匹多莫德对免疫功能缺陷小鼠脾组织TNF-α和IL-4表达的影响

张 方，王小燕，胡晓艺

(西部战区空军医院，四川 成都 610021)

[作者简介] 张方，女，主管药师，从事医院药学工作。

正常人体的免疫功能处于平衡状态，机体免疫力降低会对身心健康产生不利影响。免疫促进剂则是一种用于提高机体免疫力，辅佐疾病治疗的药物。匹多莫德属于临床一种全新合成的胸腺二肽类免疫促进剂，其可促进机体免疫功能提高，辅助治疗病毒、细菌感染等疾病效果较好[1-3]。本研究通过观察匹多莫德干预后免疫功能缺陷小鼠脾组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与白细胞介素-4(IL-4)表达情况，进一步探讨了匹多莫德治疗免疫功能缺陷疾病的机制，现将结果报道如下。

1 实验资料

1.1动物 清洁级雄性昆明种小鼠45只，体质量21～38 g，由解放军第452医院实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK(京)2002-0001。实验动物饲养在SPF环境中，饮用水及饲料均符合国家有关SPF动物标准。

1.2药品、试剂与仪器 匹多莫德(深圳卓越生物科技有限公司)，环孢菌素A(上海联硕生物科技有限公司),生理盐水(四川科伦药业股份有限公司)，10%中性福尔马林液(南昌雨露实验器材有限公司)，免疫组织化学相关试剂盒(上海哈灵生物科技有限公司)，免疫组织化学方法相关设备及技术均由解放军第452医院病理科提供。

1.3实验方法 将45只小鼠随机分为正常组、模型组、匹多莫德组，每组15只。模型组、匹多莫德组均参照文献[4-5]的方法，给予环孢菌素A 30 mg/(kg·d)腹腔注射造模，正常组则腹腔注射生理盐水，均隔日1次，共注射3次。造模后，匹多莫德组每日尾静脉注射匹多莫德10 mL/kg，正常组、模型组给予注射生理盐水，共注射11 d。

1.4观察指标 分别于造模后的第1，6，11天，每组随机处死5只小鼠，取小鼠脾组织，采用10%的中性福尔马林液进行保存。采用免疫组织化学法检测小鼠脾组织中TNF-α与IL-4表达情况，经计算机图像处理软件进行分析，运用灰度值表示TNF-α与IL-4的活性。

2 结 果

2.1各组脾组织中TNF-α表达情况比较 镜下发现TNF-α蛋白主要表达于细胞膜上，细胞质内亦有少量表达，造模后的第11天，模型组细胞膜上有大量TNF-α蛋白表达，匹多莫德组表达明显少于模型组，见图1。造模后的第1，6，11天，匹多莫德组和模型组脾组织中TNF-α灰度值均明显高于正常组(P均<0.05)，但匹多莫德组明显低于模型组(P均<0.05)，见表1。

图1 造模后第11天各组小鼠脾组织中TNF-α蛋白表达染色表现(×400)

组别n造模后第1天造模后第6天造模后第11天FP正常组572.43±1.36①73.02±1.71①73.15±1.64①426.920.00模型组586.25±1.8492.48±2.06105.94±2.17446.540.00匹多莫德组580.05±1.72①②78.36±2.14①②75.67±3.03①②501.840.00F178.33248.16277.75P0.000.000.00

注：①与模型组比较，P<0.05；②与正常组比较，P<0.05。

2.2各组脾组织中IL-4表达情况比较 镜下发现IL-4蛋白主要表达于细胞膜上，造模后的第11天，模型组细胞膜上有大量IL-4蛋白表达，匹多莫德组表达明显少于模型组，见图2。造模后的第1，6，11天，造模后的第1，6，11天，匹多莫德组和模型组脾组织中IL-4灰度值均明显高于正常组(P均<0.05)，但匹多莫德组明显低于模型组(P均<0.05)，见表2。

3 讨 论

环孢菌素A可以对机体中的T细胞表面结构及其识别功能产生直接影响，阻碍T细胞发生活化，故环孢菌素A广泛用于细胞免疫缺陷型动物模型的构建[4-5]。本研究对小鼠经腹腔注射30 mg/(kg·d)的环孢菌素A，成功构建了免疫缺陷型小鼠模型。

表2 各组小鼠脾组织中IL-4表达灰度值比较

注：①与模型组比较，P<0.05；②与正常组比较，P<0.05。

图2 造模后第11天各组小鼠脾组织中IL-4蛋白表达染色表现(×400)

相关资料显示，脾脏内含有丰富的淋巴细胞及巨噬细胞，与机体的体液免疫密切相关[6-7]。巨噬细胞是吞噬细胞的一种，吞噬细胞为一种消化异物能力比较强的细胞，可防御机体不受到外界外源性异物等的侵袭。TNF-α及IL-4属于吞噬细胞发生活化之后所释放出来的细胞因子,在机体炎症反应中扮演着很重要的角色[8-10]。故检测脾组织中TNF-α和IL-4的表达情况可反映机体的免疫功能情况。

匹多莫德为一种人工合成的二肽类免疫调节剂，临床上多被用于呼吸道感染、局部或全身免疫功能低下患者的治疗[11]。动物研究显示，匹多莫德可以提高正常和免疫功能低下小鼠的胸腺指数、脾脏指数和腹腔巨噬细胞吞噬中性红的能力[12]。谢荣华[13]报道，匹多莫德能辅助GRA1蛋白刺激宿主产生较高的细胞免疫和体液免疫，具有增强免疫应答和提高GRA1蛋白抗原的免疫原性作用。Liu等[14]研究发现，匹多莫德注射剂能够强化机体T、B细胞功能，以改善机体特异性免疫反应。临床应用发现，匹多莫德可提高反复呼吸道感染患者的免疫功能，且不良反应少，不存在致畸及生殖毒性，使用后体内不存在蓄积[15-16]。

本实验结果显示，模型组细胞膜上有大量TNF-α和IL-4蛋白表达，匹多莫德组表达明显少于模型组；造模后的第1，6，11天，匹多莫德组和模型组脾组织中TNF-α和IL-4灰度值均明显高于正常组，但匹多莫德组TNF-α和IL-4灰度值均明显低于模型组。提示匹多莫德能够抑制脾组织中TNF-α和IL-4的表达，从而减轻由炎性递质大量释放所诱发的免疫功能缺陷导致的病理损伤，推断匹多莫德可能是通过调节免疫功能以改善免疫功能缺陷的症状。