肉制品中喹诺酮残留检测

□ 张宏博 王洋 王燕 王岩 靳志敏 范鑫 郑玉山（通讯作者） 内蒙古自治区食品检验检测中心

1 引言

抗生素类兽药长期无节制的使用会导致动物免疫力下降，同时降低了疫苗的作用，进而使细菌疾病成为家禽的重点传染疾病[1]。喹诺酮是一类人畜通用药，因其具有组织浓度高、药物保留性好、抵抗多种细菌、杀菌作用强、抗菌时间长等特点而被广泛应用于水产和畜禽等疾病的治疗[7]。尽管喹诺酮药物有诸多优良品质，但仍需重视其毒副作用，如造成肝损害、引发周围神经病变时间加快，甚至可能产生不可逆的转变—导致肌无力症状的患者病情加重等[8]。

喹诺酮是羊肉检测中最为常见的一种兽药残留，其严重影响羊肉制品的安全及羊养殖业的发

表1 实验设备

表2 实验试剂

展，也已成为我国羊肉食品出口的主要制约因素。因此，检测羊肉中喹诺酮的残留对于食品安全管控有重大意义。

2 材料与方法

本实验参照GB/T 21312-2007农业部第235号公告，利用液相色谱-质谱/质谱法检测羊肉中培氟沙星、诺氟沙星、恩诺沙星、氧氟沙星、洛美沙星、环丙沙星6种喹诺酮的残留量。

2.1 设备

实验设备如表1所示。

2.2 试剂

除特别标注外，此次实验中所使用的试剂全部都为色谱纯，水为GB/T 6682规定的一级水，实验试剂如表2所示。

2.3 喹诺酮类药物的检测方法

2.3.1 提取

称取5g试样（精确至0.01g），装于50mL具螺旋盖聚四氟乙烯离心管中，之后加入10mL甲酸-乙腈（2∶98）溶液，立即盖盖剧烈振摇，旋涡震荡1分钟，超声提取10分钟，4000r/min离心5分钟，然后将乙腈层移入另一干净的聚四氟乙烯离心管中。向离心后的沉淀物中再加入10mL甲酸-乙腈（2∶98）溶液摇匀，旋涡震荡1分钟，4000r/min离心5分钟，合并乙腈提取液，待净化。

表3 梯度洗脱

表4 MRM离子选择通道m/z

2.3.2 净化

向提取液中加入15mL乙腈饱和正己烷溶液，漩涡震荡2分钟，4000r/min离心5分钟，除去上层正己烷，氮吹至干。准确加入1mL初始比例流动相溶液，超声1分钟，旋涡震荡1分钟溶解残渣，将溶液过0.22μm微孔滤膜，供高效液相色谱-质谱/质谱测定。

2.3.3 高效液相色谱-质谱/质谱法测定

液相色谱条件：色谱柱固定相类型为C18、色谱柱型号为ZORBAX Eclipse Plus C18；规格：2.1×100mm×1.8μm；柱温：40℃；室温：22℃；流动相组成：A为0.05%甲酸/水、B为乙腈；流速：0.3mL/min；进样量：3μL。

最优质谱条件：离子源（电喷雾正离子源）；检测方式：多反映监测；电喷雾电压：4 00 0V；离子源温度：350℃，汇总得出结果如表4。

3. 结果与分析

3.1 喹诺酮类标准物质

在 浓 度 为 5.0ng/mL、10.0ng/mL、20.0ng/m L、80.0ng/m L、100.0n g/m L得到的线性方程，洛 美 沙 星：Y=52.868650X+16.294 115； 恩诺 沙 星：Y=77.573131X+39.593310； 诺 氟沙 星：Y=35.557671X-0.922820； 环 丙 沙星：Y=26.118163X+19.661136；氧氟沙星：Y=8 9.4 3 5 71 7 X+1 7.01 1 2 8 9； 培 氟 沙 星：Y=4 1.0 9 7 36 0 X+1 3 0.3 8 7 5 4 6。相关系数R2均为0.9 9，峰面积与被测物质浓度呈现出的线性关系良好。

表5 诺酮类药物标准物质

3.2 试剂空白

样品空白如表6所示，在3.0 21～3.2 01m i n之间没有出现峰，所以诺氟沙星未检出；在3.1 8 1～3.62 1 m in之间没有出现峰，所以氧氟沙星未检出；在2.9 0 1～3.3 4 1 mi n之间没有出现峰，所以培氟沙星未检出；在3.1 4 1～3.321m in之间没有出现峰，所以环丙沙星未检出；在2.6 5 1～2.52 1 m in之间没有出现峰，所以洛美沙星未检出；在3.16 1～3.6 0 2 mi n之间没有出现峰，所以恩诺沙星未检出。

如表7所示，本次实验检测方法为，建立6个加入浓度为100ng/mL混合中间标准溶液50μL的空白试验与空白试剂对照，将检测到的各个噪音参数的结果记下来，当S/N=3时得到的最低浓度结果为检出限。

3.4 回收率

如表8所示，因为在实验过程中所有加入的物质都会有一定损失，故可能导致最终结果有所误差。为防止这一现象的发生，在羊肉中加入已知浓度的标准样液，经过涡旋震荡后按实验步骤作其检测值与羊肉样品检测值比较计算，从而知晓试剂是否有配对，羊肉样品的检测结果是否无误。

表7 氧氟沙星、诺氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星、培氟沙星、洛美沙星的信噪比和检出限

表8 氧氟沙星、诺氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星、培氟沙星、洛美沙星的回收率

表9 氧氟沙星、诺氟沙星、恩诺沙星、环丙沙星、培氟沙星、洛美沙星的精密度

3.5 精密度

精密称取6个空白样品，加入 1μg/m L的混合标准中间溶液4 0μ L，按样品处理同法操作。经计算得出，氧氟沙星精密度为7.4%、诺氟沙星精密度为6.8%、恩诺沙星精密度为6.9%、环丙沙星精密度为1 0.5%、培氟沙星精密度为8.5%、洛美沙星精密度为7.2%。

3.6 样品检测

本次试验共检测苏尼特羊、呼伦贝尔羊、大尾羊、山羊、绵羊、小尾寒羊、羊肝、羊毛肚、羊前腿、羊后腿、羊蹄筋、羊心1 2种羊肉样品，每种样品检测2个，以减小随机误差，提高检验的准确性。

根据农业部标准的要求，氧氟沙星、诺氟沙星、培氟沙星和洛美沙星均不得检出，环丙沙星和恩诺沙星之和小于等于 1 0 0 μg/kg才为合格品，反之则为喹诺酮类药物残留，不合格。

检测结果如表1 0所示，1 2种羊肉样品中均未检测出6种喹诺酮药物，所取羊肉样品均符合农业部标准，为合格品，消费者可放心购买。

4 结论

本实验确定了环丙沙星、氧氟沙星、培氟沙星、诺氟沙星、恩诺沙星、洛美沙星试剂空白值全部为0，检出限分别为 0.06μg/kg、0.02μg/kg、0.07μg/kg、0.05μg/kg、0.06μg/kg、0.05μg/kg，回收率为84.1%～102.1%，各物质的精密度依次是10.5%、7.4%、8.5%、6.8%、6.9%、7.2%。实验中所用苏尼特羊、呼伦贝尔羊、大尾羊、山羊、绵羊、小尾寒羊、羊肝、羊毛肚、羊前腿、羊后腿、羊蹄筋、羊心12种羊肉样品均未检出6种喹诺酮类药物，本次实验所采羊肉样品符合农业部标准，均为合格品。