复方中草药对黄颡鱼生长、肉质及血清中补体C3、补体C4含量的影响

曲 木， 黄 成， 张宝龙， 程镇燕， 白东清， 贾丽艳， 翟胜利*

（1.天津市晨辉饲料有限公司，天津市水族动物功能性饲料企业重点试验室，天津 301800；2.天津农学院水产学院，天津市水产生态及养殖重点试验室，天津 300384）

黄颡鱼 （pelteobagrus fulvidraco）属鲶形目（Siluriformes）， 鲿科 （Bagridae）， 黄颡鱼属（Pelteobagrus）。因其细嫩的口感，少刺，味道鲜美而被人们所喜爱，但是由于养殖面积和强度的急剧增加，病害日益严重，养殖人员大量使用抗生素和化学药品，致使鱼体抗药性增加，养殖成本提高，已严重影响人类的健康和水环境安全 （盛竹梅等，2012）。近年来，中草药被广泛应用于凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei） （ 王 芸 等 ，2007）、 鲤 鱼（Cyprinus carpiovar） （ 孟 兆 娜 等 ，2011）、 草 鱼（Ctenopharyngodon idellus）（李超等，2011）等的研究中，结果发现添加中草药对养殖对象生长及免疫力提升有极大的促进作用。目前，添加中草药以提高鱼体抗病毒性、抗病菌及促进免疫力等功效成为水产饲料添加剂的研究热点 （刘红柏等，2004；姜德山等，2003；罗琳等，2000；黄琪琰，1993）。本试验研究以党参、黄芪、野菊花混合制成的复方中草药对黄颡鱼生长、肉质及血清中补体含量的影响，为饲料配方优化提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 试验饲料

1.1.1 复方中草药的制备 复方中草药的制备参照葛婧等（2016）方法并略作改动。将黄芪、党参和野菊花三种中草药按5∶3∶2比例混合。将称重过的中草药洗净温水浸泡50 min，加20倍水量，先用武火煎煮，沸腾后改用文火，砂锅3次煎煮，一煎40 min，二煎 35 min，三煎 30 min，连续煎煮后过滤残渣，汤剂按组别分别装瓶标号放入冰箱4℃冷藏待用。

1.1.2 饲料的制备 本试验饲料以复方中草药为添加剂，以鱼粉、豆粕、鸡肉粉、玉米蛋白粉为主要蛋白来源，辅佐少量矿物质元素，配合中草药制成六个梯度的试验饲料。以Diet 1为对照组（复方中草药含量0%），其余为试验组。饲料自然风干，装袋保存标记待用。

表1 饲料配方%

1.2 试验鱼与养殖管理

1.2.1 试验鱼 试验鱼购自天津市和来科技有限公司，挑选规格一致，初始体重（20.0±1.0）g 的黄颡鱼，经消毒、暂养2周后，随机选取健康无病，体色正常不畸形的试验鱼分为六个处理组，每组4个平行，每个平行20尾鱼，饲养在780m×575m×467 m的方形（实际养殖水150 L）蓝色塑料箱中，记录每条鱼的体重。驯化2周后开始正式养殖试验，养殖周期为28 d。

1.2.2 养殖管理 试验期间日投喂量为体重的3%～6%，具体投喂量按试验鱼实际摄食情况而定，每天记录投喂量，每天饲喂两次，投喂时间为每天9:30和16:30。定期检测水质指标：试验期间水温（27.5±2.5）℃，溶氧≥6.0 mg/L，pH 为（7.3±1.2），氨氮 ＜ 0.2 mg/L，亚硝酸盐 ＜ 0.005 mg/L。每两天换一次水，每次换水1/3左右，及时清理底质沉积。

1.2.3 样本采集 养殖试验结束后，禁食24 h，从每个养殖箱随机捞取5尾鱼，称重记录。试验鱼经丁香酚麻醉后，在冰盘上进行抽血，取出来的静脉血4℃、4000 r/min离心15 min，取上层血清待用。之后进行解剖，取肝脏、脾、中肾等组织，对肝脏称重记录，所有样本-20℃条件保存。

每个平行分别取10尾鱼，取侧线上方的同侧新鲜背肌，干纱布擦干表面水分，其中5尾鱼的样品放于底部放有适当吸水纸的10 mL离心管中，以用于肌肉滴水损失率的测定，剩余5尾样品装入密封袋以用于后续肌肉蒸煮损失率测定。

1.3 试验方法

1.3.1 生长指标的测定

生长指标计算按下列公式进行：

增重率/%=（终末体重-初始体重）/初始体重×100；

特定生长率/（%/d）=（ln 终末体重-ln 初始体重）/养殖时间×100；

饵料系数=饲料投喂重量/（终末体重-初始体重）；

肝体比/%=肝脏重量/终末体重×100；

蛋白效率 （PER，%）=体重增加量/蛋白质摄取×100。

1.3.2 肉质检测

1.3.2.1 肌肉滴水损失率测定 将盛有样本的10 mL离心管，4℃，4000 r/min离心20 min，取出擦干背肌表面水分，称重记录。

滴水损失率/%=（离心前肌肉质量-离心后肌肉质量）/离心前肌肉质量×100。

1.3.2.2 肌肉蒸煮损失率测定 将装有样本的密封袋，放入70℃的恒温水浴锅中蒸煮15 min，取出冷却至室温，擦干背部肌肉表面水分，称重记录。

蒸煮损失率/%=（蒸煮前肌肉质量-蒸煮后肌肉质量）/蒸煮前肌肉质量×100。

1.3.3 黄颡鱼组织中补体C3、补体C4含量的测定

采用商用试剂盒 （购自南京建成生物工程研究所）对血清及组织中的补体C3、补体C4含量进行测定。

1.4 数据分析 所有指标数据均用Excle 2007进行分析处理，所有数据均以“平均数±标准误”表示，使用SPSS 18统计软件进行单因素方差分析（ANOVA），用 Duncan（D）比较差异性，显著性水平为0.05。

2 结果

2.1 复方中草药对黄颡鱼生长性能的影响 用添加复方中草药的饲料饲喂黄颡鱼，在7、14、21、28 d时取样，结果表明：随着饲料中中草药添加量的上升，黄颡鱼增重率有上升的趋势，在4个取样阶段均为Diet 4处理组最高，与对照组相比分别升高了 69.89%、106.69%、143.51%、66.07%，Diet 4处理组各阶段增重率大小顺序为21 d＞7 d＞14 d＞28 d（见表 2）。

表2 复方中草药对黄颡鱼增重率的影响%

用添加复方中草药的饲料饲喂黄颡鱼，在7、14、21、28 d时取样，结果表明：随着饲料中中草药添加量的上升，黄颡鱼增重率有上升的趋势，在4个取样阶段均为Diet 4处理组最高，与对照组相比分别升高了 70.07%、105.71%、142.11%、63.64%，Diet 4处理组各阶段特定生长率大小顺序为 7 d＞14 d＞21 d＞28 d（见表 3）。

表3 复方中草药对黄颡鱼特定生长率的影响%/d

用添加复方中草药的饲料饲喂黄颡鱼，在7、14、21、28 d 时取样，结果表明：随着饲料中中草药添加量的上升，黄颡鱼的饵料系数变化趋势不明显，在4个取样阶段均为Diet 4处理组最低，且显著低于其他各组（P＜0.05），分别比对照组降低了 11.58%、22.35%、28.88%、35.52%，Diet 4处理组各阶段饵料系数大小顺序为7 d＞14 d＞28 d＞21 d（见表 4）。

表4 复方中草药对黄颡鱼饵料系数的影响

用添加复方中草药的饲料饲喂黄颡鱼，在7、14、21、28 d时取样，结果表明：随着饲料中中草药添加量的上升，黄颡鱼蛋白质效率有上升的趋势，在4个取样阶段均为Diet 4处理组最高，且显著高于其他各组（P＜0.05），与对照组相比分别升高了 25.82%、41.48%、47.09%、63.91%，Diet 4处理组各阶段蛋白质效率大小顺序为14 d＞28 d＞7 d＞21 d（见表 5）。

表5 复方中草药对黄颡鱼蛋白质效率的影响%

2.2 复方中草药对黄颡鱼肉质的影响 用添加复方中草药的饲料饲喂黄颡鱼，在7、14、21、28 d时取样，结果表明：随着饲料中中草药添加量的上升，黄颡鱼肉质的滴水损失率有降低的趋势，在4个取样阶段均为Diet 4处理组最低（P＜0.05），与对照组相比分别降低了24.52%、28.81%、44.28%、46.03%，Diet 4处理组各阶段滴水损失率大小顺序为 7 d＞14 d＞28 d＞21 d（见表 6）。

表6 复方中草药对黄颡鱼背部肌肉滴水损失率的影响%

用添加复方中草药的饲料饲喂黄颡鱼，在7、14、21、28 d时取样，结果表明：随着饲料中中草药添加量的上升，黄颡鱼肉质的蒸煮损失率有降低的趋势，在4个取样阶段均为Diet 4处理组显著较低 （P＜0.05），与对照组相比分别降低了28.80%、29.81%、39.47%、38.62%，Diet 4处理组各阶段滴水损失率大小顺序为7 d＞14 d＞28 d＞21 d（见表 7）。

表7 复方中草药对黄颡鱼背部肌肉蒸煮损失率的影响%

2.3 复方中草药对黄颡鱼血清中补体C3、补体C4含量的影响

2.3.1 复方中草药对黄颡鱼血清中补体C3含量的影响 用添加复方中草药的饲料饲喂黄颡鱼，在 7、14、21、28 d 时取样，结果表明：随着饲料中中草药添加量的上升，黄颡鱼血清中的补体C3活性有上升的趋势，在4个取样阶段均为Diet 3处理组显著升高（P＜0.05），与对照组相比分别升高了 51.18%、139.93%、46.80%、102.56%，Diet 3处理组各阶段补体C3活性高低顺序为21 d＞28 d＞14 d＞7 d（见表 8）。

2.3.2 复方中草药对黄颡鱼血清中补体C4含量的影响 用添加复方中草药的饲料饲喂黄颡鱼，在 7、14、21、28 d 时取样，结果表明：随着饲料中草药添加量的上升，黄颡鱼血清中的的补体C4活性有上升的趋势，在4个取样阶段均为Diet 3处理组显著升高（P＜0.05），与对照组相比分别升高了 231.43%、159.05%、161.04%、223.81%，Diet 3处理组各阶段补体C4活性高低顺序为21 d＞28 d＞14 d＞7 d（见表 9）。

表8 复方中草药对黄颡鱼血清中补体C3含量的影响mg/L

表9 复方中草药对黄颡鱼血清中补体C4含量的影响mg/L

3 讨论

3.1 复方中草药对黄颡鱼生长的影响 中草药含有多中营养元素和生物活性物质，对养殖动物有一定的促生长作用。Wu等（1998）发现，0.3%中草药（绞股兰）对草鱼增重的促进作用最大，Dan等（1999）发现，1%中草药（小茴香）对鲫鱼增重的促进效果最大。与上述结果相似，本试验中，黄颡鱼摄食了含有中草药的饲料后，增重率和特定生长率显著提高，Diet 4饲料组即中草药含量为0.4%时促生长效果最好。中草药的给药剂量不同，可能是因为添加中草药种类、养殖对象的不同造成的。复方中草药可以促进黄颡鱼对饲料的吸收和消化，增加饲料的吸收利用率。消化率决定饲料利用率，而消化率与消化部位产生的消化酶息息相关，消化酶决定黄颡鱼对饲料中营养物质的吸收利用，朱浩等（2008）证明了中草药饲料可以改变消化酶活性，从而促进黄颡鱼的生长。中草药具有诱食作用，可以增加黄颡鱼对饲料的兴趣，大大降低饲料的浪费，变相的降低饵料系数。从蛋白质效率上看，投喂中草药后，可以提高黄颡鱼对蛋白质吸收利用，对生长起到一定的促进作用。而肝体比方面试验组与对照组相比并没有太大的变化，这与丁小峰（2006）的试验结果相似。

3.2 复方中草药对黄颡鱼肉质的影响 肌肉滴水损失和蒸煮损失是衡量肌肉蛋白质保持水分的能力，直接影响肉的风味、质地和营养成分等食用品质（黄燕华等，2013）。试验中投喂黄颡鱼中草药饲料后，蒸煮损失率和滴水损失率都有所下降，其中Diet 4的效果最好，中草药含量为1.20%，从而也说明肉质中的水分减少，蛋白质和脂质成分变大，黄颡鱼的品质变高。王吉桥等（2008）研究证明了投喂中草药可以提高黄颡鱼肌肉中苏氨酸，蛋氨酸等含量，大大提高肉质的营养价值。张耀武等（2013）研究发现，中草药能够提高黄河鲤肌肉中鲜味氨基酸的含量，提升其肌肉品质。

3.3 复方中草药对黄颡鱼组织中补体C3、补体C4含量的影响 补体系统可广泛参与机体抗微生物防御反应以及免疫调节，也可介导免疫病理的损伤性反应，是机体内具有重要生物学意义的效应系统和效应放大系统（符华林，2002），而C3、C4为补体系统中固有的成分，在机体防御过程中可通过免疫复合物、调理吞噬细胞等机制对病原微生物进行清除及活化炎性细胞对靶细胞的杀伤作用（崔保安等，2003；王英超等，1998）。 研究表明，以添加复方中草药（麻黄、苦参、黄岑、五倍子等）的饲料饲喂黄颡鱼，可显著提高其血清中补体C3、补体C4的含量 （盛竹梅等，2012）。李华等（2013）用富含复方中草药（牛膝、板蓝根、甘草、陈皮、肉桂、麦芽、神曲）的饲料饲喂大鳞鲆，发现4%的中草药处理组大鳞鲆血清中补体C3含量持续上升。与以上研究结果相同，本试验在饲料中添加党参、黄芪、野菊花，同样可以使黄颡鱼血清中补体C3、补体C4的含量得到提升，进而提升黄颡鱼免疫力。最适中草药添加量有差异，可能是由于中草药种类不同，富含活性物质不同造成的。

4 结论

本试验结果表明，中草药添加量为0.4%时，试验组黄颡鱼生长特性最好，肌肉滴水损失率和蒸煮损失率最低。在21 d中草药添加量为0.2%与0.4%时，试验组黄颡鱼血清中补体C3、补体C4含量显著升高。综合生长、肉质及免疫指标来看，黄颡鱼最适复方中草药添加量为0.4%，最佳给药时间为21 d。