间接ELISA法研究高效猪瘟细胞苗免疫效果

文│何东旭 周勇岐 周先建 （南京天邦生物科技有限公司）

猪瘟作为中国最主要的猪病之一，在中国导致的经济损失难以统计，专家估计猪瘟导致中国猪的平均发病死亡率在2%～5%，据此推算的直接经济损失每年就超过20亿元人民币。高效猪瘟疫苗免疫措施成为当前有效防控猪瘟的重要手段。长期以来在临床广泛使用的阻断ELISA法具有特异性强，但灵敏度较低的问题，不能准确评估猪瘟疫苗免疫效果，反应免疫保护率。间接ELISA法与兔体中和试验符合率能达90%以上，与过氧化物酶中和试验技术（NPLA）相关性r=0.94，敏感性在98%以上，特异性在92%以上，能准确检测猪瘟中和抗体水平，反应疫苗免疫效果。本文旨在通过间接ELISA法研究高效猪瘟细胞苗免疫效果，为猪场科学选用猪瘟疫苗提供参考。

◎图1 中和抗体平均值

◎图2 中和抗体阳性率

一、材料与方法

1.猪瘟疫苗：猪瘟耐热保护剂活疫苗（细胞源）—稳必宁由南京天邦生物科技有限公司生产（批号179043）。

2.试验动物：由安徽省某猪场提供，筛选3～5胎次母猪所产猪瘟抗原阴性健康仔猪为试验对象。

3.检测试剂盒：BioChek猪瘟E2（CSFV-E2）抗体检测试剂盒（北京天之泰生物科技有限公司），产品代码SK106。

4.试验方法：25日龄采集全血RT-PCR法检测，筛选猪瘟抗原阴性健康仔猪12

头，每窝6头，筛选的12头仔猪随机分成2组，A组为免疫组，B组为对照组。免疫组于27日龄，55日龄免疫稳必宁，每次耳后根肌内注射1头份/头，对照组不免疫任何厂家猪瘟疫苗。分别于首免后7天、14天、21天、28天，二免疫后7天、14天、28天、132日龄和150日龄采集血样进行中和抗体测定，间接ELISA法。

二、结果与分析

1.中和抗体平均值（图1）（表1）。

表1

表2

（1）首免后14天，对照组猪瘟中和抗体水平一直呈下降趋势，且首免后7天至150日龄一直维持阴性状态。

（2）首免后14天，免疫组猪瘟中和抗体水平一直呈下降趋势，分析为母源抗体衰减所致；首免后14天至首免后21天中和抗体水平停止下降，首免后21天到首免后28天，中和抗体水平快速上升到较高水平，分析首免抗体于首免后14天开始产生；首免后28天至二免后7天，中和抗体水平略微下降，分析为二免后抗原中和所致；二免后7天至二免后28天，中和抗体水平持续上升至最高水平，二免后28天至132日龄，中和抗体水平维持在峰值水平，132日龄至150日龄，开始略微下降，但仍维持在较高水平，分析二免后中和抗体于二免后7天开始产生，于二免后28天达到峰值，并能持续维持较高水平到150日龄以上。整体免疫效果具有中和抗体水平产生速度快，空白期短的特点，并且持续保护时间长，能满足实际生产中猪瘟防控的免疫需求。

2.中和抗体阳性率。

（1）对照组抗体阳性率持续下降至首免后14天全部为阴性，符合母源抗体衰减基本规律。

（2）首免后21天以内，中和抗体阳性率总体呈下降趋势，首免后21天至二免后28天，中和抗体阳性率总体呈上升趋势，且于二免后28天达到100%，二免后28天至132日龄略微下降至80%，且维持至150日龄，符合抗体消长基本规律，满足实际生产防控猪瘟的免疫要求。

三、讨论

适应性免疫包括体液免疫和细胞免疫两方面，机体对无包膜病毒的抵抗力主要来自抗体，对有包膜的病毒的抵抗力主要来自细胞免疫。细胞免疫与体液免疫常常处于平衡状态，很像跷跷板，相互调节，一方面高另一方面必然低。猪瘟属于有包膜的RNA病毒，细胞免疫力的强弱对猪瘟防控效果有着重要影响。因此，在评价猪瘟疫苗免疫效果时不能盲目要求高水平的中和抗体，而忽视细胞免疫力。

猪场在选择猪瘟疫苗时应综合考虑抗原免疫原性、效价和稳定性等关键指标，选择抗原免疫原性最好，效价足够高，批间稳定的产品为首选，不能盲目追求抗原含量而忽视抗原免疫原性，这样才能充分发挥疫苗体液免疫和细胞免疫的双重保护力，达到最佳免疫效果。此外，选择疫苗时还要关注疫苗的纯净性，减少浪费免疫动物的免疫能力。最后还要结合猪场实际生产成绩和科学检测手段，选择中和抗体产生速度更快，中和抗体水平足够高，持续保护时间足够长，猪场应用生产成绩稳定的产品为首选。