Origin软件在福林-酚试剂法测定蛋白含量实验数据处理中的应用

陈淑华 李善妮 马昌杯 朱飞舟 张文 殷渊

摘要：运用Origin软件对福林-酚试剂法测定蛋白含量实验进行数据处理分析和制作标准曲线图，方便、快捷，并且能大大提高实验结果的准确度，提升实验教学效果。

关键词：Origin软件;蛋白质定量;数据处理

中图分类号：G642.0     文献标志码：A     文章编号：1674-9324（2019）51-0267-02

蛋白质含量测定法是本科生物化学实验教学中最常用、最基本的分析方法之一。福林（Folin）-酚试剂法是目前测定蛋白质浓度应用最广泛的经典方法之一。其原理是采用蛋白质与福林酚试剂反应，生成深蓝色复合物，蓝色产物的深浅与蛋白质含量成正比。可利用分光光度计在660nm波长下测定相应吸光度，再绘制标准曲线，从而确定蛋白质含量。此法可用于测定样品中蛋白质浓度的范围是25—250μg/ml，是生物化学教学中的一个必不可少的基础实验[1]。传统的生物化学实验教学对数据处理采用手工计算和坐标纸描点作图，制作的标准曲线可出现多种可能的形式，因而产生人为因素的误差。

Origin是OriginLab公司研发的专业科研软件，具有完善的数据分析处理和专业制图能力。绘制的图形使较为复杂的数据分析变得简单快捷且精确，能消除人工处理数据带来的实验误差[2-4]。本文以福林-酚试剂法测定蛋白含量为例，介绍Origin软件在生物化学蛋白质定量实验数据处理中的应用。

一、实验方法

取7支干净试管，在6支试管中分别吸取250μg/ml标准蛋白质溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml，再分别取蒸馏水1.0、0.8、0.6、0.4、0.2、0ml。在第7支试管中仅加入1ml待测样品。然后在所有试管中加入试剂甲5ml，混匀，室温放置10min后，再加入试剂乙0.5ml，立即摇匀，显色30min后，以空白管为对照，测定各管A660值。以A为纵坐标，蛋白质C（浓度）为横坐标，绘制标准曲线。根据第7管A660计算出样品的蛋白含量。表1是实验数据。

二、采用Origin软件进行数据处理和制图

1.采用Origin软件对数据生成散点图。在电脑上下载并安装Origin8.0或9.0，打开软件输入数据如图1（左）所示，在新建的表中A（X）一栏输入各标准蛋白浓度数据，在B（Y）一栏输入相应标准管A660值。选中所有数据，点击散点（或工具栏Plot-Symbol-Scatter），生成相应散点图（见图1右），并设定浓度为X轴，吸光度为Y轴。

2.运用Origin软件对实验数据进行处理分析和制作标准曲线图。点击散点图，选择Analysis-Fitting-Fit linear-Open Dialogue进行线性拟合并设定截距为0，可得到标准曲线。显示其斜率为0.00202，R2为0.99728。R2越接近1，表明线性越好。再双击X轴或Y轴，在弹出的窗口中，对相应坐标轴的刻度大小和格式进行设定，可得到美观的标准曲线图（见图2）。

根据线性方程y=0.00202x，可知A660=0.00202C。将待测样品的A660值0.256代入公式，即可计算出C≈126.73μg/ml。

三、采用坐标纸手工描点作图

传统的生物化学实验教学对数据采用手工计算和坐标纸描点绘图（见图3）。根据待测样品A660为0.256，可由标准曲线上查出相应蛋白浓度值约为126μg/ml。经手工描点绘制标准曲线具有很大的主观随意性，由此产生人为因素的误差，这导致最终分析结果的准确度和客观性均较差，难以达到质控要求。

四、结语

在实验教学过程中，将Origin软件处理數据引入生物化学实验，方便、快捷，并且可大大提高实验结果的准确度和精确度，能保证结果的科学性、客观性和直观性。此举可激发学生课堂学习的主动性，有助于提升实验教学效果。同时基于量化的实验结果使教师在批阅学生的实验报告时评价更公正和客观。在大数据背景下，高校教师需不断改进实验教学方法，将Origin软件应用与生物化学实验数据处理相结合，取代传统方法处理数据将成为必然趋势。

参考文献：

[1]曾卫民，李文凯，傅俊江.生物化学与分子生物学实验教程[M].北京：科学出版社，2013：95-96.

[2]邢琳，杨威，余林坡，等.Origin软件在实验数据及图形处理中的应用[J].科技视界，2014，（13）：54-55.

[3]谭江成，杨欣，刘瞻，等.物理化学实验数据处理中Origin软件的应用[J].广州化工，2016，（9）：177-179.

[4]闫宗兰，赵鹏英，王湛.Origin软件在磷的比色测定实验数据处理中的应用[J].教育教学论坛，2018，（14）：264-266.