非洲猪瘟实验检测样品采集、包装与运输技术要求

王海丰

（抚顺市现代农业及扶贫开发促进中心 113006）

非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒引起的猪的一种急性、热性、高度接触性动物传染病，以高热、网状内皮系统出血和高死亡率为特征。世界动物卫生组织（OIE） 将其列为法定报告动物疫病，我国将其列为一类动物疫病。自8 月份沈阳市发生我国首次非洲猪瘟疫情以来，截至目前全国共有17 个省、市、自治区发生60 余起疫情，造成巨大经济损失和社会影响。非洲猪瘟病毒感染的猪只发病临床和剖检症状非常典型，兼顾古典猪瘟和高致病性猪蓝耳病的特征，需经实验室检测来确诊。为保证实验室检测的准确，样品采集、包装和运输技术要求尤为重要。本文从采样方法、样品的记录、保存、包装和运送等技术进行科学系统的介绍，具体如下。

1 采样方法

1.1 全血样品

采血过程中应保持无菌操作。采血前，先用酒精棉对采血部位进行局部消毒。采血完毕，进行局部消毒并用干棉球按压止血。使用含有抗凝血剂（EDTA） 的真空采血管从颈静脉、前腔静脉或耳缘静脉抽取全血。如果猪只已经死亡，可立即从心脏中采血。避免使用含肝素的真空采血管。

1.2 血清样品

使用未加抗凝剂（红色盖子） 的真空采血管从颈静脉、前腔静脉、耳缘静脉采血，或剖检过程收集血液样品。静置分离后，收集血清。如果血清是红色表明样品发生溶血。通常已经死亡动物的血液样品易发生溶血。血清样品在分离后可以立即开展检测，如果需要储存，对于抗体检测，储存在-20℃，但对病毒检测最好储存于-80℃。

1.3 器官和组织样品

可采集脾脏、淋巴结、肝脏、扁桃体、心脏、肺和肾脏样品。脾脏和淋巴结的病毒含量最高。对于死亡时间较长的动物，可采集骨髓样品，也可采集关节内组织液。建议将样品保持在4℃，尽快提交给实验室。如无法及时送样，可将样品储存在冷库或液氮中。样品用10%缓冲福尔马林浸泡30min 以上，病毒可被灭活，可用于PCR 检测。样品的最小需求量：血清1ml；全血1ml；组织样品10g。

1.4 环境样品

可多点采集养殖场环境拭子，如粪便、泔水、饲料等。建议样品4℃以下保存。

2 样品的记录、保存、包装和运送

为保证准确诊断，必须在适当温度下，以最快速度，将样品仔细包装、做好标记和相关记录，以最快路线送到指定的实验室。

采样之前必须致电相关实验室，确保遵循正确的样品提交程序，保证所送样品能在第一时间完成检测及储存。做好样品运输过程中的安全保障工作，避免在运输途中感染其他动物，避免样品被污染。运送的样品必须附有足够数量的冷却材料（如冰袋），以防变质。

3 采样信息记录

采样的同时应填写采样单。采样单应用钢笔或签字笔逐项填写（一式三份）。样品标签和封条应用签字笔填写。保温容器外封条应用钢笔或签字笔填写。小塑料离心管上可用记号笔做标记。应将采样单和病史资料装在塑料包装袋中，并随样品送实验室，每个样品应能对应到来源动物。样品信息至少应包括畜主姓名和养殖场地址；养殖场饲养动物品种及数量；疑似或被感染动物或易感动物种类及数量；首发病例和继发病例的日期；感染动物在畜群中的分布情况；死亡和出现临床症状的动物数量及年龄；临床症状及其持续时间，死亡情况和时间等；饲养类型和标准，包括饲料来源等；送检样品清单和说明，包括病料种类、保存方法等；动物免疫和治疗史；送检者的姓名、地址、邮编、电话和邮箱；送检日期；采样人和被采样单位签章。

4 样品包装要求

推荐样品使用“三重包装系统”，并正确标记，以防止泄漏，内附采样单。

4.1 直接盛装容器

样品应储存在密封、无菌的主容器中，根据检验样品性状及检验目的选择不同的容器。每个样品外应做好标记，注明样品名、样品编号、采样日期等，要能明确识别来自于哪只动物。

4.2 二次包装

吸收材料也应放置在二次容器内。如果将多个易碎的主容器放置在单个二次容器中必须单独包装或分离，以防止相互接触。二次包装容器应贴封条，封条上应有采样人签章，并注明贴封日期，标注放置方向。

4.3 坚硬的外部包装

外包装在盛装液体的情况下不得超过4L，在固体物质的情况下不得超过4kg （不包括冰的重量）。样品必须保持4℃温度或更低温度，并就近送动物疫病预防控机构进行保存。注意：切勿冻结全血或混合有血凝块的血清。

4.4 外包装标签和标记

需粘贴“B 类感染物质”标签，其正确的运输名称旁边标注“B 类感染物质”，采样负责的全名、地址和电话号码，实验室联系人的全名、地址和电话号码，标签上注明“在4℃”“在-20℃”或“在-80℃”保存。