高效液相色谱—柱后衍生荧光光谱法测定蔬菜和水果中6种N—甲基氨基甲酸酯类农药

魏良胜

摘要 采用高效液相色谱-柱后衍生荧光光谱法测定蔬菜和水果中涕灭威亚砜、涕灭威砜、3-羟基克百威、灭多威等6种N-甲基氨基甲酸酯类农药。样品经乙腈提取，以水和乙腈为流动相梯度洗脱。结果表明，6种农药的分离效果良好，在0.05～2.00 mg/L范围内线性关系良好，相关系数>0.995，变异系数RSD为2.3%～8.8%，加标回收率为77.1%～82.3%，此法可用于蔬菜和水果中氨基甲酸酯类农药残留检测。

关键词 高效液相色谱；柱后衍生；氨基甲酸酯农药；蔬菜；水果

中图分类号 O657.7+2；S481+.8 文獻标识码 A 文章编号 1007-5739（2018）14-0121-01

氨基甲酸酯类农药是20世纪50年代推广应用的有机合成杀虫剂，具有选择性强、高效、广谱、对人畜低毒、易分解和残留少的特点，常用于蔬菜和水果病虫害的防治，但氨基甲酸酯类农药具有致突变、致畸、致癌作用，因而建立一种简单快速的检测氨基甲酸酯类农药的检测方法尤为重要。目前，检测氨基甲酸酯类农药的方法主要有气相色谱法[1-2]、气质联用法[3]、液质联用法[4]及高效液相色谱-柱后衍生法[5]。由于氨基甲酸酯类农药热稳定性差，气相色谱法适用性不强；液质联用仪器价格及维护成本昂贵，对操作人员素质要求较高，限制了该法在基层实验室的使用；而液相色谱-柱后衍生法方法简单，方法灵敏度较高，应用较为普遍。本文研究了采用固相萃取柱净化样品，液相色谱-柱后衍生荧光法测定蔬果中6种N-甲基氨基甲酸酯类农药的分析方法。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

Alliance高效液相色谱超高效液相色谱仪配2475荧光检测器，美国WATERS公司生产；氮吹仪（Organomation N-EVAP-111）；Best-S30FV 纯水机；电子天平TD20001，余姚市金诺天平仪器有限公司生产；Multiquck3（匈牙利博朗）；IKA-T25均质器，艾卡（广州）仪器设备有限公司生产；IKA RV-8旋转蒸发仪，艾卡（广州）仪器设备有限公司生产；一次性注射器、0.22 μm水相滤膜、固相萃取柱，均由上海安谱实验科技股份有限公司生产。

甲醇、乙腈、二氯甲烷均为色谱纯，由默克股份有限公司生产；硼砂、氢氧化钠、巯基乙醇、氯化钠、无水硫酸钠、邻苯二甲醛均为分析纯，由国药集团化学试剂公司生产。

OPA衍生剂：称取19.1 g硼砂超声溶解后，定容至1 000 mL，过0.22 μm滤膜，置于棕色试剂瓶中。称取50 mg邻苯二甲醛溶于5 mL甲醇中（此过程注意避光），加至硼砂缓冲液中，再向缓冲溶液中加入100 μL巯基乙醇。混匀，临用时配制。

标准品：涕灭威亚砜、涕灭威砜、灭多威、3-羟基克百威、涕灭威、克百威6种标准品购于农业部环境质量监督检验测试中心，临用时用50%甲醇稀释至 1.00 μg/mL。

1.2 色谱条件

色谱柱：XBridgeRC8 4.6×150 mm，3.5 μm；保护柱：X-BridgeRC8 4.6×2 mm，3.5 μm；色谱柱温度35 ℃，衍生温度80 ℃，OPA流速0.30 mL/min，NaOH流速 0.30 mL/min，激发波长340 nm，发射波长455 μm，流动相为乙腈和水，梯度洗脱程序如表1所示。

1.3 样品前处理

取蔬菜可食部分粉碎后，称取25.00 g样品置于烧杯中，加入 50 mL乙腈，匀浆1 min，过滤至已加入约7 g NaCl的具塞量筒中，振摇1 min，静置30 min，待水相和乙腈相完全分离，吸取上层乙腈相5.00 mL，氮吹至近干，用1 mL甲醇-二氯甲烷（1∶99）溶解，过固相萃取柱，固相萃取柱上端加入适量无水硫酸钠，并用4 mL甲醇-二氯甲烷（1∶99）活化后，上样，用4 mL甲醇-二氯甲烷（1∶99）分2次洗脱，收集洗脱液，氮吹至近干，加入1 mL 50%甲醇溶解残渣，混匀，过0.22 μm滤膜，上机测定。

2 结果与讨论

2.1 氮吹

氨基甲酸酯类农药遇热易分解，样品前处理过程中2次氮吹温度不能太高，且注意不能完全吹干，否则会导致农药检测结果偏低。

2.2 固相萃取柱的选择

一般样品选用氨基柱净化，色素含量高的样品对检测结果有一定干扰，应选用CARE/NH2固相萃取柱净化，进一步去除色素。

2.3 线性范围、相关系数及检出限

应用本文建立的色谱方法，配制6种N-甲基氨基甲酸酯类农药的系列标准混合溶液，上机测定，其中浓度为1.00 mg/L的标样色谱图见图1，以质量浓度（mg/L）为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，得到相应的线性回归方程，同时以三倍信噪比考察了6种农药的检出限，具体结果见表2。

2.4 样品测定、回收率及精密度试验

应用本文建立的方法测定了香菇菜、卷心菜、苹果、西瓜中6种N-氨基甲酸酯类农药残留情况，4个样品均未检出6种N-氨基甲酸酯类农药，选用卷心菜样品进行加标回收试验，卷心菜样品和样品加标色谱图见图2、3，6种农药的加标回收率在77.1%～82.3%之间，重复6次测定的相对标准偏差为2.3%～8.8%，可以满足农药残留测定的要求。

3 结论

本文采用高效液相色谱-柱后衍生荧光光谱法同时测定蔬菜、水果中6种N-甲氨基甲酸酯类农药，目标物用C8柱分离，效果良好，样品采用固相萃取柱净化，除杂效率高，目标物回收率理想，检测灵敏度可以满足常规检测的需求，蔬果中其他N-氨基甲酸酯类农药检测可参考本方法。

4 参考文献

[1] 张蕴，吴香伦，汪尤刚，等.磁分散固相萃取-气相色谱法测定水中8 种氨基甲酸酯类农药[J].中国卫生检验杂志，2016，26（11）：1521-1528.

[2] 江虹.气相色谱法测定果蔬中6种氨基甲酸酯类农药残留[J].海峡预防医学杂志，2015，21（6）：66-67.

[3] 马杰，李青，白梅，等.QuChERS前处理与在线凝胶渗透色谱-气相色谱质谱联用法测定蔬菜水果中20种农药残留[J].食品安全质量检测学报，2016，7（1）：20-26.

[4] 丁葵英，徐文娟，孙军，等.液相色谱-高分辨质谱法快速筛查蔬菜中20种氨基甲酸酯类农药[J].食品研究与开发，2015，36（17）：123-128.

[5] 吕平，杜国冬，韦丽君，等.高效液相色谱-柱后衍生法测定东盟水果中氨基甲酸酯类农药残留[J].分析科学学报，2015，31（4）：589-592.