胶体金标记技术在免疫检测中的应用探讨

杨琼

【摘要】目的：探讨胶体金标记技术在免疫检测中的应用探讨。方法：选取200份不同的血清用于检测，研究组应用柠檬酸三钠还原法制作胶体金颗粒，并制作成免疫检测试条，用于检测血清中肝炎病毒抗原；对照组应用酶免疫法法检测血清。结果：研究组检测法灵敏度高于对照组（P<0.05）。结论：在用于免疫检测中，胶体金标记技术效果理想，临床上应当进一步推广应用。

【关键词】胶体金标记技术；乙型肝炎病毒抗原；酶免疫法法；免疫检测

【中图分类号】R249 【文献标识码】B 【文章编号】2095-6851（2018）10-050-01

胶体金标记技术是一种新研发出来的的免疫标记技术，与同位素、荧光素、胶乳、酶相比，具有避免产生放射性污染、没有其他因素干扰、定位更准确的优点[1]。胶体金标记技术的原理是利用还原法还原氯金酸，得到金颗粒，以胶体金颗粒作为显色剂或标志物，用于标记血清内抗原抗体反应。胶体金标记技术被广泛的应用在制造体外诊断试剂、蛋白染色、电镜、免疫印迹等方面[2]。

1 资料与方法

1.1 一般资料

准备材料：氯酸金、柠檬酸三钠、因肝炎住院患者的血清标本、HBsAg酶免疫诊断试剂盒、HBsAg灵敏度标准参比品、单克隆抗HBs。

1.2 方法

1.2.1 对照组方法 取血清于试管中，将酶复合物稀释后，加入取出来的血清里，组成酶标抗体或抗原，再加入底物，底物被酶催化为有色底物，根据颜色来判断阴性、阳性。

1.2.2 研究组方法 用纯水将氯酸金溶解，煮沸后加入1.5ML的浓度为1%的柠檬酸三钠溶液，继续加热将溶液煮沸。5分钟后将溶液冷却，再加入2ml的抗HBs IgG，并快速搅拌，后续加入牛血清蛋白，用氯化钠溶液将其搅拌均匀，最后用离心法将上清液分离出来，获取沉淀物。分离出来的沉淀物为金-抗HBs结合物，与吸水滤纸、硝酸纤维素和吸水纤维制作成免疫层析测试条。

1.3 观察指标

将免疫层析测试条插入准备好的新鲜血清内，20分钟内出现测试结果，测试条上若出现两条红色的线则说明测试结果为HBsAg阳性，若只有一条红线则为阴性，没有出现红色线则为试剂无效，需重新配制。

1.4 统计学方法

数据应用SPSS18.0进行分析，其中计数进行X2（%）检验，计量进行t检测（x±s）检验， P<0.05提示有显著差异。

2 结果

研究组的测试灵敏度高于对照组（P<0.05），具体见表1。

3 讨论

在目前临床医学上检测病毒表面抗原大多采用酶免疫法，但酶免疫法具有耗费时间长，操作程序繁复的缺点[3]。为使检测工作更简化方便，使检测的灵敏度更高，本文研究通过检测血清中肝炎病毒，将胶体金标记技术与传统检测肝炎病毒的酶免疫法作对比发现，胶体金标记技术在免疫检测中不仅操作简单方便，缩短检测时间，而且具有更高的灵敏度。胶体金是将还原剂例如抗坏血酸、白磷、枸橼酸钠等于氯酸金发生反应，析出大小不同的金颗粒，形成带有负电离子的胶体溶液，并通过静电作用，形成稳定状态。胶体金在弱碱性液体环境中的带有负电荷，由于与蛋白质的结合是根据近点作用，并不会改变蛋白质的性质。与酶免疫法的分类法相同，简体免疫金技术也分为固相和液相胶体金技术。最初的液相胶体金标记技术被用作显色剂，也被成为免疫胶体金染色法。免疫胶体金染色法由单标记发展为用不同大小的金颗粒对物质进行多重标记，使灵敏度更高。但此种免疫法有一缺点，需要的抗原或抗体浓度很高才能使灵敏度更高。而且液相胶体金的金颗粒并不稳定，存放时间长后容易产生聚集现象[4]。为避免这些缺點，医学专家研究出了免疫金银染色法。免疫金银染色法中的银离子吸附在金颗粒周围，将染色效果放大，就算检测抗原或抗体被稀释，检测效果也和高浓度相同，如此便节省了很多胶体金。免疫金银染色法中银离子吸附大颗的胶体金颗粒，使大颗的金颗粒更稳定，而小颗的金颗粒虽然吸附的银离子少，但本身的稳定性更高，保证了免疫检测的灵敏度。固相免疫胶体金标记技术与液相的相同，区别仅在于胶体金颗粒的吸附物为固体支持物，而后进行免疫检测。在1986年，胶体金标记技术被首次应用在免疫学方面，并取得了一些成果，胶体金标记技术得到了人们更多的重视。由还原法制备出的胶体金标记不同的簇分化抗原单抗，可以检测出血清中淋巴细胞上的簇分化的抗原，并根据淋巴细胞的不同进行分类[5]。用胶体金免疫法检测肝炎病毒的原理为用胶体金中的金颗粒标记肝炎病毒抗体，与胶体金颗粒结合的金-抗肝炎病毒结合物与样品血清中的肝炎病毒结合，随着硝酸纤维素膜转移，形成抗HBs-HBsAg-金标抗体的夹心物，使免疫检测试纸中出现两条红色的线。胶体金免疫法不仅具备免疫反应的特点，还具有色谱层析的的特点，通过吸水纤维结合抗肝炎病毒，层析作用将肝炎病毒-金标抗体复合物与纤维素膜发生连续反应，使免疫层析法更灵敏。而且这种方法不需要洗涤，也不需要使用仪器进行操作，减少了试剂被污染的几率，使操作更方便。

综上所述，胶体金标记技术在免疫检测中具有准确、灵敏、快速地特点，在临床上诊断疾病中具有独特、不可替代的作用，值得临床上进一步推广。

参考文献：

[1] 孙培培，张洁，郑江伟，等.胶体金免疫层析试纸快速检测甘草酸方法的建立[J].药物分析杂志，2017（10）：1769-1775.

[2] 夏伟伟，姜国胜.胶体金免疫层析法复检HBsAg阳性标本的可行性分析[J].中国病原生物学杂志，2016（10）：897-899.

[3] 王梦露，王云龙，石晓卫，等.抗环瓜氨酸肽抗体胶体金定量检测方法的建立[J].中国现代医学杂志，2016，26（12）：25-29.

[4] 陈珍珍，赵越，王占黎，等.自制胶体金试剂盒对布鲁氏菌病的诊断效果评价[J].现代预防医学，2016，43（15）：2802-2805.

[5] 周志杰，刘珠果，戴秋云.石头鱼毒素胶体金检测试纸条的研制[J].军事医学，2016，40（11）：905-908.