谱来定性鉴别苍术、金樱子、知母及苦参。

1 仪器与试药

本试验采用了BYCDE薄层自动铺板器、电子天平（1/10000）BS-210S型两种实验仪器。试药则选用了中国药品生物制品检定所提供的金樱子对照药材（批号：121047-200302）、菝葜皂苷元对照品（批号：110744-200509）、苍术（北苍术）对照药材（批号：120983-200503）、苦参碱对照品（批号：121019-200705）。贵阳新天药业股份有限公司提供的治带片（批号：20101201、20101202、20101203）。此外还有甲醇、氯仿、乙酸乙酯、二氯甲烷、环己烷、正丁醇、正己烷、丙酮、苯、甲苯、石油醚（60-90℃）、冰醋酸、氨水、硫酸、乙醇，均为分析纯。香草醛、次硝酸铋、碘化钾、对二甲氨基苯甲醛均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 治带片中金樱子的薄层鉴别

（1）对照药材溶液的制备：选取1 g金樱子对照药材浸泡于甲醇（25 mL）之中，振摇均匀，在超声环境下进行提取，持续时间为三十分钟，过滤处理，蒸干滤液，将20 mL的水添至残渣之中，使其溶解，然后将其进行转移，置于分液漏斗内，采用20 mL的石油醚（60-90℃）作萃取处理，重复两次，再将石油醚液去除，然后采用20 mL的水饱合正丁醇再次实施萃取，重复两次，对正丁醇液进行合并，而后将氨试液（40 mL）加入其中，振摇后放置，将上层液分离出来作蒸干处理，然后使用1 mL甲醇将残渣溶解，据此来获得对照药材溶液。

（2）供试品溶液的制备：将药品的包衣去除，研磨内容物，使其粉末细腻，称量选取4 g，与前文①的处理方式相同，据此获得供试品溶液。

（3）阴性对照溶液的制备：此外取阴性样品（处方不包含金樱子），与前文②的处理方式相同，据此来获得阴性对照溶液。

（4）薄层色谱条件与结果：在相同的硅胶G薄层板（黏合剂选用的是羧甲基纤维素钠）中分别点上10μl的供试品（3个批号）、对照药材、阴性对照溶液，选用比例为（3：5：7）的甲醇-乙酸乙酯-环己烷溶液作为展开剂，展开后将其晾干，然后将浓度为10%的硫酸乙醇溶液喷洒于薄层板之上，使用105℃的温度进行加热，至斑点呈现出清晰的颜色。最终结果表明，对于供试品色谱而言，对应对照药材色谱的相同位置，其斑点的颜色一致，且阴性样品不存在干扰，点间有较理想的分离度，如图1所示。

图1 治带片中金樱子TLC图

2.2 治带片中知母的薄层鉴别

（1）对照品溶液的制备：对照品溶液由菝葜皂苷元对照品加苯配制而成，浓度为0.5 mg/mL。

（2）供试品溶液的制备：选取成品，将其包衣去除，研磨内容物，使其粉末细腻，称量选取1 g，将乙醇（20 mL）添至其中，进行回流提取，持续四十分钟，静置冷却后吸取10 mL上清液，通过水浴锅将其蒸干，然后将水（10 mL）添至残渣之中使其溶解，并转移至锥形瓶内，将1 mL盐酸添至其中进行回流操作，持续一小时，将其冷却，直至与室温相当，再进行过滤，将滤液去除，另于锥形瓶内置入滤纸、滤渣，将50 mL二氯甲烷添至其中，振摇使其溶解，再进行过滤处理，然后取滤液将其蒸干处理，最后将二氯甲烷（2 mL）添至其中使其溶解，以此获得供试品溶液。

（3）阴性对照溶液的制备：此外取阴性样品（处方不包括知母），研磨使其呈细粉状，称取1 g，将乙醇（20 mL）添至其中，进行回流提取，持续四十分钟，静置冷却后将10 mL上清液吸取，通过水浴锅将其蒸干，然后将水（10 mL）添加至残渣之中使其溶解，并转移至锥形瓶内，将1 mL盐酸添至其中进行回流操作，持续一小时，将其冷却，直至与室温相当，再进行过滤，转移滤液到分液漏斗内，将20 mL二氯甲烷添至其中，进行振摇萃取，重复萃取两次，然后将二氯甲烷液合并进行蒸干处理，再将二氯甲烷（2 mL）添至残渣内以溶解残渣，以此来获得阴性对照溶液。

（4）薄层色谱条件与结果：在相同的硅胶G薄层板（黏合剂选用的是羧甲基纤维素钠）中分别点入10μl的供试品（3个批号）、阴性对照溶液，5μl的对照品溶液，选用比例为（12：4：0.1）的环己烷-乙酸乙酯-冰醋酸溶液作为展开剂，展开后将其晾干，然后将5%香草醛的10%硫酸乙醇溶液喷洒于薄层板之上，使用105℃的温度进行加热，至斑点呈现出清晰的颜色。最终结果表明，对于供试品色谱而言，对应对照品色谱的相同位置，其斑点的颜色一致，且阴性样品不存在干扰，点间有较理想的分离度，如图2所示。

图2 治带片中知母TLC图

2.3 治带片中苦参的薄层鉴别研究

（1）对照品溶液的制备：对照品溶液由苦参碱对照品加甲醇配制而成，浓度为0.15 mg/mL。

（2）供试品溶液的制备：选取成品，将其包衣去除，研磨内容物，使其粉末细腻，称量选取1 g，于锥形瓶内放置，将浓氨溶液1 mL添至其中，静置，保持五分钟，再将乙醇（20 mL）添至其中，超声处理，持续半小时，然后进行过滤操作，蒸干滤液，将甲醇（2 mL）添至残渣中使其溶解，以此获得供试品溶液。

（3）阴性对照溶液的制备：选取阴性样品（处方不包含苦参），与前文2.3（2）处理方法一致，据此来获得阴性对照溶液。

（4）薄层色谱条件与方法：在相同的硅胶G板（黏合剂为2%的氢氧化钠溶液配制的羧甲基纤维素钠）中分别点入10μl的供试品（3个批号）、对照品、阴性对照溶液，选用比例为（8：3：0.5）的甲苯-丙酮-甲醇溶液作为展开剂，展开后将其晾干，然后将碘化铋钾溶液喷洒于薄层板之上，至斑点呈现出清晰的显色。最终结果表明，对于供试品色谱而言，对应对照品色谱的相同位置，其斑点的颜色一致，且阴性不存在干扰，图3为最终结果。

图3 治带片中苦参TLC图

2.4 治带片中苍术的薄层鉴别研究

（1）对照药材溶液的制备：称取0.5 g的北苍术对照药材，将正己烷（4 mL）添至其中，超声处理，持续十五分钟，进行过滤处理，挥发滤液，使其体积为1 mL，据此获得对照药材溶液。

（2）供试品溶液的制备：将成品的包衣去除，研磨内容物，使其粉末细腻，称量选取1g，与前文2.4.1的处理方式相同，据此获得供试品溶液。

（3）阴性对照溶液的制备：选取阴性样品（处方不包含苍术），与前文2.4（2）处理方法一致，据此来获得阴性对照溶液。

（4）薄层色谱条件与结果：在相同的硅胶G薄层板（黏合剂选用的是羧甲基纤维素钠）中分别点入5μl的供试品（3个批号）、对照药材、阴性对照溶液，选用比例为（20：1）的石油醚（60-90℃）-乙酸乙酯溶液作为展开剂，展开后将其晾干，然后将5%对二甲氨基苯甲醛的10%硫酸乙醇溶液喷洒于薄层板之上，使用105℃的温度进行加热，至斑点呈现出清晰的显色。最终结果表明，对于供试品色谱而言，对应对照药材色谱的相同位置，其斑点的颜色一致，且阴性不存在干扰，点间有较理想的分离度，图4为最终结果。

图4 治带片中苍术TLC图

3 讨论

就治带片的知母鉴别项中，为何对供试品、阴性样品两种溶液采用差别性的处理方法展开下列分析：试验摸索期间，两种溶液皆沿用了2.2（3）所使用的处理手段，结果察觉到阴性对照品、供试品色谱中与对照品的相同位置均不存在斑点，所以判断此法会将样品内所含全部皂苷类成分去除，因此对方法加以变更，采用2.2（2）的处理方案，结果表明尽管供试品色谱中存在和对照品色谱位置、颜色一致的斑点，但阴性样品却存在干扰。在认真查阅文件后得知治带片仅有知母含有菝契皂苷元[3-9]，所以对阴性样品使用2.2（2）的处理方法尽管会存在一定干扰，但否定了菝契皂苷元在发挥作用，因此阴性样品最终确定2.2（3）这一可能彻底清除皂苷类成分的处理方案，供试品溶液确定2.2（2）的可将菝契皂苷保留的处理方案。