三种白术提取物对雏鸡新城疫抗体水平的影响

曹 琪，王 萍，吉木依哈木，唐 颖，王思芦

（西昌学院动物科学学院，四川 西昌 615013）

0 引言

目前，许多鸡的病毒性传染病如新城疫、法氏囊病、禽流感等主要通过相关疫苗的免疫接种来进行疾病的预防，但在生产实践中疫苗的免疫效果受到很多因素如疫苗质量、免疫程序、母源抗体、免疫应激、饲养管理等的影响，导致临床上疫苗的免疫效果参差不齐，免疫失败仍然会发生疫情。免疫增强剂可以通过调节动物的细胞或体液免疫功能，增强疫苗的免疫效果，如黄芪多糖在畜禽生产上应用广泛，具有良好的经济和社会效益。白术（Atractylodes macrocephala,AM）别名桴蓟、于术、冬白术、淅术等，属于菊科苍术属多年生草本植物，以根茎入药。现代研究表明白术具有抗炎镇痛[1-2]、提高免疫[3]、抗溃疡[4]、抗氧化[5]、抗菌抗肿瘤[6]等多种药用功能。本试验以白术的三种提取物作为研究对象，探讨其对雏鸡体液免疫功能的影响，为白术作为免疫增强剂在生产实践中的应用提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 试验动物

健康青脚麻鸡20日龄70羽，购自西昌安宁镇农贸市场，雏鸡饲料购自新希望股份有限公司。

1.1.2 试验器材

酒精灯、铁架台、圆底烧瓶、冷凝管、牛角管、锥形瓶、电磁炉、量筒、电子天平、旋转蒸发仪等，均由动科院基础医学实验室提供。

1.1.3 试验药品与试剂

白术、黄芪多糖(宁夏牧川生物科技有限公司，批号20170324)、新城疫疫苗（青岛易邦生物工程有限公司，批号160010201）、新城疫抗体Elisa试剂盒（武汉纯度生物科技有限公司，批号20171011）、无水乙醇等，均由动科院基础医学实验室提供。

1.2 方法

1.2.1 制备三种白术提取物

将干燥白术适当粉碎后，分别制备3种提取物。通过煎煮法制备白术水提物：称取400 g白术加入适量超纯水，武火煮沸后以文火煎煮30 min后过滤，保留滤液，将滤渣重复以上步骤煎煮2次，合并滤液煮沸浓缩至4 000 mL，待冷却后分装，冷藏备用；以浸提法制备白术醇提物：取400 g白术以80%乙醇浸泡6 d，过滤取滤液，充分回收乙醇后，得到醇提物沉淀，以400 mL超纯水制备成混悬液；通过水蒸气法提取白术挥发油：将150 g白术置于圆底烧瓶内，加入适量蒸馏水进行煮沸，收集含挥发油的水蒸气冷凝液100 mL，冷藏备用。

1.2.2 动物分组与处理

将70羽20日龄雄性雏鸡常规饲养2 d后，点眼接种新城疫疫苗后随机分为7个组，分别为空白组、白术醇提物（AMC）低浓度组（5 mg/mL）、AMC高浓度组（10 mg/mL）、白术水提物（AMS）低浓度组（0.5 mg/mL）、AMS高浓度组（1 mg/mL）、白术挥发油组（10 mg/mL）以及阳性药物组，每组10羽。除了空白组和阳性组外，各试验组每天取80 ml以上不同浓度的提取物分别与150 g饲料混匀后给药；阳性组每天以黄芪多糖1.5 g与150 g饲料混匀给药；除空白组按常规饲养外，其余各组每天给药1次，其余时间正常饲养管理，连续给药16 d。各组分别于给药后第8 d和15 d分别翼下静脉采血分离血清，-20℃冻存待测。

1.2.3 3种白术提取物对雏鸡新城疫抗体水平的影响

通过鸡新城疫抗体Elisa试剂盒对各组血清的抗体浓度进行检测，具体操作按试剂盒说明书进行。

1.2.4 数据处理

2 结果

2.1 三种白术提取物的制备

以药材质量与各提取物的终体积计算不同提取物的生药浓度，结果表明，白术水提液的终浓度为0.1 g/mL、白术醇提液的终浓度为均为1 g/mL，白术挥发油的终浓度为1.5 g/mL，使用时根据1.2.2的要求稀释后给药。

2.2 三种白术提取物对雏鸡新城疫抗体水平的影响

结果表明，给药8 d后，各组与空白组相比，抗体水平均无显著差异，其中高剂量白术醇提物组和阳性组的新城疫抗体水平分别升高了15.35%（P＞0.05）和15.32%（P＞0.05）；与阳性组比，除了白术醇提物低剂量组的抗体水平显著低于阳性组（P＜0.05），其余各白术提取物对新城疫抗体水平的影响差异均不显著，其中高剂量白术醇提物的效果与黄芪多糖最接近。

给药15 d后，与空白组相比，各组的新城疫抗体水平均有不同程度的升高，其中效果最好的是高剂量白术水提物，血清抗体浓度升高了61.37%（P＜0.05），其次是低剂量白术醇提物，使抗体浓度提高32.57%（P＜0.05）；与黄芪多糖相比，高剂量白术水提物使抗体水平显著提高了45.02%（P＜0.05），其余白术提取物对雏鸡体液免疫的促进作用均不同程度优于黄芪多糖，但差异均不显著。试验结果提示，白术水提物及醇提物可能含有促进雏鸡体液免疫功能的有效成分，而白术挥发油在本次供试剂量下对体液免疫无显著影响。

表1 白术对雏鸡新城疫抗体水平的影响 （n=10）

3 讨论

3.1 白术提取物的生物活性

据报道，白术的生物活性成分主要是水溶性多糖和挥发油类如苍术酮、白术内酯类等[6-8]。黄利等[3]报道白术水提液能拮抗环磷酰胺引起的小鼠白细胞总数下降、胸腺萎缩、提高巨噬细胞功能及血清溶血素。此外，白术水提物还具有调节炎症细胞因子IL-2、IL-17，纠正免疫紊乱的作用[4]。本试验结果表明高剂量的白术水提物可显著提高雏鸡的新城疫抗体水平，提示白术水提物可促进B细胞功能，与以上研究结论一致。

研究发现，白术醇提物能抑制二甲苯、角叉菜胶、醋酸等炎症刺激因子引起的急性炎症，并具有镇痛作用[1]，还能抑制弗氏完全佐剂引起的关节炎及炎症细胞因子[2]，表明白术醇提物含有抗炎活性成分。本试验尚未发现白术醇提物有明显的免疫增强作用。

白术挥发油的主要成分是莪术烯，具有抗肿瘤作用[6]，抗氧化作用[9]。此外，关晓辉等[10]报道白术挥发油能增强巨噬细胞吞噬功能及迟发变态反应，可能通过提高机体非特异性免疫发挥抗癌作用。本试验发现白术挥发油对雏鸡的特异性免疫功能没有显著影响，表明白术挥发油的可能通过其他途径影响动物免疫功能。

3.2 白术对鸡免疫功能的影响

侯凯俪等[11]以黄芪为阳性对照，比较分析了白术水煎剂对鸡新城疫疫苗免疫效果的影响，结果表明口服黄芪及白术水煎剂于二免后1周，雏鸡的抗体效价显著高于空白对照组。李婉雁等[12]比较了白术多糖、黄芪多糖对雏鸡脾脏淋巴细胞体外增殖的影响，结果表明白术多糖抗应激能力优于黄芪多糖，可提高淋巴细胞在热应激环境的增殖的能力。本试验以黄芪多糖为阳性对照，发现在连续给药15 d后，高剂量白术水提物的体液免疫增强效果显著优于黄芪多糖，其中活性成分可能是水溶性白术多糖，可将其作为免疫增强剂进行应用。

3.3 白术在家禽养殖方面的应用前景

目前，国内外都在积极倡导绿色生态养殖，生产无公害动物性食品，而采用天然、高效、无毒、无残留的中药作为免疫增强剂不但可以提高疫苗免疫效果，还能作为抗生素替代品有效防治动物疫病，提高养殖的经济效益，满足社会需求。本试验研究表明，白术的水提物具有显著的免疫活性，可提高雏鸡体液免疫功能，具有较大的开发和应用价值。