阿朴酯和斑螯黄复合对蛋鸡抗氧化功能、蛋品质和蛋黄色素沉积的影响

李俊　程业飞　苏越

摘要：选取54周龄海兰褐蛋鸡270只，随机分为3组，每组6个重复，每个重复15只鸡。对照组饲喂基础日粮，试验Ⅰ组和试验Ⅱ组分别饲喂添加5.0 mg/kg阿朴酯+2.5 mg/kg斑蝥黄、5.0 mg/kg阿朴酯+5.0 mg/kg斑蝥黄的试验日粮。结果表明，与对照组相比，试验Ⅰ组蛋鸡肝臟丙二醛含量显著下降（P<0.05）；试验处理均显著提高蛋黄罗氏比色扇值、红度和黄度值、色素斑蝥黄和叶黄素含量，显著降低其亮度值（P<0.05）。阿朴酯和斑蝥黄复合可改善蛋黄颜色和色素沉积，且5.0 mg/kg阿朴酯+2.5 mg/kg斑蝥黄复合可提高蛋鸡肝脏抗氧化能力。

关键词：蛋鸡；阿朴酯；斑蝥黄；抗氧化性能；蛋品质；蛋黄色素

中图分类号：S831.9 文献标识码：A

文章编号：0439-8114（2018）18-0088-04

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2018.18.022 开放科学（资源服务）标识码（OSID）：

Effects of Aposter Combined with Canthaxanthin on Antioxidant Function， Egg Quality and Yolk Pigment Deposition in Laying Hens

LI Jun1，CHENG Ye-fei1，SU Yue1，TAO Zheng-guo2，ZHOU Di3，ZHOU Yan-min1，WEN Chao1

（1.College of Animal Science and Technology，Nanjing Agricultural University，Nanjing 210095，China；2.Guangzhou Leader Bio-technology Co.，Ltd.，Guangzhou 510663，China；3.Zhejiang Medicine Co.，Ltd.，Xinchang Pharmaceutical Factory，Shaoxing 312500，Zhejiang，China）

Abstract： A total of 270 54-wk-old Hy-Line Brown laying hens were allocated into 3 treatments with 6 replicates of 15 hens each. Hens in the control group were fed a basal diet， and hens in the test Ⅰ and Ⅱ were given the basal diet supplemented with 5.0 mg/kg apoester combined with either 2.5 or 5.0 mg/kg canthaxanthin， respectively. The results suggested that compared with the control group， hens in test Ⅰ exerted a decrease in malondialdehyde accumulation in the liver（P<0.05）. Treatments increased values of Roche colorimetric fan， redness， and yellowness， and contents of canthaxanthin and lutein， but reduced lightness value in the egg yolk（P<0.05）. The supplementation of apoester combined with canthaxanthin could improve color and pigment accumulation in the egg yolk， and combination of 2.5 mg/kg canthaxanthin with 5.0 mg/kg apoester could enhance antioxidant capacity in the liver of laying hens.

Key words： laying hen； apoester； canthaxanthin； antioxidant capacity； egg quality； yolk pigment

蛋黄颜色是衡量蛋品质的重要指标，影响消费者的满意度，消费者通常更喜欢从金黄色到橙色的蛋黄颜色[1]。蛋鸡自身并不能合成色素，蛋黄颜色是由饲料中的着色类胡萝卜素决定的。由于小麦具有易储存、季节性价格优势等优点，在盛产小麦的欧洲国家及中国小麦产区的蛋鸡场会采用小麦型日粮[2]。然而，饲喂小麦型日粮会导致蛋鸡蛋黄颜色变浅，蛋品质远远达不到消费者的要求。故常在小麦型蛋鸡日粮中添加少量的饲用色素来改善禽蛋色泽。国内外关于日粮中添加各种色素对蛋鸡蛋黄着色的影响研究较多，在蛋黄色素沉积中，将黄色和红色类胡萝卜素结合起来更有效更经济[3]。有关日粮中单独添加阿朴酯和斑蝥黄对蛋鸡的影响已有报道，但阿朴酯和斑蝥黄复合对蛋鸡的影响研究较少[4]。

因此，本试验通过在小麦型基础日粮中添加不同剂量的阿朴酯（5.0 mg/kg）和斑蝥黄（2.5和5.0 mg/kg）复配，研究其对蛋鸡抗氧化性能、蛋品质和蛋黄中色素沉积的影响，为色素在蛋鸡日粮中的合理应用提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验设计

选取54周龄海兰褐蛋鸡270只，随机分为3组，每组6个重复，每个重复15只（3只每笼）。对照组饲喂小麦-豆粕型基础日粮，试验Ⅰ和Ⅱ组饲喂基础日粮中添加不同配比色素的试验日粮（色素种类和添加量见表1，添加量以有效成分计）。斑蝥黄（10%）由浙江医药股份有限公司新昌制药厂提供，阿朴酯（10%）由广州立达尔生物科技股份有限公司提供。试验预试期为7 d，正式期为36 d。基础日粮配方见表2。

1.2 饲养管理

蛋鸡采用三层阶梯式笼养，饲养期间自由采食、自由饮水，按蛋鸡的常规饲养管理规范调节环境条件、接种疫苗、给药等工作。

1.3 指标测定

1.3.1 鲜蛋品质 于正式试验第5、12、18、36 d，从各组每个重复中随机选3个鸡蛋，用比色扇测定蛋黄颜色，用CR-10型色差仪测定蛋黄颜色（亮度、红度、黄度），使用EMT-5200型多功能蛋品测定仪检测蛋白高度和哈夫单位。

1.3.2 色素含量 于正式试验第5、12、18、36 d，从各组每个重复中随机选取1个鸡蛋来测定蛋黄中的叶黄素和斑蝥黄含量。蛋黄中的叶黄素和斑蝥黄含量的测定参考GB/T 21517-2008。

1）叶黄素和斑蝥黄标品的测定。称取试样0.050 0 g于50 mL棕色容量瓶中，加入15 mL提取剂，超声振荡2 min；加入15 mL正己烷，手摇15 s，用10%无水硫酸钠水溶液定容至刻度，摇荡1 min，避光静置15 min；吸取上层溶液约1 mL，用0.45 μm滤膜过滤后待测。用公式X=（A474 nm×625）/（236×G）来计算叶黄素标准品含量（mg/kg），其中G=试样重（kg），625为稀释倍数，下同。

称取试样0.020 0 g于50 mL棕色容量瓶中，加入约1.5 mL 10%的无水硫酸钠溶液，超声波清洗仪振荡5 min；加入15 mL提取剂，超声振荡2 min；加入15 mL正己烷，手摇15 s，用10%无水硫酸钠水溶液定容至刻度，用力摇1 min，避光静置15 min；吸取上层溶液约1 mL，用0.45 μm滤膜过滤后待测，计算斑蝥黄标准品含量。

2）蛋黄中叶黄素和斑蝥黄的测定。称取样品（蛋黄）2.000 g于100 mL棕色容量瓶中，加入约3 mL 10%的无水硫酸钠溶液，超声波清洗仪振荡5 min；加入30 mL提取剂，再加入2 mL 40%的甲醇溶液，塞上塞子手摇30 s；瓶口装冷凝管，并开冷凝水，放入调好的56 ℃恒温水浴锅中，皂化20 min，取出用自来水冷却至室温；加入30 mL正己烷，手摇30 s，用10%无水硫酸钠水溶液定容至刻度，摇荡1 min，避光静置2 h；吸取上层溶液约1 mL，用0.45 μm滤膜过滤后待测，计算蛋黄中的叶黄素和斑蝥黄的含量（mg/kg）。

3）HPLC条件。固定相：正相硅胶柱4.6 mm×250 mm；流动相：正己烷∶丙酮=8∶2（注：色谱纯）；柱温：室温；流速：1.5 mL/min；检测波长：446 nm（叶黄素）、470 nm（斑蝥黄）；进样量：20 μL。

1.3.3 抗氧化性能 于试验第36天，各组每重复选取1只体重相近的母鸡，颈静脉采血收集于干净的离心管中。然后立即解剖，收集肝脏于-20 ℃储存。将采集到的血液以3 500 r/min离心15 min，分离并收集上层血清于-20 ℃保存待测。肝脏用预冷的无菌生理盐水以1∶9（m∶V）在冰水浴中匀浆，随后以4 000 r/min离心10 min，收集上清液置于-20 ℃待相关指标检测。血清和肝脏中丙二醛（MDA）和还原型谷胱甘肽（GSH）含量、总抗氧化能力（T-AOC）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）酶活测定均采用试剂盒（购于南京建成生物工程研究所），测定方法均按照试剂盒说明书进行。

1.4 数据统计

数据用SPSS 20软件进行单因素方差分析（One-way ANOVA），用Duncan氏法进行多重比较，以P<0.05为差异显著，P<0.01为差异极显著，数据用平均值和标准误表示。

2 结果与分析

2.1 阿朴酯和斑蝥黄复合对蛋鸡血清和肝脏抗氧化性能的影响

由表3可知，与对照组相比，5.0 mg/kg阿朴酯和2.5 mg/kg斑蝥黄复合显著降低蛋鸡肝脏MDA含量（P<0.05），5.0 mg/kg阿樸酯与5.0 mg/kg斑蝥黄复合使其下降了15.4%，但差异不显著（P>0.05）。试验组对血清全部和肝脏其他抗氧化指标均无显著影响（P>0.05）。

2.2 阿朴酯和斑蝥黄复合对蛋品质的影响

由表4知，与对照组相比，两试验组蛋黄罗氏比色扇值（RCF）极显著升高（P<0.01），且蛋鸡饲养第12和18天时，试验Ⅱ组RCF显著高于试验Ⅰ组（P<0.05），随饲养时间的延长，在饲养第36天时，两试验组间差异不显著。从表5可知，两试验处理均极显著提高蛋黄红度和黄度值，极显著降低其亮度值（P<0.01），且试验组间无明显差异，但对蛋白高度和哈夫单位无显著影响。

2.3 阿朴酯和斑蝥黄复合对蛋黄中的色素含量影响

由表6可知，与对照组相比，不同剂量斑蝥黄和阿朴酯复合显著提高蛋鸡蛋黄中斑蝥黄沉积和第5、12天鸡蛋中叶黄素沉积，且试验Ⅱ组斑蝥黄含量在第5天后显著高于试验Ⅰ组（P<0.05）。

3 讨论

3.1 阿朴酯和斑蝥黄复合对蛋鸡抗氧化能力的影响

脂质过氧化是自由基攻击不饱和脂肪酸的结果，MDA是脂质过氧化的终产物，其含量可直接用以反映机体氧化损伤程度[5]。体外试验证明斑蝥黄可以有效清除自由基[6，7]。张伟[8]研究发现，添加斑蝥黄可提高肉种鸡血清、肝脏、脾脏和卵巢的抗氧化酶活，降低MDA含量。本研究中日粮中添加5.0 mg/kg阿朴酯和2.5 mg/kg斑蝥黄显著降低蛋鸡肝脏MDA含量，这与上述报道一致。本研究中提高的肝脏抗氧化能力可能与斑蝥黄可提高生物膜维生素E水平来降低脂质过氧化程度有关[9]。

3.2 阿朴酯和斑蝥黄复合对蛋鸡蛋品质的影响

蛋品质包括蛋黄颜色、蛋白高度、哈夫单位、蛋形指数等。饲料中的着色物质主要是叶黄素类物质，蛋黄着色度取决于饲料中叶黄素的有效供给量和叶黄素在鸡体中的沉积总量[10]。斑蝥黄和阿朴酯都属于类胡萝卜素，所以具有大多数类胡萝卜素所具有的生物学功能，对家禽的脚胫、喙、皮肤和皮下脂肪的着色有明显的作用[11，12]。研究指出，日粮中添加斑蝥黄可以显著提高蛋鸡蛋黄RCF值[13-15]。Hughes[16]研究发现，添加不同剂量的阿朴酯可以线性地提高蛋鸡蛋黄的RCF值。梁远东等[4]在玉米型基础日粮中添加阿朴酯和斑蝥黄复合可以显著改善蛋鸡蛋黄RCF值。本试验同时也证明小麦-豆粕型基础日粮中添加阿朴酯和斑蝥黄复合可明显提高蛋鸡蛋黄RCF值。

蛋黄色素沉积可分为2个明显的阶段，黄色类胡萝卜素对第一个黄色浸润阶段较为重要，红色类胡萝卜素对第二个阶段即着色阶段影响更大，将红色和黄色类胡萝卜素结合使用效果比较好[3]。黄小春等[17]在玉米型日粮中添加不同剂量的叶黄素可显著降低蛋鸡蛋黄亮度值，并提高红度值，但对黄度值无影响。此外，李士平[18]研究报道，小麦型基础日粮中添加红辣椒提取物（一种红色素）后，蛋鸡蛋黄红度值显著提高，亮度值显著降低，黄度值有所升高但不显著。本研究结果表明，小麦型基础日粮中添加阿朴酯和斑蝥黄复合显著提高了蛋鸡蛋黄红度和黄度值，显著降低其亮度值，这与上述报道相一致。此外，Umar等[19]试验发现，斑蝥黄和阿朴酯复合对种蛋的蛋形指数、哈夫单位等没有显著影响，与本试验结果相似。蛋黄亮度降低是因为蛋黄颜色变深，蛋黄颜色变深主要是通过斑蝥黄（红色类胡萝卜素）和阿朴酯（黄色类胡萝卜素）增加蛋黄红度和黄度值体现的。

3.3 阿朴酯和斑蝥黄复合对蛋鸡蛋黄中的色素含量影响

Karadas等[20]报道，日粮中添加天然类胡萝卜素，可以提高蛋黄中叶黄素、玉米黄素、番茄红素和胡萝卜素的含量。此外，黄小春等[17]及Leeson等[21]发现，随着日粮中叶黄素含量的增加，蛋黄中的叶黄素也增加。本研究结果表明，添加阿朴酯和斑蝥黄复合可显著提高蛋鸡蛋黄中斑蝥黄和叶黄素的含量，这与上述结果相一致。本试验中提高的蛋黄色素沉积与蛋黄颜色的改善相一致，进一步说明了蛋黄颜色的变深是由于色素沉积的结果。

4 结论

阿朴酯和斑蝥黄复合可改善蛋鸡蛋品质和蛋黄中色素沉积，且低剂量斑蝥黄复合效果就抗氧化能力看要优于高剂量斑蝥黄复合效果。故从成本角度出发，小麦-豆粕型蛋鸡日粮中宜添加5.0 mg/kg阿朴酯和2.5 mg/kg斑蝥黄。

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