急性心肌梗死病人血清miR-378表达水平及其临床意义

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微小RNA(miRNA)是一类由内源基因编码的长度约为22 个核苷酸的非编码单链RNA分子，它们在动植物中参与转录后基因表达调控。目前，在动植物以及病毒中已经发现有3万个miRNA分子[1]。大多数miRNA基因以单拷贝、多拷贝或基因簇(cluster)的形式存在于基因组中。近年来的研究显示，与健康人群相比，急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)病人血清中存在着多种差异表达的miRNA[2]。这种差异表达的miRNA可作为AMI病人诊断的血清学标志物。本研究采用贝叶斯定量探讨血清学因子B型脑钠肽(brain natriuretic peptide，BNP)和微小RNA miR-378在AMI病人血清中的表达情况及其鉴别诊断AMI与稳定型心绞痛(SAP)的临床应用价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择四川省绵阳市中心医院急诊科2015年3月—2016年8月收治的AMI病人59例(AMI组)和稳定型心绞痛(stable angina pectoris，SAP)病人62例(SAP组)为研究对象。纳入标准：符合美国心脏病协会(AHA)制定的AMI与SAP诊断标准[3]；既往无合并代谢性疾病，如甲状腺功能亢进等；既往无急性心肌梗死病史，本次为初次诊断；无恶性肿瘤史。排除标准：AMI或SAP未能确诊者；既往行冠状动脉支架植入术或冠状动脉旁路手术者；近期存在感染者；孕期或哺乳期妇女；人类免疫缺陷病毒(HIV)阳性者。AMI组59例，男35例，女24例；年龄(64.8±16.3)岁；糖尿病6例(10.2%)，高血压31例(52.5%)，吸烟33例(55.9%)。SAP组62例，男37例，女25例；年龄(63.7±17.2)岁；糖尿病6例(9.7%)，高血压30例(48.4%)，吸烟32例(51.6%)。两组病人一般资料比较差异无统计学意义。

1.2 血清BNP及miR-378检测 病人入组后抽取外周静脉血5 mL置于EDTA抗凝剂的管中，室温3 000 r/min离心15 min，小心提取上清液分装到无RNA酶的EP管中，然后置于-80 ℃低温冰箱中保存待用。采用固相免疫层析试剂盒(上海酶联生物科技有限公司)检测血清BNP水平，具体操作按试剂盒说明进行；采用实时荧光定量PCR仪器，检测两组病人血清miR-378水平，PCR引物由深圳华大基因合成。

1.3 观察指标 观察两组病人血清BNP及微小RNA miR-378水平；并分别以血清BNP和miR-378为参考诊断AMI，计算诊断的敏感性、特异性及ROC曲线下面积(AUC)。

2 结 果

2.1 两组血清BNP与miR-378 比较 AMI组血清BNP、miR-378相对表达量均高于SAP组(P<0.05)。详见表1。

表1 两组血清BNP与miR-378 比较(±s)

2.2 AMI病人血清BNP与miR-378的相关性 Spearson相关分析显示，AMI病人血清miR-378与BNP存在明显的相关性(r=0.88，P<0.05)。详见图1。

图1 AMI病人血清BNP与miR-378相关性的散点图

2.3 血清BNP与miR-378鉴别诊断价值 以血清BNP为参考鉴别诊断AMI的敏感性为70.6%，特异性为75.5%，AUC=0.79(95%CI0.70～0.88)。详见图2A。以血清miR-378为参考鉴别诊断AMI的敏感性为65.3%，特异性为69.4%，AUC=0.70(95%CI0.59～0.81)。详见图2B。

A图为血清BNP；B图为血清miR-378

图2血清BNP与miR-378鉴别诊断AMI的ROC曲线下面积

3 讨 论

随着我国人口老龄化的加剧，以及生活方式、饮食习惯变化，冠状动脉性疾病的发生率在逐年升高。冠状动脉疾病已经成为威胁我国居民健康的重大疾病之一[4]。急性冠脉综合征(ACS)是冠状动脉病变引起的严重心脏疾病，按严重程度可分为不稳定型心绞痛和急性心肌梗死。AMI发病迅速，未经及时诊断治疗的病例死亡率高且预后差。近年来的研究显示，血清BNP可以作为判断冠状动脉狭窄危险分层的一个重要指标[5-6]，同时也作为鉴别诊断AMI的重要血清学标志物。常丽颖[7]采用酶联免疫吸附实验测定AMI病人血清中BNP水平，发现AMI病人血清BNP水平显著高于稳定心绞痛病人，但该研究未对血清BNP鉴别诊断AMI与稳定型心绞痛病人敏感性、特异性进行探讨。本研究发现与SAP病人比较，AMI病人血清BNP显著升高，且其鉴别AMI与SAP的敏感性与特异性均较高，可对AMI进行辅助诊断。

miRNA是一类由内源基因编码的长度约为22个核苷酸的非编码单链RNA分子。近年来的研究显示，miRNA的血清表达水平与某些代谢性疾病的发生发展存在明显的相关性[3]。已有研究报道，与健康人群相比，ACS病人血清中存在众多差异表达的微小RNA，且这种差异表达程度与病人病情的严重程度存在一定的相关性[8]。因此，理论上这些差异表达的miRNA可能成为鉴别诊断ACS的潜在血清学标志物。miR-378是新近研究发现的一个微小RNA，长度为22nt，广泛表达于人体各个器官中。已有研究发现，miR-378在动脉粥样硬化性疾病病人血清中表达水平升高，可能是机体在缺血缺氧条件下诱导miR-378转录增强，从而导致血清表达水平上升[9]。但关于miR-378在AMI病人中的表达水平及其作为鉴别AMI与SAP血清学标志物的研究报道较少。因此，本研究探讨了miR-378在AMI与SAP病人血清中的表达情况，并根据贝叶斯定量评估其临床鉴别诊断的应用价值。提示血清miR-378诊断AMI的敏感性和特异性尚可，可作为潜在的血清学标志物。

但本研究的样本量较小统计学效能不高，所有病人均来自四川省绵阳市中心医院，可能存在一定的病人纳入偏倚。同时，也未对miR-378与AMI发生发展关系进行机制探讨。因此，下一步有必要增大样本量，并联合其他医疗单位，进行多中心的诊断试验。同时，采用相关分子生物学技术，探讨miR-378与AMI发生发展的分子机制，为临床AMI的诊治提供更为充分的循证医学证据。