H型高血压患者MTHFR基因型分布及与血管性痴呆的关系

王凌玲 雷梦觉 胡 杰 龚爱斌

(江西省人民医院二部心血管内科，江西 南昌 330006)

高血压是临床常见心血管疾病之一，在高血压人群中伴随同型半胱氨酸(Hcy)升高的原发性高血压称为H型高血压〔1〕，占我国成年人高血压的75%〔2〕。目前已知高血压和高Hcy血症(HHcy)均为心脑血管病的独立危险因素〔3〕。如高血压、HHcy等血管性危险因素都能促进痴呆的发生〔4～6〕。血管性痴呆(VD)是继阿尔茨海默病后的第2大痴呆性疾病〔7〕，是由脑血管疾病引发的一种具有痴呆表现的临床综合征，是迄今为止唯一可以防治的痴呆〔8〕。Hcy代谢的限速酶亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)基因的C677T碱基突变会减弱其自身活性，导致HHcy。VD确切的发病原因至今尚无统一定论。本研究探讨H型高血压患者MTHFR基因型分布与Hcy及VD的关系。

1 资料与方法

1.1一般资料 2015年2月至2017年1月在江西省人民医院心内科就诊的患者576例，男296例，女280例，平均年龄(61.23±8.67)岁。患方知情同意，自愿参加。排除标准：(1)近1个月内服用影响Hcy水平的药物(如避孕药、抗癫痫药、多巴胺、叶酸和VitB12)；(2)存在营养及代谢性疾病，如甲状腺疾病、严重贫血、营养不良、叶酸和VitB12缺乏、严重肝肾和其他脏器疾病。高血压的诊断标准依据《中国高血压防治指南2010》制定的标准〔3〕：收缩压≥140 mmHg和(或)舒张压≥90 mmHg，既往有高血压史，目前正使用降压药物，血压虽未达到上述水平，也诊断为高血压。HHcy诊断标准：按照美国心脏病协会(AHA)和脑卒中联合委员会(CAA)2006 年一并推出的《关于缺血性脑卒中和脑缺血发作的预防指南》诊断标准〔9〕，当Hcy浓度>10 μmol/L者即可诊断为 HHcy。

按Hcy水平及血压情况分为H型高血压组188例(高血压及HHcy)，男98例，女90例，年龄50～73〔平均(61.36±7.13)〕岁；非H型高血压组109例(高血压，非HHcy)，男55例，女54例，年龄50～73〔平均(62.17±6.85)〕岁；高Hcy非高血压组165例(HHcy，非高血压)，男84例，女81例，年龄50～73〔平均(62.75±7.24)〕岁；正常对照组114例(非高血压、非HHcy)，男59例，女55例，年龄50～73〔平均(60.96±6.10)〕岁。4组性别、年龄等一般资料差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2一般临床资料及实验室生化指标测定 收集一般临床资料：性别、年龄、吸烟、饮酒、糖尿病史、体重指数(BMI)、心率；实验室生化指标测定：本研究所有标本在我院同一台日本日立7600全自动生化分析仪检测，采集禁食12 h后静脉血，测定血三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、空腹血糖、肌酐、尿酸，采用酶联免疫吸附试剂盒(上海研域生物科技公司)检测血浆Hcy水平。

1.3VD的筛选 依据世界卫生组织国际疾病分类第10版(ICD-10)中VD的诊断标准，同时符合下列条件：(1)简易智能状态量表(MMSE)评分<23分；(2)改良Hachinski缺血量表评分>4分；(3)符合美国精神病学DSM-Ⅳ制订的VD标准〔10〕；(4)既往有脑血管疾病史。

1.4MTHFR基因多态性分析 抽取患者静脉血2 ml，置于乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝管中，采用天根生化科技有限公司提供的DNA提取试剂盒提取样本基因组DNA，-20℃保存送检。用杭州安杰思医学科技有限公司的核酸扩增实时荧光检测系统，采用多聚酶链式反应-荧光定量法检测MTHFR基因677C/T多态性分布，试剂盒由江西诺德医疗器械有限公司提供。所有操作按试剂盒操作说明进行。

1.5统计学方法 采用SPSS19.0软件进行单因素方差分析、LSD-t检验、χ2检验、直线相关分析及多元Logistic回归分析。

2 结 果

2.14组临床资料比较 4组烟酒比例、心率、BMI、肌酐、尿酸、空腹血糖、TG、TC、LDL-C、HDL-C等指标差异无统计学意义(P>0.05)。H型高血压组与非H型高血压组收缩压和舒张压显著高于高Hcy非高血压组与正常对照组(P<0.05)；H型高血压组Hcy水平显著高于其他3组(P<0.05)，4组VD发生比例H型高血压组>非H型高血压组>高Hcy非高血压组>正常对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 4组临床资料比较

1)与H型高血压组比较、2)与非H 型高血压组、3)与高Hcy非高血压组比较：均P<0.05

2.2血浆Hcy水平与收缩压、舒张压的相关性 血浆Hcy水平与收缩压、舒张压呈正相关(r=0.763、0.817，均P<0.05)。

2.3Logistic回归分析 以VD为因变量，以HHcy为自变量，当未加入协变量时，HHcy是VD的危险因素(OR=8.853，P<0.05)；当校正年龄、性别、BMI、吸烟、饮酒史、心率、肌酐、尿酸、血糖、TC、LDL-C、HDL-C、TG后，HHcy仍是VD的危险因素(OR=8.461，P<0.05)；进一步引入高血压作为协变量，HHcy还是VD的危险因素(OR=4.211，P<0.05)，提示HHcy与高血压对VD有协同作用。

2.44组MTHFR基因多态性比较 4组MTHFR C677T基因分布符合Hardy-Weinberg平衡定律〔11〕，可以认为本研究选择的人群基因频率分布可以代表群体基因分布。H型高血压组T/T型基因及T等位基因频率显著高于非H型高血压组及高Hcy非高血压组(P<0.05)；非H型高血压组及高Hcy非高血压组T/T型基因及T等位基因频率显著高于正常对照组(P<0.05)。见表2。

表2 4组基因频率分布比较〔n(%)〕

1)与H型高血压组、2)与正常对照组比较：均P<0.05

2.5MTHFR基因多态性与Hcy水平、VD发生率的关系 基因型C/C、C/T及T/T患者Hcy水平〔(14.53±6.83)、(19.76±3.48)、(33.08±9.43)μmol/L 呈递增趋势，差异有统计学意义(P<0.05)；发生VD比例(10.96%、21.49%、38.98%)呈递增趋势，差异有统计学意义(P<0.05)。

2.6MTHFR基因多态性与VD的Logistic 分析 校正性别、年龄、BMI、Hcy、收缩压、舒张压时，以C/C基因型为参照，C/T基因及T/T基因型VD的风险均增加(P<0.05)，见表3。

表3 基因多态性与VD的Logistic分析

3 讨 论

随着我国人口逐渐进入老龄化，高血压的发病率及患病率越来越高〔12〕。Hcy是在甲硫氨酸循环代谢过程中产生的一类含硫氨基酸，是非必需氨基酸的一种，具有重要的生理意义。有报道显示，Hcy可以直接或通过其他途径间接对血管内皮细胞造成损伤，加强血小板功能，促进血栓形成，导致血压上升〔13〕。还有研究认为血浆Hcy与高血压发生的其他危险因素如吸烟、男性也有一定相关性〔14〕，但与高胆固醇血症、糖尿病无明显相关性，且在促进高血压方面呈独立相关性〔15〕。Hou等〔16〕研究发现，血清Hcy水平随着血压上升也不断升高。本研究也证明了血浆Hcy能够促进高血压的发生及发展，收缩压和舒张压会随着体内血浆Hcy浓度的升高而升高。

MTHFR是导致血浆Hcy代谢发生改变最常见的关键酶。MTHFR基因位于1号染色体的1p36.3。正常的MTHFR活性是脂肪酸和蛋氨酸代谢的关键，MTHFR以维生素B为辅助因子在蛋氨酸合成酶的作用下，由N5亚甲基四氢叶酸为甲基供体，将Hcy再甲基化形成蛋氨酸〔17〕。C677T位点是研究较多的突变位点，该突变位于MTHFR基因的N端，并是维持酶活性功能及结构域中的一个重要位点。其突变是碱基C被T替代，致使酶的活性下降，影响Hcy复甲基化，从而使血中Hcy水平升高〔18〕。本研究提示MTHFR基因中C677T的C→T突变与HHcy有关，与以往相关研究〔19〕类似。还有研究也证实〔20〕，MTHFR基因常见的C677T多态性在677位发生突变，携带T等位基因患者的血浆Hcy水平明显升高，叶酸水平低，高血压发病率也明显升高。本研究也说明MTHFR基因中C677T的C→T突变与高血压、HHcy相关。

高血压作为脑血管病重要危险因素之一，与认知功能障碍密切相关〔21～23〕，但其机制尚不清楚。有研究证明〔24〕HHcy是导致心脑血管事件，尤其是脑卒中的重要危险因素之一。而脑卒中又是VD的危险因素之一，因此Hcy也可能是VD的危险因素。还有研究显示血浆Hcy水平的升高与痴呆的发生有明显相关性，且血浆Hcy浓度升高可以作为痴呆发生的一个强有力及独立的危险因素〔25〕。Nilsson等〔26〕研究发现，和其他老年精神性疾病相比，VD患者血浆Hcy水平明显较高。本研究结果表明高血压及HHcy二者对VD的发生具有协同作用。本研究还发现，T/T基因发生VD的比例要高于C/C及C/T基因，T等位基因为VD的易感基因。

综上，MTHFR基因C677T突变及HHcy与VD的发生有关，可以通过MTHFR基因型的分析来预测VD。在降压、降低Hcy水平的同时，寻找MTHFR基因C677T突变的原因并予以防治，从而为防治VD提供一些新的手段。