胃癌患者外周血1,25-二羟维生素D3水平与T细胞亚群的关系

张明雷，尹晓东，张 伟，张海兵，王体兵，钱 雷

滨海县人民医院，江苏盐城 224500 1肿瘤科；2放疗科；3检验科

胃癌是目前临床中较为常见恶性肿瘤，其临床死亡率较高。近年来，我国胃癌临床发病率逐年增加，并逐渐呈现年轻化趋势[1]。目前学者一直致力于研究胃癌发生、发展及治疗等诸多环节[2]。维生素D(vitamin D，VD)是脂溶性维生素，属固醇类衍生物，其在癌症治疗过程中的应用逐渐受到医护人员的关注。越来越多研究结果显示，VD可有效刺激抗原呈递细胞和T淋巴细胞分化、增殖，在机体免疫系统中起到十分重要的调控作用[3]。有学者研究证实，使用VD对结肠癌患者治疗后可有效改善患者病情，增加患者体内CD3+、CD4+、CD8+T淋巴细胞数量，提高机体免疫功能[4]。但目前胃癌患者体内T淋巴细胞亚群与VD水平的相关性鲜有报道。有研究指出，1,25-二羟维生素D3是重要的合成VD过程中的中间代谢物，一般情况下其在人体中表达水平相对稳定，被认为是评估VD水平的准确指标[5]。因而笔者选取我院收治的胃癌患者作为研究对象，分析25-(OH)D3与T细胞亚群的关系。

资料与方法

1 一般资料 经我院伦理委员会批准，选取2015年1月- 2017年12月我院收治的80例行手术治疗的胃癌患者作为本组研究对象。其中男51例、女29例，年龄38 ～ 80(63.19±5.11)岁，依照TNM病理分期，Ⅰ～Ⅱ期46例、Ⅲ期34例。选取80例同期于我院行健康体检的健康志愿者作为本组研究健康对照组，其中男50例、女30例，年龄41 ～ 79(64.11±4.83)岁，两组年龄、性别差异无统计学意义(P＞0.05)。参与本组研究所有患者均符合如下标准：1)入组前未行化疗、放疗治疗；2)入组前未行免疫及靶向治疗；3)入组前未接受手术治疗；4)所有研究对象均对本研究知情并签署知情同意书。若患者符合如下任一标准则将其排除：1)患有其他肿瘤疾病史；2)患有免疫相关性疾病；3)肝、心、肾功能异常或合并病原体感染；4)曾使用免疫抑制剂及糖皮质激素类药物治疗；5)入组前服用VD补充剂史；6)TNM分期为Ⅳ期。

2 方法 本组研究中所有胃癌手术前均采集空腹静脉血5 ml，分装2管，编号A管及B管，A管以3 000 g/min离心15 min收集血清，后采用酶联免疫吸附法检测患者血清中1,25-二羟维生素D3水平，所用试剂盒购买自联科生物科技有限公司，所有操作均严格遵照试剂盒说明书进行操作。B管取100μl血液样品中加入20μl藻红蛋白(phycoerythrin，PE)标记的单克隆抗体，加入溶血剂2 ml破坏红细胞，后使用磷酸盐缓冲溶液洗涤细胞，固定液固定后采用流式细胞数检测程序性死亡受体-1(programmed cell death protein-1，PD-1)+T细胞、CD4+及CD8+T淋巴细胞水平。

3 统计学方法 本组研究中使用SPSS19.0行统计学分析，以±s表示计量资料，采用百分率表示计数资料，后行t检验及χ2分析数据差异，采用Pearson相关进行关联分析，P＜0.05为差异存统计学意义。

结 果

1 两组外周血1,25-二羟维生素D3水平及T淋巴细胞亚群比较 胃癌组外周血1,25-二羟维生素D3水平显著低于健康对照组(P均＜0.05)，胃癌组PD-1+及CD4+T细胞水平显著高于健康对照组(P均＜0.05)，CD8+及CD4+/CD8+水平显著低于健康对照组(P均＜0.05)。见表1。

2 患者1,25-二羟维生素D3与淋巴细胞亚群水平相关性 胃癌组血中1,25-二羟维生素D3水平与PD-1+、CD4+T细胞亚群水平及CD4+/CD8+呈显著正相关(P均＜0.05)，与CD8+水平呈显著负相关(P＜0.05)。见表 2。

3 肿瘤分期维生素D3、T细胞分型、PD-1+T淋巴细胞水平表达的关系 不同肿瘤分期患者维生素D3、T细胞分型、PD-1+T淋巴细胞表达水平无明显差异(P＞0.05)。见表3。

表1 外周血1,25-二羟维生素D3水平及T淋巴细胞亚群比较Tab. 1 Comparison of 1,25-dihydroxyvitamin D3 levels and T lymphocyte subsets in peripheral blood

表2 患者1,25-二羟维生素D3与淋巴细胞亚群相关性Tab. 2 Correlation between 1,25-dihydroxyvitamin D3 and lymphocyte subsets in gastric cancer patients

表3 肿瘤分期亚组维生素D3、T细胞分型、PD-1+T淋巴细胞水平表达Tab. 3 Vitamin D3, T cell typing, PD-1+ T lymphocyte level expression in different subgroups by tumor staging

讨 论

VD在抑制肿瘤增殖、刺激细胞分化、调节免疫功能、抑制血管新生和促进肿瘤凋亡等许多生理过程中起到十分重要作用，也是导致肿瘤发生及发展的独立预测因子。有学者通过对接受不同紫外线照射量患者肿瘤发生情况进行调查发现，适当紫外线照射可有效提高患者体内VD水平，有效降低患者患者肺癌发病风险[6]。有研究结果显示，接受不同日照强度和时间的肿瘤患者体内VD水平存明显差异，患者外周血中VD水平较高时，其总生存率及无复发生存率均明显延长[7]。一般情况下，VD可作为新型免疫调节剂，通过抗原呈递细胞及T淋巴细胞上VD受体结合，有效调节T淋巴细胞等免疫细胞的分化、增殖等功能。机体对抗胃癌发生及发展过程中，T淋巴细胞起到十分重要的作用，T淋巴免疫功能低下，导致免疫系统对肿瘤细胞的识别和杀伤能力显著降低，导致胃癌进展，诱发肿瘤细胞逃逸[8]。因而有学者指出，采用VD对机体干预后，可显著改善体内T淋巴细胞功能水平，进而起到发挥抗肿瘤作用[9]。有学者对结肠癌患者进行分析发现，CD3+、CD4+T淋巴细胞与1,25-二羟维生素D3水平呈显著正相关关系，提示其可能通过影响T淋巴细胞功能而发挥对抗结肠癌的作用[10]。本组研究结果显示，胃癌患者血中1,25-二羟维生素D3水平显著低于健康对照组，且胃癌组患者血液中T淋巴细胞亚群分析结果明显弱于健康对照组。结果提示，在胃癌患者体内1,25-二羟维生素D3水平缺乏可能导致患者免疫功能低下，削弱免疫系统对肿瘤细胞的识别和杀伤功能，导致胃癌发生及发展。

共信号分子为表达于细胞表面的一类具有重要生物学活性的糖蛋白，可直接调控T细胞受体信号通路[11]。一般情况下，可依照抑制或刺激T细胞活化情况将共信号分子可分为共抑制分子与共刺激分子[12]。有学者指出，在适当细胞、恰当时间表达合适的共信号分子，可有效抑制或促进T细胞免疫反应，包括T细胞分化、生存和功能成熟[13]。PD-L1及PD-1是共抑制信号与共信号分子。当PD-1与其配体PD-L1+或PD-L+2结合后可抑制T细胞活性，通过阻断PD-1信号通路，增强体内幽门螺杆菌病毒特异CD8+T细胞免疫反应，增强CD8+T细胞增殖，提高细胞因子及效应活性，降低病毒载量[14]。近年来有研究结果显示，肿瘤患者体内T细胞功能受损与PD-1水平密切相关，但在胃癌患者体内PD-1表达情况仍鲜有报道[15]。有研究结果显示，维生素D代谢产物1,25-二羟维生素D3可有效调节单核细胞、树突状细胞及T淋巴细胞，刺激T淋巴细胞分化，提高PD-1+T细胞比例[16]。本组研究结果显示，胃癌组患者血中PD-1+T细胞水平显著低于健康对照组，且与1,25-二羟维生素D3水平呈显著正相关关系。

综上所述，胃癌患者外周血1,25-二羟维生素D3水平PD-1+、CD4+T细胞亚群及CD4+/CD8+呈正相关，与CD8+呈负相关。但本组研究临床样本数较少，且未对患者肿瘤细胞中PD-L1+表达水平进行分析，有待后续深入研究。