全自动生化分析仪吸样致样本污染对乙型肝炎病毒检测的影响

辛红菊 沈阳市红十字会医院 输血科 （辽宁 沈阳 110013）

内容提要： 目的：全自动生化分析仪吸样致样本污染对乙型肝炎病毒检测的影响。方法：选取15份HBsAg含量不等乙肝阳性标本和15份乙肝两对半阴性标本作为本次研究的观察对象。按照采集顺序，在生化分析仪的检测下，探究污染前后酶标仪HBsAg的数据，HBV-DNA含量进行统计，并细致分析，观察生化分析仪影响的大小。结果：生化分析仪监测对HBsAg的影响并不是很大，另外分析，针对于PCR定量监测中，HBV-DNA的含量具有一定的影响。结论：仪器的状态决定了污染的程度，因此就需要先确定生化仪检测对其免疫影响的程度，然后再进行共用样本。

从一定的程度上看，生化分析仪在监测样本的时候，很可能出现携带交叉污染的情况[1]。这个时候出现的误差是0.32～0.7mmol/L的阶段上，这个污染的范围还是可以接受的。换句话说，在对生化分析仪机型冲洗之后，生化与免疫项目在共用一份样本的情况下，生化分析仪出现携带污染的时候，对于HBV检测的影响微乎其微[2]。

1.资料与方法

1.1 一般资料

选取15份HBsAg含量不等乙肝阳性标本和15份乙肝两对半阴性标本作为本次研究的观察对象。按照采集顺序，在全自动生化分析仪器的检测下，探究污染前后酶标仪HBsAg的数据，HBV-DNA含量进行统计，并细致分析，接着观察全自动生化仪，影响的大小。在酶免法检测HbsAg和PCR定量检测HBV-DNA进行取样的前后进行分析，探究样本携带污染的影响大小是多少，并在此基础上，分析生化与免疫共用样本情况下的可行性[3]。

1.2 方法

首先，先选定全自动生化分析仪还有试剂。收集样本，对HBV-M模式，然后大三阳标本5份、小三阳5份、弱阳性5份，然后进行编号，1组，从1组①开始，编号到1组⑤，2组从2组①开始，编号到2组⑤，3组从3组①开始，编号到3组⑤，然后大三阳与小三阳标本，需要保持HBsAg的S/CO值都在30～50左右。按照标准，反复进行测试三次，全部通过，符合实验需求。样本收集后构建实验步骤，处理好的标本，使用生化分析仪进行操作，在操作前，先酶标平行三次之后再继续检测，这样就可以按照酶标仪的平均值进行读取，最后记录数据。对于平行3次PCR，进行定量检测HBVDNA，最终取得平均数值，并统计记录下来作为分析。然后把标本按阳性与阴性间隔放置，放置顺序是，1组—1a组—2组—2a组—3组—3a组，进行生化分析仪检测。常规项目中包含了ALT、AST、BUN、CR、GLU、TG、TCHC等主要内容[4]。由于生化与免疫检查情况不尽相同，因此，这里需要在经历过生化分析仪检测之后，接着进行密封，隔天使用酶标平行检测三次，取均值[5]。与此同时，还需要对所有标本再实现平行三次，PCR定量检测HBV-DNA。然后将相关的数据记录下来。

1.3 评价指标

探究污染前后酶标仪HBsAg的数据，HBV-DNA含量进行统计，分析全自动生化分析仪的检测下交叉污染程度的大小，影响的大小。

1.4 统计学分析

使用SPSS 20.0软件对研究得到的数据进行统计处理，得到的统计数据用±s来进行表示，用t来对计量资料检验，计数资料的检验则通过χ2，得到的差异具有统计学意义（P＜0.05）[6]。

2.结果

阳性乙肝（HBV-M）血清样品生化仪检测前后HBsAg酶标值的比较中，大三阳从1组①开始，编号到1组⑤中，乙肝HBsAg酶标仪读数（OD值），生化分析前，2741，2791，2899，2885，2751，生化分析后2653，2786，2754，2858，2846，小三阳从2组①开始，编号到2组⑤，乙肝HBsAg酶标仪读数（OD值），生化分析前1786，2403，2587，2682，2261，生化分析后1860，2351，2650，2715，2089。阳性且S/CO值＜10，P＞0.05，差异无统计学意义，污染不明显。

经生化分析仪检测前后阳性样本用PCR定量方法测得HBV-DNA拷贝数均值中，大三阳乙型肝炎病毒（HBV-DNA）定量（拷贝数/mL），从1组①开始，编号到1组⑤中，生化分析前9934390，11806400，1866.99，7682620，16250210，生化分析后9862150，12025180，1903.45，7913250，15438250。小三阳乙型肝炎病毒（HBV-DNA）定量（拷贝数/mL）从2组①开始，编号到2组⑤，生化分析前21.3421，383.736，260.643，548.245，1255330，生化分析后18.1182，328.162，192.650，553.253，1183250。弱阳性从3组①开始，编号到3组⑤，生化分析前9.3222，13.2574，19.2107，242.235，26.3258，生化分析后11.2015，9.3522，17.9258，235.865，27.2154。差异无统计学意义，污染不明显。最后在经生化分析仪检测前后阴性样本用PCR定量方法测得HBV-DNA。发现，HBV-DNA阴性样本污染非常明显，阴性样本可变为阳性。但是在当拷贝数＜106时，污染不是很明显。

3.讨论

从以上可以发现，全自动生化分析仪检测会造成样品污染，在阴性标本HBV-DNA定量中可以体现，但是针对于酶免HBsAg读数中的阳性标本HBV-DNA定量影响却不明显。这个可能和样本设计相关，但是也可能酶免HBsAg用样品量（50μL）比较大。实验中，生化仪检测污染对酶免HBsAg的影响，是在接受的范围之内的，但是吸样后不冲洗吸样针或者不到位，都可以能造成大程度的污染。其中，ELISA灵敏度虽然很高，但是还是会造成假阳性。不同的仪器，样品携带污染也存在一定的差异性，这个时候就需要定期的对仪器进行保养和更换。污染率都在1%以下，都不会对实验带来很大的污染，但是会造成免疫分析假阳性。因此，生化项目与免疫分析不宜共用标本，如果迫不得已，需要根据自身实际情况进行设计实验。确定全自动生化分析仪样本携带污染的影响程度并不是很大的时候，才可以进行实验。