河南地方品种鸡禽白血病病毒感染状况的调查

姬向波，杨朋坤，陈中卫，许红霞，高小寒，黄炎坤

(1.河南牧业经济学院，河南 郑州 450046；2.河南省畜禽遗传资源保护工程技术研究中心，河南 郑州 450046)

禽白血病(Avian leukosis, AL)是由禽白血病/肉瘤病毒群(Virusesofavianleukosis/sarcomagroup, ALV/ASV)中的病毒引起的禽类多种肿瘤性疾病的总称。根据禽白血病病毒与宿主细胞特异性相关的囊膜蛋白的抗原性，将其分为A～J等10个亚群，其中E亚群为内源性病毒，致病力较弱或无致病性。目前，在中国鸡群中普遍存在ALV-A/B亚群和J亚群单独或共感染现象，且J亚群对肉鸡致病力较强，诱发肿瘤率较高[1-2]。该病的主要危害为：一、可导致感染鸡直接发生肿瘤性疾病而死亡；二、可导致感染鸡产生免疫抑制和多组织器官发育迟缓，机体抵抗力下降，造成继发其他病原的多重感染；还可通过垂直传播危害子代鸡。鉴于禽白血病对养鸡业的巨大危害，“国家中长期动物疫病防治规划(2012-2020年)”将其列为必须消灭或控制的主要疫病之一[3]。

禽白血病p27抗原检测是开展禽白血病的流行病学调查和感染风险评估的重要手段之一[4]，但该检测无法区别外源性病毒和内源性病毒感染，ALV-A/B抗体、J抗体亚型检测可确定检测鸡只是否感染过相应的外源性病毒[5-6]。为了了解河南地方品种鸡群的禽白血病病毒感染状况，分别从河南不同地区的9个种禽场，采集了5个不同地方品种鸡群的样本，对其泄殖腔拭子、血清和蛋清进行p27抗原或ALV-A/B抗体、J抗体亚型检测，为河南省地方品种鸡的禽白血病净化和品种资源保护提供依据。

1 材料与方法

1.1 试剂 禽白血病p27 ELISA检测试剂盒为荷兰Biochek公司生产，禽白血病A/B、J亚型抗体ELISA检测试剂盒为美国IDEXX公司生产，分别购自北京天之泰生物科技有限公司和北京爱德士元亨生物科技有限公司。

1.2 样品采集与处理 从2015年10月至2017年4月，至河南省不同地区9个种禽场、随机选取1450只5个地方品种的开产母鸡群，分别采集其泄殖腔、血清、蛋清样品。泄殖腔棉拭子采集方法为，在样品管中加入1 mL样品稀释液、无菌棉签采集鸡泄殖腔分泌物，放入稀释液中；血清采集方法是每只鸡采集全血0.5 mL于灭菌离心管中，待凝固后3 000 r/min离心10 min，收集血清；蛋清的采集方法是，收集待检鸡种蛋，每只种蛋取0.5 mL浓蛋白至无菌离心管。以上样品均进行编号，低温运输，-80 ℃冷冻保存。

1.3 ALV-p27抗原及A/B、J亚型抗体检测 采用ELISA方法对采集的样品进行检测。对泄殖腔棉拭子、血清和蛋清样品均进行ALV-p27抗原检测，检测前反复冻融3次；同时对血清样品还进行了ALV-A/B亚型、J亚型抗体检测。

1.4 不同地方品种鸡ALV感染状况统计 根据检测结果和采样编号，将同1只鸡泄殖腔、血清、蛋清任一样品ALV p27抗原检测阳性者计为V+，3种样品p27抗原检测均为阴性者计为V-；ALV-A/B亚型、J亚型抗体任一检出阳性者计为A+，两种均为阴性者计为A-。

2 结果与分析

2.1 不同地方品种鸡禽白血病病毒感染状况调查结果 由表1可知，同一鸡群不同样品的p27抗原检出率不完全一致，其中以血清样品的阳性率最高。1 450只地方品种鸡的ALV群特异性抗原p27蛋清的阳性率分别为泄殖腔22.62%、血清26.83%、蛋清12.90%；ALV-A/B亚型和J亚型抗体阳性率分别为24.76%和19.52%。结果表明，河南地方品种鸡ALV感染现象较为普遍，且不同地方品种鸡群之间的ALV p27抗原阳性率和ALV抗体阳性率均差别较大，其中河南斗鸡和淅川乌骨鸡血清中的p27抗原阳性率分别达84.48%和53.78%；5个地方品种鸡群中仅淅川乌骨鸡的ALV-J亚型抗体阳性率高于ALV-A/B亚型抗体阳性率。

表1不同地方品种鸡ALVp27抗原和抗体亚型检测结果

品种样品数量p27抗原阳性率/%ALV抗体阳性率/%泄殖腔血清蛋清A/B亚型J亚型固始鸡74716.6019.8110.1721.4214.46三黄鸡18011.6717.228.8917.7813.33卢氏鸡24013.7516.677.0820.0010.42淅川乌骨鸡22553.3353.7824.0035.1149.78河南斗鸡∗5851.7284.4841.3868.9724.14总计145022.6226.8312.9024.7619.52

*：因河南斗鸡鸡群数量较少，本试验对同一河南斗鸡鸡群进行了两次采样检测，被采样母鸡分别为160日龄和250日龄(下表同)。第1次检测结果p27抗原和ALV抗体检出率均为0,此表数据仅计入了第2次检测结果

2.2 同一品种鸡在不同场区感染情况 由表2可知，同一品种鸡在不同场区的ALV p27抗原阳性和ALV抗体阳性差异率均有较大差异，如固始鸡和卢氏鸡两个地方品种鸡，不同场区的血清ALV p27抗原阳性率差别分别为12.45%和18.33%，这可能和不同鸡场的饲养管理水平和生物安全防控措施有关。ALV抗体亚型检测结果显示，除淅川乌骨鸡外，4个地方品种鸡血清样品中ALV-A/B亚型抗体阳性率均高于ALV-J亚型抗体阳性率，表明河南地方品种鸡群ALV-A/B亚型感染率高于ALV-J亚型。结果还显示，河南斗鸡同一鸡群在160日龄和250日龄的泄殖拭子、血清、蛋清3种样品的p27抗原抗体阳性率分别为0、0、0和46%、54%、34%；ALV抗体阳性率分别为0和44%，表明该鸡群在此期间感染了ALV。

2.3 不同品种鸡在不同场区ALV感染状况 鸡感染ALV有4种情况，分别为：无病毒血症、无抗体(V-A-)；无病毒血症，而有抗体(V-A+)；有病毒血症又有抗体(V+A+)；有病毒血症无抗体(V+A-)。按此分类对检测样本的统计结果见表3。由表3可知，正阳三黄鸡的两个场区鸡群感染状况主要为V-A-，占比分别为74.17%和71.67%，固始鸡和卢氏鸡两个品种在不同场区的感染状况差别较大，V-A-分别为51.16%、86.15%和55.83%、86.67%，淅川乌骨鸡和河南斗鸡两个品种鸡群V-A-占比较低，分别为22.86%、18%和13.79%。同时，固始鸡A场的ALV V+A-感染状况占比最高，达22.68%，与同品种B场的2.16%相差达20.52%；河南斗鸡同一鸡群的ALV感染状况在不同时间的差别极大。

表2 不同鸡场的鸡ALV p27抗原和抗体亚型检测结果

表3 不同地方品种和场区的鸡ALV感染状况统计结果

3 讨论

近10年的报道显示，禽白血病病毒已传入中国的地方品种鸡群，且在国外已基本净化的ALV-A/B亚群在中国鸡群的感染有明显上升趋势[7-8]。考虑到禽白血病病毒的垂直传播特点，本次调查采集了河南地方品种开产母鸡的泄殖腔拭子、血清和蛋清为检测对象。调查结果显示，同一批鸡的3种检测样品ALV-p27抗原阳性率有较大差异，其中以血清的阳性率检出率最高，蛋清的阳性检出率最低。结果还表明，1 450只母鸡的血清ALV p27抗原阳性率平均为26.83%，血清ALV-A/B亚型和ALV-J亚型抗体阳性率平均分别为24.76%、19.52%，说明河南5个地方品种鸡群中均存在不同程度的ALV感染，且ALV-A/B亚群和ALV-J亚群的单独或共感染已在河南地方品种鸡群中普遍存在。另外，结果还显示，不同品种鸡群间的ALV p27抗原阳性率差别较大，这是否和不同地方品种鸡对ALV的抗性差异有关，还有待进一步研究。

本次调查同时对比了4个不同地方品种鸡群在不同场区的ALV感染状况，结果显示，固始鸡和卢氏鸡在不同场区的ALV p27抗原阳性率和ALV-A/B、J亚型抗体阳性率均差别极大，而正阳三黄鸡和淅川乌骨鸡在不同场区的ALV p27抗原阳性率差别较小。该结果表明，鸡群ALV的感染与生物安全措施、饲养管理等因素有较大关系。此次调查还发现，河南斗鸡同一母鸡群不同日龄的ALV p27抗原阳性率和ALV-A/B亚型、J亚型抗体阳性率发生了极大变化，据了解，该场在两次检测期间没有引种情况，且目前鸡群未见发生肿瘤性疾病，是否因生物制品污染导致该结果还有待进一步调查。

研究表明，先天感染ALV的胚胎对病毒发生免疫耐受，出壳后表现为V+A-鸡，其血液和组织含毒量很高，是重要的ALV传染源，且该类型鸡只成年后发病率和死亡率都较高[1]。本次调查显示，固始鸡A场和淅川乌骨鸡A场的鸡群V+A-感染鸡占比分别为22.68%和20.57%，据了解这两个场区已有较为典型的禽白血病病例，且发生率较高。这说明ALV引起的先天性感染确实对鸡群健康有较大影响。

因目前尚无控制禽白血病的有效疫苗，故开展净化工作是控制该病发生和传播的最有效途径，但由于净化工作是一项长期任务，且净化成本较高，而当前河南地方品种鸡场的规模都比较小，仅有极个别场区开展了此项工作。但本次调查结果表明，河南地方品种鸡群禽白血病的预防和净化工作迫在眉睫。