低密度脂蛋白受体相关蛋白1与胎盘植入及新生儿结局的关系

2018-11-07陈睿王瑜

实用医学杂志 2018年20期

陈睿王瑜

河南省人民医院（郑州 450003）

胎盘植入指胎盘绒毛异常而侵犯到子宫肌层，也有研究人员称其为病态附着胎盘。近些年，大量研究证实，胎盘植入产妇可能出现大出血、子宫破裂以及子宫切除等一系列不良妊娠结局，严重威胁到产妇及新生儿的健康甚至生命［1-2］。低密度脂蛋白受体相关蛋白1（low density lipoprotein receptor adaptor protein 1，LRP）是近年来发现的一种细胞表面蛋白，属于一种内吞性受体，系低密度脂蛋白受体基因家族中的一员。LRP1除了在细胞表面被发现以外，还在人类血浆以及脑脊液等体液中检测到［3-4］。低密度脂蛋白受体相关蛋白与血管生成和多种血管疾病有关，但其在滋养细胞调节中的作用尚不完全清楚。近来，研究者通过测定鼠胚体外培养液发现，小鼠低密度脂蛋白受体相关蛋白基因敲除后导致胚胎死亡，提示低密度脂蛋白受体相关蛋白与小鼠胚胎生长、发育以及着床具有一定的相关性［6-8］。本研究的新颖之处是选择胎盘植入产妇为研究对象探讨胎盘植入产妇血清LRP1表达情况，目前该问题尚无研究者涉猎。本研究可分析其表达水平与产妇及新生儿结局的相关性，以为临床诊治提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料本研究选取2016年4月至2017年10月期间于我院分娩的30例胎盘植入产妇以及同期于我院分娩的健康产妇为研究对象。入组标准：（1）经病理证实的胎盘植入产妇；（2）存在既往人工流产史或宫腔操作史产妇；（3）神志、意识正常产妇。（4）临床资料完整者。排除标准：（1）存在家族遗传病产妇；（2）合并严重慢性疾病产妇；（3）有精神疾病或精神病史产妇；（4）合并恶性肿瘤产妇。本研究已经获得医院医学伦理委员会批准，且受试者均已签署书面知情同意书。

1.2 研究方法

1.2.1 受试者的分组根据LRP1表达水平，将30例胎盘植入产妇分为两组，其中包含17例低表达组受试者以及13例高表达组受试者。注：低表达组和高表达组分组的具体标准是（6.55±0.78）μg/mL（该水平是普通人群中该蛋白的平均表达水平）［5］。

1.2.2 样本收集于清晨空腹状态下，抽取3 mL静脉血，采用离心机以3 000 r/min转速条件下离心10 min；取上清液，置于-80℃冰箱中保存待测。

1.2.3 酶联免疫吸附试验（ELISA）测定血清低密度脂蛋白受体相关蛋白 1、Caspase-3、Bax、bcl-2表达水平按照ELISA试剂盒操作说明中要求依次加样，将标准品与标本分别加入每孔；反应孔采用封板胶纸封住，37℃条件下孵育1.5 h；清洗3次，每次5 min；将生物素化抗体稀释液加入空白孔，生物素化抗体工作液加入其余孔内，反应孔采用封板胶纸封住；37℃条件下孵育1 h；清洗3次，每次5 min；打开电源，设置检测程序；加入显色底物，避光条件下孵育15 min；清洗3次，每次5 min；加入终止液以终止反应，采用酶标仪（芬兰，Labsystems Multiskan MS）测定各孔450 nm波长条件下光密度值；以标准品浓度以及对应光密度值为依据标准曲线，样本浓度根据曲线方程进行计算。ELISA试剂盒购自武汉基因美公司。

1.2.4 观察指标（1）比较胎盘植入产妇与健康对照产妇血清LRP1表达水平；（2）比较胎盘植入产妇与健康对照产妇血清Caspase-3、Bax、bcl-2表达水平；（3）搜集血清LRP1低表达、高表达胎盘植入产妇年龄、生育史、产次、流产史以及剖宫产史等临床资料并进行比较；（4）比较血清LRP1低表达、高表达胎盘植入产妇血清Caspase-3、Bax、bcl-2表达水平；（5）比较血清LRP1低表达、高表达胎盘植入产妇产后出血、产后输血以及子宫切除情况；（6）比较血清LRP1低表达、高表达胎盘植入产妇娩出新生儿结局。

1.3 统计学方法采用SPSS 20.0统计分析软件；计量资料采用均数±标准差表示，多组间比较采用单因素方差分析或者重复测量的方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验；计数资料采用百分率（%）表示，多组间比较采用χ2分析；P＜0.05代表差异存在统计学意义。

2 结果

2.1 两组受试者LRP1表达水平比较观察组受试者LRP1表达水平低于对照组［（4.10±0.63）μg/mL vs.（8.16 ± 1.12）μg/mL］，且两组间差异具有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 两组受试者LRP1表达水平比较Tab.1 Comparison of LDL receptor associated protein 1 expression level between two groups（n=30）±s

组别对照组观察组t值P值例数30 30低密度脂蛋白受体相关蛋白（μg/mL）8.16±0.112 4.10±0.063 17.305 0.001

2.2 两组受试者Caspase-3、Bax、bcl-2表达水平比较观察组受试者Caspase-3表达水平高于对照组（0.606±0.082 vs.0.238±0.039）、Bax表达水平高于对照组（0.558±0.073 vs.0.146±0.021）、bcl-2表达水平低于对照组（0.185±0.026 vs.0.540±0.070），且两组间差异具有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 两组受试者Caspase-3、Bax、bcl-2表达水平比较Tab.2 The expression levels of Caspase-3，Bax and bcl-2 in two groups were compared（n=30）±s

组别对照组观察组t值P值Caspase-3 0.238±0.039 0.606±0.082-12.198 0.000 Bax 0.146±0.021 0.558±0.073-9.708 0.001 bcl-2 0.540±0.070 0.185±0.026 16.039 0.000

2.3 两组胎盘植入产妇一般资料比较调查结果显示，两组受试者年龄、生育史、产次、流产史以及剖宫产史等临床资料均不存在显著差异（P＞0.05），故可排除上述因素对研究结果造成的影响，数据具有可比性，见表3。

表3 两组胎盘植入产妇一般资料比较Tab.3 Comparison of general data of two groups of placenta implantation women（n）

2.4 两组胎盘植入产妇Caspase-3、Bax、bcl-2表达水平比较高表达组受试者Caspase-3表达水平低于低表达组（0.525±0.068vs.0.761±0.092）、Bax表达水平低于低表达组（0.403±0.046vs.0.755±0.088）、bcl-2表达水平高于低表达组（0.268±0.049vs.0.132±0.028），且两组间差异具有统计学意义（P＜0.05）。见表4。

表4 两组胎盘植入产妇Caspase-3、Bax、bcl-2表达水平比较Tab.4 Comparison of expression levels of Caspase-3，Bax and Bcl-2 in two groups of placenta accreta ±s

组别低表达组高表达组t值P值例数17 13 Caspase-3 0.761±0.092 0.525±0.068 7.757＜0.05 Bax 0.755±0.088 0.403±0.046 14.516＜0.05 bcl-2 0.132±0.028 0.268±0.049-9.580＜0.05

2.5 两组胎盘植入产妇产后情况比较高表达组受试者产后出血率高于低表达组（30.77%vs.17.65%）、产后输血率高于低表达组（20.08%vs.11.76%）、子宫切除率高于低表达组（15.38%vs.0.00%），且两组间差异具有统计学意义（P＜0.05）。见表5。

表5 两组胎盘植入产妇产后情况比较Tab.5 Comparison of postpartum outcomes between two groups of placenta accreta例（%）

2.6 两组胎盘植入产妇娩出新生儿结局比较两组受试者娩出新生儿出生体重、Apgar评分、分娩孕周均不存在显著差异（P＞0.05）；高表达组受试者娩出新生儿病死率高于低表达组（15.40%vs.5.90%），且两组间差异具有统计学意义（P＜0.05）。见表6。

表6 两组胎盘植入产妇娩出新生儿结局比较Tab.6 Comparison of neonatal outcomes of two groups of placenta implanted mothers ±s

组别低表达组高表达组χ2（t）值P值例数17 13分娩孕周（周）36.26±2.68 36.43±2.74-0.171＞0.05出生体重（kg）2.86±0.57 2.89±0.55-0.145＞0.05 Apgar评分（分）1 min 8.90±1.36 8.92±1.44-0.039＞0.05 5 min 9.45±1.63 9.39±1.55 0.108＞0.05病死率［例（%）］1（5.90）2（15.40）-4.765＜0.05

3 讨论

LRP1属于低密度脂蛋白受体超家族成员之一，最初被发现是作为淀粉样蛋白Aβ以及ApoE内吞受体，随着研究的不断深入，发现其可作为活化的α2巨球蛋白、基质金属蛋白酶-9以及组织型纤溶酶原激活剂等多种配体的细胞信号受体［9-10］。LRP1激活剂可通过NPXY的酪氨酸磷酸化使得细胞信号通路被激活。此外，LRP1还能够与PDGF受体、结合素类以及uPAR等多种受体相互作用。总的来说，LRP1与细胞的信号通路、迁徙、代谢以及血脑屏障的完整性等多种生物过程相关［11］。研究人员通过破坏小鼠的LRP1基因发现，小鼠胚胎的着床以及继续发育受阻，分析原因是由于LRP1通过对纤溶酶原激活物抑制物1表达进行调节从而影响其着床，证同时也说明了LRP1的表达水平与胚胎着床密切相关［12-14］。另有研究发现，LRP1在胚胎着床位置侵入的合体滋养细胞、细胞滋养细胞以及体外培养的滋养层细胞中均有表达，提示在胚胎着床时滋养层细胞的侵袭过程中低密度脂蛋白受体相关蛋白扮演重要角色，而胚胎着床植入子宫内膜的前提即为囊胚滋养层细胞的正常增殖与黏附。有研究对移植患者妊娠组与未妊娠组胚胎培养液中LRP1的表达水平进行比较，发现妊娠组胚胎培养液中LRP1的表达量高于未妊娠组，提示LRP1的高表达量与胚胎形态学以及妊娠结局良好相关。由此可以推断，对LRP1的表达水平进行检测有利于预测产妇妊娠结局。

胎盘植入能够造成产妇发生严重产后出血、凝血障碍以及脏器受损等多种并发症、严重可造成死亡［15］。近年来我国胎盘植入发病率呈逐年攀升的趋势，也得到了越来越多产科医师的帮助。由于胎盘植入产妇主要为瘢痕子宫，手术过程中涉及大量输血、处理子宫与比邻器官以及并发症防治，为了改善胎盘植入产妇及其免除新生儿结局，需要探索有效的生物指标以进行早期诊断以及处理方案的制定。本研究采用ELISA法对胎盘植入产妇与健康对照产妇血清LRP1表达水平进行测定，发现胎盘植入产妇血清LRP1表达水平低于健康对照产妇，提示胎盘植入产妇存在LRP1表达水平下降。LI等［16］发现，脂蛋白受体相关蛋白敲除抑制了HTR-8/SvNo细胞的增殖、迁移、侵袭和管形成，以及诱导细胞凋亡，LRP敲除也显著降低MMPs、PLGF和VEGF的表达和Wnt/β-catenin信号通路的激活。LRP可能通过血管形成和滋养细胞浸润来积极调节母体动脉的重塑。该研究的结论与本研究可相互印证，即LRP是滋养层细胞存活和侵袭的关键，胚胎植入后母体螺旋动脉的重塑依赖于紧密调节的滋养细胞功能，是确保妊娠成功的关键。

为进一步分析LRP1与胎盘植入以及新生儿结局的相关性，本研究将30例胎盘植入患者分为LRP1低表达组与高表达组，通过分析发现，高表达组受试者Caspase-3、Bax表达水平低于高表达组，bcl-2表达水平高于低表达组，且产妇产后出血率、输血率、子宫切除率以及娩出新生儿病死率均高于低表达组，提示LRP1表达水平降低可上调Caspase-3与bax活性，进而下调Akt的磷酸化以及Bcl-2表达水平［17-18］。已有研究［19］指出，Caspase-3与Bax被激活后与细胞凋亡相关，而敲低LRP1后细胞二者表达水平会增加。本研究的新发现是，LRP1低表达的细胞Bcl-2表达水平降低，而Bcl-2的作用为阻止肿瘤坏死因子所诱导的细胞凋亡。这提示LRP1在促细胞生存与抗凋亡方面具有重要作用，该发现也是本研究的的新颖之处。

综上所述，胎盘植入患者LRP1表达水平降低，可能通过上调Caspase-3与bax活性，下调Bcl-2表达水平对产妇及新生儿结局造成不良影响。