颈动脉超声检查、ABCD2评分结合血清miR-146a检测对短暂性脑缺血发作患者短期继发脑梗死的预测价值

韩冬林 程 琦

(深圳市宝安区中心医院富恒社区健康服务中心，广东 深圳 518000)

短暂性脑缺血发作(TIA)是指脑动脉一过性供血障碍引起的短暂性神经功能缺损发作，是导致脑梗死的独立危险因素之一〔1〕。据流行病学统计，TIA发作后短期内10%～20%的患者可进展为脑梗死(CI)〔2〕。因此，尽早对TIA患者进行客观的风险评估和积极的干预，能够有效预防CI的发生。颈动脉粥样硬化是导致TIA的主要原因之一，通过颈动脉超声检测评估动脉粥样斑块形成情况和颈动脉狭窄程度，对于预测CI的发生具有一定的参考价值〔3〕。ABCD2评分量表是目前临床上广泛应用的TIA患者早期发生CI的风险预测工具〔4〕，但其预测TIA短期发生CI的灵敏度和准确性仍不够理想。最新的研究发现，miR-146a参与调节动脉粥样硬化斑块的形成，因而在预测CI发生和发展方面表现出良好的潜能〔5〕。本研究结合颈动脉超声检查、ABCD2评分和血清miR-146a检测，对TIA患者进行危险分层，并探讨其对TIA患者短期发生CI的预测价值。

1 资料与方法

1.1一般资料 2014年1月至2016年7月收治的150例TIA患者作为研究对象。男87例，女63例，年龄50～76岁，平均(59.7±6.4)岁。纳入标准：(1)突然发生的局限性神经功能缺损，症状和体征在24 h内完全消失；(2)头颅CT或MRI检查无相关责任病灶；(3) 排除患有偏头痛、癫痫、周围性眩晕、周期性瘫痪、阿-斯综合征、颅内动脉瘤、心房纤颤、低血糖等临床表现类似TIA 发作的疾病患者；(4)排除心、脑、肺等重要脏器严重慢性病史。根据TIA 发作后30 d内患者是否进展为CI，将150例患者分为CI组(71例)和非CI组(79例)。CI诊断符合全国脑血管病会议制定的标准，并经头部CT或MRI检查确诊。所有患者研究前均被告知签署知情同意书。

1.2方法

1.2.1颈动脉彩超检查 采用TOSHIBA公司Aplio300型彩色多普勒声像仪，10 MHz线阵式探头，对患者双侧颈总动脉及颈内外动脉进行检查。在管腔最狭窄处测定狭窄程度，以百分数表示。颈动脉狭窄程度诊断标准：①轻度狭窄：血管狭窄程度<50%；②中度狭窄：50%≤血管狭窄程度<70%；③重度狭窄：血管狭窄程度≥70%。

1.2.2ABCD2评分 ABCD2评分量表为目前常用的评估TIA患者短期进展为CI风险的评分量表。评分标准：①年龄(≥60岁)(1分)；②就诊时收缩压≥140 mmHg或者舒张压≥90 mmHg(1分)；③临床表现：单侧肢体无力(2分)；言语障碍，不伴肢体无力(1分)；④症状持续时间：≥60 min(2分)，10～59 min(1分)，<10 min(0分)；⑤患有糖尿病(1分)。分数相加，ABCD2 总分为0～7分。危险程度分级：低度危险(0～3分)；中度危险(4～5分)；高度危险(6～7分)。

1.2.3血清miR-146a检测 所有受试者均在TIA发病后24 h内采集静脉血5 ml，然后2 000 r/min离心15 min，吸出上层血清，放入-80℃冰箱待实验。采用Trizol法提取血清中的总RNA(每1 ml血清加入1 ml的Trizol试剂)。逆转录RNA为cDNA(构建7 μl反应体系)：100 mmol/L dNTPs 0.15 μl，Multiscrobe Reverse Transcriprases(50 U/μl)1 μl，RNase抑制剂(20 U/μl)0.19 μl，10×Reverse Transcription缓冲液1.5 μl，Nuclease-free water 4.16 μl。逆转录反应条件：16℃，30 min；42℃，30 min；85℃，5 min。PCR反应(以β-actin为内参基因，建立20 μl反应体系)：Product from RT reaction 2 μl，Taqman MicroRNA Assay(20×)1 μl，Premix Ex Taq PCR master mix 10 μl，Nuclease-free water 7 μl。反应条件：95℃变性15 s ；60℃退火1 min，共45个PCR循环。采用2-ΔΔCT法分析miR-146a表达的相对定量值。

1.3统计学处理 采用SPSS19.0软件，计量资料组间比较采用t检验，应用Logistic回归分析评估颈动脉超声检查、ABCD2评分结合血清miR-146a预测TIA短期进展为CI的发生风险；受试者工作特征(ROC)曲线计算曲线下面积(AUC)，评价颈动脉超声检查、ABCD2评分结合血清miR-146a预测CI的价值。

2 结 果

2.1CI组和非CI组颈动脉狭窄程度、ABCD2评分和血清miR-146a比较 CI组和非CI组颈动脉狭窄程度不同，其中CI组轻度狭窄率和中度狭窄率均明显低于非CI组，而重度狭窄率则明显高于非CI组，差异均有统计学意义(P<0.05)。CI组的ABCD2评分和血清miR-146a表达水平明显高于非CI组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 两组颈动脉狭窄程度、ABCD2评分和血清miR-146a水平比较〔n(%)〕

2.2颈动脉狭窄程度、ABCD2评分和血清miR-146a对CI预测能力的Logistic分析 Logistic回归分析结果显示，颈动脉狭窄程度、ABCD2评分和血清miR-146a与CI具有明显的相关性。即颈动脉狭窄程度越大，ABCD2评分越高，血清miR-146a水平越高，TIA短期继发CI的可能性越大(P<0.05)，见表2。

2.3颈动脉狭窄程度、ABCD2评分和血清miR-146a水平对CI预测的ROC曲线及AUC ROC曲线分析结果显示，颈动脉狭窄程度、ABCD2评分和血清miR-146a水平预测TIA短期继发CI的AUC分别为0.652、0.736和0.647，三者联合检查预测CI的AUC为0.803(P<0.005)。从AUC上看，三者结合对TIA短期继发CI的预测价值更好，见图1。

表2 Logistic回归分析

图1 ROC曲线分析

3 讨 论

临床研究证实，TIA是CI最重要的独立危险因素，因而TIA后短期发生CI的风险很高。大型流行病学研究数据显示，TIA患者在发病后3个月内发生CI的比例可达10%～15%〔6〕。因此，及时、简单、准确评估TIA发作后发生CI的风险程度并给予针对性个体化的治疗，有利于防止TIA进展为CI。目前，针对TIA后短期发生CI的评估手段有几种。多普勒超声作为一种最常用的非创伤性检查技术，通过评价大动脉血管病变程度及血流动力学情况评估病情及预后。冷静等〔7〕的研究显示，动脉的狭窄程度与CI的发生有明显的相关性。尤其是颈动脉狭窄程度超过50%的患者，其CI的发生率明显增高。ABCD2评分量表由Johnston等〔8〕于2007年提出，目前已在世界范围内广泛使用，用于评估TIA的预后及危险程度。Tsivgoulis等〔9〕的研究中，根据ABCD2得分将TIA患者分为低危、中危、高危三类，短期发生CI的比例分别为1.2%、12.4%和24.1%。秦伟等〔10〕对171例TIA患者研究后发现，ABCD2评分中危组发生CI的比例为29.3%，而高危组的16例TIA患者全部发生CI。大量的研究〔11〕表明，颈动脉超声检查和ABCD2评分在TIA后继发CI的预测方面具有较好的临床应用价值。本研究结果显示，颈动脉狭窄程度越大，ABCD2评分越高，TIA患者短期继发CI的可能性越大。这与国内外相关研究报道〔12〕一致，也再次验证了颈动脉超声检查和ABCD2评分的临床应用价值。由于TIA是由多种危险因素和病因导致的疾病，因此目前临床上采用的单个评估方法在特异性和敏感性方面存在一定的误差，尚不能很好预测TIA后期是否会发生CI。而大量的临床研究数据表明，联合应用多个评估方法能够显著提高预测TIA患者短期CI风险的价值〔13,14〕。柴永宏〔15〕的研究显示，联合使用ABCD2和磁共振弥散加权成像(DWI)预测TIA患者短期继发CI的AUC为0.809，明显高于单独应用ABCD2评分(AUC=0.724)。提示联合应用能够提高预测TIA后期是否会发生CI的准确性。miR-146a是新近发现的一个小RNA，相关研究显示其通过调控下游基因，在炎症、免疫、造血和肿瘤等多种生理病理过程中起着重要的作用〔16,17〕；尤其值得关注的是，miR-146a也被证实参与调控动脉粥样硬化及缺血/再灌注损伤中的炎症和免疫过程。Zhu等〔18〕的研究提示，miR-146a可导致大动脉粥样硬化型缺血性脑卒中的发病风险增加，是中国北方汉族人群大动脉粥样硬化型缺血性脑卒中的独立危险因素。TIA后CI的发生乃至病情严重程度在一定程度上与动脉粥样硬化斑块性质有关。因此，miR-146a在防治TIA后CI的靶向研究中越来越受到学者重视。然而，由于miR-146a具有的多基因功能性，多个病理过程均会导致其在血清中的表达改变。因此，血清miR-146a对预测TIA短期继发CI的敏感性和特异性尚不够理想。为进一步提高对TIA后短期发生CI的诊断效能，本次研究将颈动脉彩色多普勒超声检查、ABCD2评分和血清miR-146a联合起来。结果表明，三者结合能够更加有效地对TIA患者短期继发CI进行预测评估。但尚需进一步如大样本量及延长随访时间进行验证。