太白草药马牙七的成分鉴定及抗氧化作用

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(1.宝鸡文理学院 化学化工学院，陕西省植物化学重点实验室，陕西 宝鸡721013；2.宝鸡市中医医院，陕西 宝鸡721001)

马牙七，别名九子莲，为兰科虾脊兰属植物流苏虾脊兰(CalanthefimbriataFranch.)和剑叶虾脊兰(CalanthedavidiiFranch.)的假鳞茎和根[1-2]。为多年生草本，其结节状的根茎上面横列有7～10个长卵形的鳞茎或圆柱形的茎基，形似马牙故而得名。马牙七分布于我国陕西，甘肃，湖北等地。属“太白七药”之一。性凉，味辛，苦。具有清热解毒，散瘀止痛的功效。用于治疗咽喉肿痛，风火牙痛，痈肿，瘰疬，毒蛇咬伤。也用于瘀血阻滞引起的胁痛，胃痛，闭经，以及跌打损伤等，疗效肯定。但目前马牙七的应用仍局限于秦岭当地，对马牙七所含化学成分及药理作用研究的报道极其有限。为开发和推广秦岭地方性药材，本实验以流苏虾脊兰(CalanthefimbriataFranch.)为材料，采用一系列化学方法对马牙七植物所含的化学成分进行初步的鉴定，并进行提取物的抗氧化作用观察，以便为进一步的研究提供一些实验室依据。

1 实验材料及设备

马牙七(采自太白县)，经陕西中医药大学胡本祥教授鉴定为流苏虾脊兰(CalanthefimbriataFranch.)。茚三酮(上海源叶生物公司)；α-萘酚(上海鼓臣生物)；香草醛(阿拉丁试剂)；盐酸，浓硫酸，95%乙醇，无水乙醇，酒石酸钾钠，无水碳酸钠，三氯化铁，三氯化铝，次硝酸铋，枸橼酸，丙酮，醋酸镁，氢氧化钠，三氯乙酸，铁氰化钾，硫酸铜等均为市售分析纯。

XZ-34流水中药粉碎机(旭朗机械有限公司)；ZF-7型暗箱三用紫外线分析仪(上海嘉鹏科技有限公司)；KQ5200E型超声波清洗器(上海市超声仪器有限公司)；UV-1200紫外可见分光光度计(郑州美谱达仪器有限公司)；DK-98-1电热恒温水浴锅(天津泰斯特仪器有限公司)。

2 实验部分

2.1 前期准备

将马牙七置于通风处晾干后，分别将根、茎、叶粉碎成粉末状。分别称取马牙七各部位粉末50 g，分别加入500 mL蒸馏水和95%乙醇中，超声提取40 min，静置，待沉淀后取上清液过滤，取滤液分别做标记，置于阴凉背光处备用。另取部分上清液经浓缩，干燥，研成粉末备用。

2.2 马牙七中氨基酸的鉴定

分别取各样品(马牙七根、茎、叶的水提取物，马牙七根、茎、叶乙醇提取物)2 mL于试管中，加入1%茚三酮溶液4～5滴，加热待沸腾5 min后取出冷却，观察现象。

2.3 马牙七中糖类的鉴定

α-萘酚实验：分别取样品2 mL于试管中，滴加5% α-萘酚溶液2滴，振摇以使溶液混合，倾斜试管沿管壁滴加浓硫酸4～5滴，观察现象。

斐林反应：分别取6支试管，加入斐林试剂甲液2 mL，滴入4～5滴斐林试剂乙液，摇匀后立即加入样品，摇匀静置。沸水浴下加热10 min后取出冷却，观察现象。

本尼迪克特反应：分别取6支试管，加入样品2 mL于试管中，加本尼迪克特试剂2 mL，于沸水浴中加热10 min，取出放置冷去，观察现象。

2.4 马牙七中皂苷的鉴定

泡沫实验：分别取马牙七水提取物样品2 mL于3支带塞试管中，猛烈振摇3 min，观察现象。

2.5 马牙七中生物碱的鉴定

碘化铋钾实验：分别取6支试管，加入马牙七提取物2 mL，加入1 mL稀盐酸后滴入几滴碘化铋钾溶液，观察现象。

Marquis呈色反应：分别取6支试管，加入样品2 mL，加入30%甲醛溶液0.2 mL和浓硫酸10 mL的混合溶液，观察现象。

线性范围、检出限和定量限参照吕谦、杨小玉、王玉红等[15-19]的方法，将三氯蔗糖标准储备液用蒸馏水稀释，分别配制成浓度为40 μg/L、80 μg/L、160 μg/L、400 μg/L、800 μg/L的5种标准工作液，按1.2节所述的色谱-质谱条件进行测定，绘制标准工作曲线（图2）。

2.6 马牙七中鞣质及酚类的鉴定

三氯化铁实验：分别取马牙七提取物2 mL于试管中，滴加1% FeCl3溶液2～3滴，观察颜色变化。

香草醛-酸实验：分别取样品溶液点于滤纸上，待干燥后，滴入1%香草醛-盐酸溶液2～3滴于点样点，观察是否呈现红色斑点。

2.7 马牙七中黄酮类的鉴定

盐酸-镁粉实验：分别取马牙七提取物2 mL于试管中，加入少量镁粉后滴加浓盐酸4～5滴，将试管在沸水浴下加热几分钟并观察现象。

三氯化铝实验：分别取各样品溶液点于滤纸上，待点样溶液干燥后，喷雾1%三氯化铝EtOH溶液于点样点，在紫外灯下观察实验现象。

硼酸丙酮-枸橼酸丙酮试验：分别取各样品2 mL于试管中，将所取样品在沸水浴下蒸干，向试管中分别加入饱和硼酸丙酮溶液1 mL和10%枸橼酸丙酮溶液1 mL，振摇，在沸水浴下再次将溶液蒸干，将试管置于紫外灯下，观察现象。

碱液试验：分别取洁净毛细管将样品点于滤纸上，干后喷雾1%碳酸钠，观察现象。

2.8 马牙七中蒽醌类的鉴定

醋酸镁反应：分别取马牙七乙醇提物2 mL于试管中，滴加0.5%乙酸镁乙醇溶液几滴，90 ℃水浴加热5 min，观察颜色变化。

Borntrager’s反应：分别取马牙七粉末1 g于试管中，加入10% H2SO4溶液5 mL，水浴条件下加热10 min。待溶液冷却后加入乙醚2 mL，振摇试管，静置片刻分出乙醚层，加入5% NaOH水溶液1 mL，振摇并观察实验现象。

2.9 马牙七提取物还原力的测定

3 结果与讨论

3.1 马牙七提取物中化学成分的判断

马牙七根、茎、叶的水提取物及乙醇提取物于加入茚三酮后均呈蓝紫色，说明其各部位均含有氨基酸。

马牙七的根、茎、叶的水及乙醇提取物于α-萘酚实验时均出现紫色环，说明各部分均含有糖类。三部分的水提物于菲林反应均呈红色，三部分的乙醇提取物于本尼迪克特反应均产生红色沉淀，由此推断各部分均有还原糖存在。

三种马牙七水提物于振摇后均有泡沫产生，其中茎部产生大量泡沫，数分钟后消失，可推断马牙七水提取物都含有皂苷，且茎中含量较高。

于碘化铋钾实验和Marquis呈色反应中，马牙七根和茎的乙醇提取物均产生红棕色物，而叶的醇提物及所有水提物无明显反应，说明其根和茎的乙醇提取物中含有大量的生物碱，在叶中含量较少。水提取物中可能不含或有极少量生物碱。

马牙七根和茎的水提物于三氯化铁试验中均有绿色物生成，于香草醛-酸实验中均产生红色斑点，而叶中现象微弱，各醇提物均无明显阳性反应，表明马牙七水提取物中含有鞣质和酚类，其中根和茎中含量高于叶。

马牙七的根、茎、叶的水及乙醇提取物于三氯化铝试验中，均产生荧光，于硼酸丙酮-枸橼酸丙酮试验中均呈亮青色荧光，于碱液试验中均呈黄色或亮黄色，可见马牙七全株均含有黄酮类物质。

马牙七根、茎、叶水提物于加入乙醚后，乙醚层略显黄色，加入氢氧化钠后乙醚层颜色褪去。在醋酸镁反应中，根和茎的醇提物呈红棕色及橘黄色，叶中无变化。可见马牙七各部分的不同提取物含有不同的蒽醌类物质。

本实验通过多种实验方法测得马牙七中含有氨基酸、还原糖、多糖、皂苷、鞣质、酚类、黄酮类、蒽醌类等物质。茎中各种化合物的含量最高，根中次之，而叶中含量均较少。

3.2 马牙七水提取物还原力的测定

由图1可知，马牙七水提取物具有较强的还原作用，当马牙七浓度为0.062 5 mg/mL时，吸光度值仅为0.117，随着浓度的增大，吸光度值也逐渐增大，当浓度为1 mg/mL时，吸光度值增大到0.812，浓度为2 mg/mL时，吸光度值达1.222，之后随着浓度的增大吸光度值仅有微弱的增强，浓度为8 mg/mL时，吸光度为1.563，由此判断，马牙七水提取物较理想的抗氧化浓度应为2 mg/mL。

图1 马牙七水提物的还原力

药用植物中大多都含有很多种类的化学成分。氨基酸存在于多种植物中。糖类是植物药中最常见的成分之一，多糖具有多种药理活性[3-4]。黄酮类也有广泛的药理作用[5]，如黄酮苷有降压、抑菌、利尿作用，槲皮素、杜鹃素有祛痰作用。蒽醌苷类有泻下作用，有些有抗菌、抗肿瘤作用。人参皂苷有强壮作用，柴胡皂苷有解热镇痛作用等。鞣质是具有复杂结构的酚类化合物，也是药用植物中最常见的一类成分，鞣质在医疗上常用于收敛止血、止泻、抗菌消炎等[6-7]。本实验经过一系列化学方法的测定，得知马牙七中含有氨基酸、还原糖、多糖、皂苷、鞣质、酚类、黄酮类、蒽醌等物质。在马牙七的茎中各种化合物的含量最高，根次之，而叶中含量均比较少。生物细胞在代谢过程中会产生具有很强氧化性质的过氧化物质，这类物质若不及时地被转化，则会对细胞内的蛋白质及DNA等造成损伤而影响生物体的正常功能，在这种情况下，具有还原作用的物质在细胞内便发挥着非常重要的作用。本实验发现，马牙七的根和茎的水提取物具有强的还原性，这方面对生物细胞可起到很好的保护作用。马牙七成分的进一步分离纯化及药理活性将在今后的工作中继续进行。