miRNA-210对人乳腺癌细胞增殖和迁移及侵袭的影响

黄琦 王芳 田进海 于晶晶 王嘉 王立斌（通讯作者）

（1宁夏医科大学总医院 宁夏 银川 750004）

（2宁夏回族自治区水产技术推广站 宁夏 银川 750001）

miRNA是机体内的一种短链RNA，该物质在经过转录后可以对相关细胞的周期、凋亡、侵袭、血管生成以及迁移等过程进行水平调节，从而对其细胞的增殖、迁移和侵袭等过程产生影响。本文分析miRNA-210对人乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响，现报道如下。

1.资料与方法

1.1 一般资料

选取来院就诊与治疗的患有乳腺癌疾病的患者20例，研究对象选取时间为2016年8月－2018年8月。本次研究通过道德伦理委员会的批准，且经过患者的同意，并签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 Real-timePCR法 首先提取总RNA（乳腺癌组织），并且将提取后的RNA进行反转，反转为cDNA［1］。miR-210细胞的上游引物序列为CTGTGCGTGTGACAGCGGCTGA，通用引物 Uni-miR realtime PCR引物为miR-210细胞的下游引物。随后模版选取cDNA，内参选取U6B，同时进行扩增，扩增后需要设置3个复孔［2］。

1.2.2 miR-210inhibitor转染至MDA-MB-231细胞中 将miR-210 inhibitor、miRNA inhibitor NC粉末（具有FAM 荧光标记）进行离心处理，在离心处理完毕后将其配置成溶液，浓度为20μmol/L。在进行转染前的1d铺设24孔板，以此来提高溶液的融合度，一般融合度需要提高至30～50%。上述操作完毕后，将无抗生素（500μL）的培养基加入培养板中，随后可以混合miRNA和 Lipofectamine 2000，20min室温孵育。在MB-231细胞中加入混合物进行摇匀，在37℃下进行孵育［3］。

1.2.3 Transwell法 迁移：在转染后的48h进行试验，加入1300μL完全培养基加入24孔板中，随后将其放置于培养箱中进行过夜放置，对细胞密度进行调节，同时加入200μl含0.2%BSA 的无血清细胞悬液，将1300μL完全培养基加入下层孔板中，随后将其置于37℃中进行培养，随后进行封片处理，并且进行计数。

侵袭：在转染后的48h进行试验，按照1：8稀释基质胶与无血清培养基1d后铺于小室上，随后对细胞密度进行调节，同时加入200μl含0.2% BSA 的无血清细胞悬液至每孔中，将1300μL完全培养基加入下层孔板中，随后进行封片处理，并且进行计数。

1.3 统计学方法

采取统计学软件SPSS19.0进行数据处理，以P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2.结果

2.1 miR-210表达水平

miR-210在乳腺癌组织中的表达水平为（9.53±4.82），癌旁组织为（1.0±0.18），MDA-MB-231细胞为（6.04±1.74），正常乳腺细胞为（1.0±0.15），故乳腺癌组织、MDA-MB-231细胞与癌旁组织、正常乳腺细胞等组织中的miR-210表达水平差异显著，具有统计学意义（P＜0.05）。

2.2 miR-210inhibitor转染效率

miR-210inhibitor转染效率为（88.28±2.99）%，结果说明miR-210 inhibitor已成功转染至MDA-MB-231 细胞。故经过转染后，其细胞的增值能力较转染前显著下降。

2.3 抑制细胞增殖情况

转染miR-210inhibitor细胞的克隆集落数为（17.39±2.98）个，而转染miR-INC 组细胞的克隆集落数为（31.76±3.93）个，具有统计学意义（P＜0.05）。迁移试验结果显示，转染miR-210inhibitor细胞的迁出细胞数量为（291.00±43.13）个，而转染miR-INC 组细胞的迁出细胞数量为（1137.39±89.48）个，侵袭试验结果显示，转染miR-210inhibitor细胞降解基质胶且迁出细胞数量为（131.63±32.02）个，而转染miR-INC 组细胞降解基质胶且迁出细胞数量为（647.89±31.22）个，故经过转染后，其细胞的迁移和侵袭能力受到明显抑制。

3.讨论

根据大量数据显示，乳腺癌疾病已经成为危害妇女身心健康的主要恶性肿瘤之一，且该类疾病的发病率呈现上升的趋势。随着我国医疗技术的进步，对于该类疾病的治疗出现了一种新形式，即分子靶治疗。而分子靶治疗需要一个有效的靶点，而miRNA便成为了诊断与治疗的有效靶点。根据大量研究数据显示，位于肿瘤相关基因组的区域和杂合型丢失区、脆性位点、扩增区或断裂点区的miRNA超过一半，这些miRNA均可以作为抑癌基因或者致癌基因进而发挥作用，引发患者癌细胞的增殖、迁移以及侵袭等进程。目前，在转录后水平调控基因的表达是miRNA的已知功能，可以作为负调控因子来参与基因的表达过程。同时有部分研究数据显示，miRNA的作用靶点可以作为抑癌基因处于患者机体内的扩增区来下调miRNA的表达，进而发挥抑癌基因样作用。同时其靶点还可以作为癌基因，当此基因表达水平显著升高时，可以对细胞恶性转化作用产生抑制的作用。而在人乳腺癌细胞中，很多miRNA会出现异常表达的情况，在细胞的不同阶段表达出不同的作用。miR-21会在乳腺癌患者机体内的癌细胞中表达上调，其可能的靶基因为抑癌基因TPM1、PDCD4等。而miR-10b可以会对机体内的HOXSD10产生抑制的作用从而达到促进转移乳腺癌细胞的作用，除此之外，在乳腺癌中miR-206还会与其表达水平以及ER的表达呈现负相关的关系。同时有部分研究显示，组织的miRNA表达谱与乳腺癌患者的外周血循环miRNA表达谱有着较为密切的关联，同时还与淋巴结转移、预后，肿瘤临床分期有着密切的关系。故在临床诊断乳腺癌疾病中可以添加miR-210等指标来进行诊断，提升疾病的诊断率。

miRNA在临床上不仅具有较高的诊断价值，还可以作为一种新型的靶向治疗手段，机体内的miRNA可以对乳腺癌患者的原癌基因以及抑癌基因的表达进行有效调控，而根据大量文献显示，采取miRNA来作为治疗靶点可以起到更佳有效的效果，特别是针对于单一的癌基因或者抑癌基因，目前在临床试验阶段已经加入了与miRNA功能相类似的小干扰RNA的相关药物，现阶段，已经有部分报道显示，在机体细胞中转入miRNA的阻断剂可以将肿瘤转移的靶基因表达有效促进，并且可以对转移灶的形成有效防止。

综上所述，miRNA-210对人乳腺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响较大，可以明显减弱其能力，本文研究结果也证实了miRNA-210的作用。