不同采摘时间干、鲜道真洛龙党参挥发油的GC-MS分析

姜坤妤，余 兰

遵义医学院药学院，遵义 563000

党参为桔梗科植物党参Codonopsispilosula(Franch.) Nannf.、素花党参CodonopsispilosulaNannf.var.modesta(Nannf.) L.T.Shen或川党参CodonopsistangshenOliv.的根[1]，是我国常用的一种传统补益类中药，其性味甘平，主归脾、肺二经，具有补中益气、健脾益肺、养血生津之功效，临床上常用于脾肺气虚、食少倦怠、中气不足、面色萎黄、心悸气短、热病伤津等症，主产于山西、甘肃、陕西、四川、湖北等地[2-7]。党参中主要含有糖类、苷类、生物碱类、甾醇类、挥发油、三萜类、倍半萜内酯类等成分；具有调节血糖、促进造血机能、保肝、抗溃疡、抗辐射、抗缺氧、增强机体免疫功能、降压、延缓衰老及调节胃肠运动等多种药理作用[8-11]。随着现代农业和科学技术的发展，党参的应用更加的广泛，从药品到食品，乃至于化妆品。

道真洛龙党参产于贵州省遵义市道真县洛龙镇，是川党参的生态型变种，是贵州省著名的特有药材，质量优良。目前关于道真洛龙党参挥发油的研究未见报道，笔者采用气相色谱-质谱联用技术首次对道真洛龙党参挥发油的化学成分进行了研究，以期为道真洛龙党参资源的进一步开发利用提供依据。

1 仪器与材料

GC6890/MS5973型气相色谱-质谱联用仪(Agilent公司，美国)，AL204电子天平(上海梅特勒-托利多有限公司)，电子调温电热套(天津市泰斯特仪器有限公司)，正己烷(成都市科龙化工试剂厂，色谱纯)，无水硫酸钠(重庆川江化学试剂厂，分析纯)，实验用水为双蒸水。

不同采摘时间道真洛龙党参来源见表1，经遵义医学院杨建文教授鉴定为桔梗科植物属党参Codonopsispilosula的干燥的和新鲜的根。

表1 不同采摘时间道真洛龙党参样品来源信息Table 1 Information of Daozhen Luolong Codonopsis from different picking times

2 方法

2.1 挥发油的提取

取干燥的道真洛龙党参粉碎，过60目筛，按照《中国药典》2015年版方法提取挥发油[12]，精密称取粉末160 g置于圆底烧瓶中，加入10倍体积蒸馏水，浸泡1 h,按照《中国药典》2015年版方法提取挥发油[12]，每次提取8 h，(提取器中挥发油量不再增加)。用适量正己烷洗脱挥发油，充分摇匀静止后，取油层。然后，无水硫酸钠干燥，用正己烷定容至3 mL,过0.45 μm微孔滤膜后，得供试品。取新鲜的道真洛龙党参，洗净切成薄片，按照《中国药典》2015年版方法提取挥发油[12]，精密称取250 g置于圆底烧瓶中，提取出的挥发油的量相当于160 g干道真洛龙党参提取出挥发油量的1/6，用正己烷定容至0.5 mL,剩余提取步骤与干道真洛龙党参相同。

2.2 色谱条件

Phenomenex ZB-5MSi石英毛细管色谱柱(250 μm×30 m,0.25 μm)；载气为高纯度氦气；载气流量为1.0 mL/min；进样量1.0 μL；分流比30∶1；进样口温度250 ℃；程序升温：初始温度80 ℃，以6.5 ℃/min升至180 ℃，接着以1 ℃/min升温至195 ℃，最后以20 ℃/min升温至280 ℃，保持6 min。

2.3 质谱条件

离子源为EI源；电子能量70 eV；离子源温度230 ℃；四级杆温度150 ℃；溶剂延迟4 min，扫描范围m/z30～500。

2.4 数据处理

样品中各挥发油成分用计算机与Wiley7，NIST05标准质谱数据库检索匹配，统计匹配度大于90%的化学成分。采用峰面积归一化法定量分析各组分相对百分含量。

3 结果与分析

3.1 色谱柱优化

实验共考察了DB-5石英毛细管色谱柱(250 μm×60 m,0.25 μm)、hp-5MS石英毛细管色谱柱(250 μm×30 m,0.25 μm)和ZB-5MSi石英毛细管色谱柱(250 μm×30 m,0.25 μm)对干、鲜道真洛龙党参挥发油成分分离效果的影响；结果表明，干、鲜道真洛龙党参挥发油成分在ZB-5MSi石英毛细管色谱柱有着良好的分离效果。

3.2 不同采摘时间干、鲜道真洛龙党参挥发油成分分析

按2.1，2.2和2.3所述方法，分别获得干、鲜道真洛龙党参的挥发油成分总离子流色谱图，如图1所示。结果表明，实验选定的条件能够对干、鲜道真洛龙党参的挥发油成分进行分离鉴定。样品S1～S5中鉴定出的挥发油成分数依次为32、52、22、26、40个。样品S6～S8中鉴定出的挥发油成分数依次为28、14、15个。

3.3 不同采摘时间干道真洛龙党参挥发油成分分析

对不同采摘时间干道真洛龙党参挥发油成分匹配度>90%的成分进行分析鉴定(见表2)。结果表明，样品S1～S5中共有挥发油成分7个，分别为肉豆蔻酸，亚油酸，棕榈酸，棕榈酸甲酯，二十烷，亚油酸甲酯，角鲨烯。这7个共有挥发油成分占样品S1～S5的总比率分别为75.78%、84.88%、72.11%、72.28%、73.61%。由此可以看出，5个不同采摘时间干道真洛龙党参共有挥发油成分含量大致相同，其余含量较低成分有所差异。棕榈酸和亚油酸是含量最高的两种成分，两者在样品S1～S5中占挥发油成分总量依次为56.14%、72.35%、52.92%、45.02%、55.09%。其中，样品S2中这两种成分总含量最高。亚油酸甲酯和亚油酸具有抗炎作用[13]。棕榈酸和亚油酸有较强的抗氧化作用[14-16]。亚油酸还具有降低人体血液中胆固醇和血脂的作用。由此推测，不同采摘时间干道真洛龙党参的抗氧化、抗炎、降血脂及降胆固醇能力有所不同。

图1 不同采摘时间道真洛龙党参挥发油的总离子流图Fig.1 Total ion current chromatogram of volatile oils in Daozhen Luolong Codonopsis from different picking times注：1.肉豆蔻酸；2.棕榈酸甲酯；3.棕榈酸；4.亚油酸甲酯；5.亚油酸；6.二十烷；7.角鲨烯。Note:1.myristic acid;2.methyl hexadecanoate;3.palmitic acid;4.octadecadienoic acid,methyl ester;5.linoleic acid;6.eicosane;7.squalene.

3.4 不同采摘时间干道真洛龙党参挥发油成分种类的分析比较

对样品S1～S5中的挥发油成分进行分类，见表3。结果表明样品S1～S5挥发油中均含有脂肪酸、脂肪酸酯、烷烃、烯烃、烯醇类，其中脂肪酸是样品S1～S5中相对峰面积最大的成分(样品S1～S5中脂肪酸的相对峰面积依次是59.77%、76.75%、55.96%、53.00%、57.01%)，脂肪酸酯次之(样品S1～S5中脂肪酸酯的相对峰面积依次是19.69%、11.57%、17.53%、23.57%、21.30%)，再者是烷烃(样品S1～S5中烷烃的相对峰面积依次是6.05%、2.95%、17.71%、8.19%、9.13%)。3类主要挥发油成分占样品S1～S5的相对峰面积依次为85.26%、91.27%、91.20%、84.76%、87.44%。对不同采摘时间干道真洛龙党参中的挥发油成分进行分类可见3类主要挥发油成分脂肪酸、脂肪酸酯和烷烃占样品S1～S5的相对峰面积均在80%以上。其中，样品S2中这3类主要挥发油成分总含量最高。

表2 不同采摘时间干道真洛龙党参的挥发油成分和相对峰面积Table 2 Volatile oil components and relative peak area of dried Daozhen Luolong Codonopsis from different picking times

续表2(Continued Tab.2)

续表2(Continued Tab.2)

序号No.保留时间tR(min)化合物Compound相对峰面积Relative peak area(%)S1S2S3S4S57633.277(11Z,13Z)-11,13-十六烷基乙酸酯(11Z,13Z)-11,13-Hexadecadienylacetate-0.25---7733.344N-(2-三氟甲基苯)-3-吡啶甲酰胺肟 Pyridine-3-carbox-amide,oxime,N-(2-trifluoromethylphenyl)-----0.327833.441十六烷 Hexadecane-0.326.71-0.467933.44610-甲基-二十烷 10-methyl-Eicosane0.98----8033.452三十六烷 Hexatriacontane----0.688133.976油醇 (Z)-9-Octadecen-1-ol--1.60--8234.057(3E,12Z)-1,3,12-非邻二烯-5,14-二醇(3E,12Z)-1,3,12-Nonadecatriene-5,14-diol----0.928334.0635-(3-十一烷基-2-环氧乙烷基)戊酸甲酯Methyl 5-(3-un-decyl-2-oxiranyl)pentanoate---0.83-8434.359二十四烷 Tetracosane----1.968534.365二十七烷 Heptacosane-0.25---8634.5492,2′-亚甲基双-(4-甲基-6-叔丁基苯酚)2,2′-Methyle-nebis(6-tert-butyl-4-methylphenol)----1.328734.7162-甲基-z,z-3,13-十八二烯醇 2-Methyl-Z,Z-3,13-octadec-adienol--2.38--8834.759二乙基甲基硼烷 Diethylmethylborane0.630.03---8934.7702-辛基环丙烷辛醛 2-Octylcyclopropaneoctanal----0.909034.9542-(十四氧基)-乙醇 Ethanol,2-(tetradecyloxy)--0.07---9135.083二十八烷 Octacosane1.600.253.13-0.559235.083三十烷 Triacontane--5.36-3.589335.0897-己基-十二烷 Tridecane,7-hexyl--0.36---9435.699(8Z)-14-甲基-8-十六烯-1-醇 (8Z)-14-Methyl-8-hexade-cen-1-ol-0.11---9535.785草酸异丁酯 Oxalic acid,isobutyl hexadecyl ester3.62----9635.818二十三烷 Tricosane---1.58-9735.823二十一烷 Heneicosane-0.54---9836.001(1-辛基十二烷基)-环己烷 (1-octyldodecyl)-Cyclohexane0.47----9936.1047-环己基-二十烷 7-Cyclohexylicosane--1.17--10036.617二十烷 Eicosane0.810.240.950.371.7110136.6189-辛基-十七烷 9-Octylheptadecan---1.30-10236.623二十二烷 Docosane-0.25-1.84-10337.26614β-孕烷 14-.BETA.-PREGNA0.640.22---10437.3301-(5-三氟甲基-2-吡啶基)-4-(1h-吡咯-1-基)-哌啶1-(5-trifluoromethyl-2-pyridyl)-4-(1H-pyrrol-1-yl)-Piperidine1.06----10537.471芥酸酰胺 Erucylamide3.87----10637.671蒽-9,10-醌,1-(3-羟基-3-苯基-1-三嗪基)-Anthra-9,10-quinone,1-(3-hydrohy-3-phenyl-1-triazenyl)-----0.1610737.909角鲨烯 Squalene4.491.821.604.452.4410838.2985-甲基-3-正丙基-2-[Z-(1,2,3,3-四氘)-1-丁烯基]吡嗪 5-methyl-3-n-propyl-2-[Z-(1,2,3,3-tetradeuterio)but-1-enyl]pyrazine---0.56-10939.8697-己基-十二烷 Tridecane,7-hexyl---0.39--

注：“-”未检测到该化合物。
Note:“-”stands for not detected.

表3 不同采摘时间干道真洛龙党参挥发油成分种类和相对峰面积Table 3 Types and relative peak area of volatile oil components of dried Daozhen Luolong Codonopsis from different picking times

注：“-”未检测到该化合物。
Note:“-”stands for not detected.

3.5 不同采摘时间鲜道真洛龙党参挥发油成分分析

对不同采摘时间鲜道真洛龙党参挥发油成分匹配度>90%的成分进行分析鉴定，见表4。结果表明，鲜道真洛龙党参含量最高的挥发油成分为角鲨烯，角鲨烯具有抗肿瘤、抗氧化的作用[17-19]，占样品S6～S8的比率分别为29.05%、41.93%、28.09%。由此可以看出，3个不同采摘时间鲜道真洛龙党参共有挥发油成分含量具有一定差异，样品S7中共有成分含量最高，其余成分的含量具有较大差异。例如，棕榈酸在占样品S6～S8的比率分别为5.52%、0%、38.24%。说明鲜道真洛龙党参受采摘时间影响较明显。由于实验采用的是新鲜道真洛龙党参，因此样品中的水分含量将直接影响含量对比结果，采摘时间不同,光照、温度、湿度等因素都会有明显变化,从而影响样品中的水分含量，进一步影响棕榈酸等其余挥发油成分在样品S6～S8的比率。样品S6中主要特有成分为双环己烷(4.28%)和14-甲基十五烷酸甲酯(11.08%)；S7中主要特有成分为正癸烯(3.69%)，十七烷(3.12%)，十九烷(6.21%)，二十三烷(7.72%)，17-十六烷基四三乌头烷(4.83%)；S8中主要特有成分为三十四烷(3.31%)和二十六烷(2.57%)。

表4 不同采摘时间鲜道真洛龙党参的挥发油成分和相对峰面积Table 4 Volatile oil components and relative peak area of fresh Daozhen Luolong Codonopsis from different picking times

续表4(Continued Tab.4)

序号NO.保留时间tR(min)化合物Compound相对峰面积Relative peak area(%)S6S7S83634.360十八烷 Octadecane-9.012.103735.083二十三烷 Tricosane-7.72-3835.085二十六烷 Hexacosane--2.573935.370二十四烷 Tetracosane0.31--4035.60211-[(三甲基硅基)氧]-,双(0-甲基肟),(5-β,11-β.)-孕烷-3,20-二酮 11-[(trimethylsilyl)oxy]-,bis(O-methyloxime),(5.beta.,11.be-ta.)-Pregnane-3,20-dione1.83--4135.818三十四烷 Tetratriacontane--3.314235.92517-十六烷基四三乌头烷17-hexadecyl-Tetratriacontane-4.83-4336.61211-丁基-二十二烷 11-butyl-Docosane1.53--4436.617二十烷 Eicosane2.73-1.724537.909角鲨烯 Squalene29.0541.9328.094638.5892-溴代十二烷 2-Bromododecane0.71--

注：“-”未检测到该化合物。
Note:“-”stands for not detected.

3.6 不同采摘时间鲜道真洛龙党参挥发油成分种类的分析比较

对样品S6～S8中的挥发油成分进行分类，见表5。结果表明，样品S6～S8挥发油中均含有脂肪酸酯、烷烃、烯烃类。样品S6中挥发油成分共有11类物质，主要含有1种脂肪酸类(5.52%),3种脂肪酸酯类(22.85%)，11种烷烃类(18.84%),4种烯烃类(40.89%)；样品S7中挥发油成分共有3类物质，主要含有7种烷烃类(41.53%)，6种烯烃类(56.05%)；样品S8中挥发油成分共有6类物质，主要含有1种脂肪酸类(38.24%),3种脂肪酸酯类(18.05%)，6种烷烃类(13.04%),3种烯烃类(30.04%)。这几类主要挥发油成分占样品S6～S8的相对峰面积依次为88.10%、97.58%、99.37%。

表5 不同采摘时间鲜道真洛龙党参挥发油成分种类和相对峰面积Table 5 Types and relative peak area of volatile oil components of fresh Daozhen Luolong Codonopsis from different picking times

注：“-”未检测到该化合物。
Note:“-”stands for not detected.

对不同采摘时间鲜道真洛龙党参中的挥发油成分进行分类可见样品中主要挥发油成分占样品S6～S8的相对峰面积均在80%以上。

4 讨论

综上，干道真洛龙党参中主要挥发油成分为棕榈酸、亚油酸、肉豆蔻酸、棕榈酸甲酯、亚油酸甲酯和角鲨烯等。鲜道真洛龙党参中主要挥发油成分为角鲨烯、亚油酸甲酯、棕榈酸、14-甲基十五烷酸甲酯和1-柠檬烯等。11月中旬采摘的干、鲜道真洛龙党参(样品S2与样品S7)共有挥发油成分含量最高，可为干、鲜道真洛龙党参的采摘提供一定理论基础。采摘时间对干、鲜道真洛龙党参主要挥发油成分的影响均不大，但对其余挥发油成分有一定的影响。其原因在于采摘时间不同,光照、温度、湿度都会有变化,从而影响干、鲜道真洛龙党参一部分挥发油成分的含量。

干道真洛龙党参挥发油成分以脂肪酸、脂肪酸酯、烷烃、烯烃类为主。挥发油中含量较高成分有棕榈酸、亚油酸、亚油酸甲酯、棕榈酸甲酯和肉豆蔻酸。鲜道真洛龙党参挥发油成分以脂肪酸、脂肪酸酯、烷烃、烯烃类为主。挥发油中含量较高成分有角鲨烯、1-柠檬烯、花柏烯、棕榈酸和亚油酸甲酯等。干道真洛龙党参与鲜道真洛龙党参挥发油成分的种类差别不大但含量有明显差异。说明道真洛龙党参在干燥过程中部分挥发油成分由于受热而发生了转化。可能是烯烃、烷烃类成分转化成了脂肪酸及脂肪酸酯类成分。

干、鲜道真洛龙党参挥发油成分的存在对于评价干、鲜道真洛龙党参挥发油整体功效及验证其抗氧化、抗肿瘤和抗炎作用等可能具有重要的研究意义，也存在一定的药用价值，故应予适当保留或开发。不同采摘时间干、鲜道真洛龙党参所含化学成分的阐明也能为道真洛龙党参药材药用多元化、药材炮制及采摘时间等多方面的进一步开发研究提供一定实验依据和参考。