HPLC法同步测定洋金花中东莨菪碱和莨菪碱的含量

2018-10-23李红红陈朋朋付传香吴泽宇惠爱玲张文成

安徽化工 2018年5期

李红红，陈朋朋，付传香，吴泽宇，惠爱玲，许坤，张文成

（1.合肥工业大学食品科学与工程学院，农产品生物化工教育部工程研究中心，安徽合肥230009；2.安徽德信佳生物医药有限公司，安徽阜阳236000）

洋金花为茄科植物白曼陀罗（Datura meteI L.）或毛曼陀罗（D.innoxia MiII）的干燥花，具有平喘止咳、镇痛、解痉等功效[1]，其有效成分主要有东莨菪碱、莨菪碱、山莨菪碱及少量的樟柳碱。现代医学证明，东莨菪碱及莨菪碱具有较高的药用价值[2]，测定东莨菪碱和莨菪碱的含量对更好地控制药材质量、确保临床疗效等具有重要意义。

目前的测定方法主要有高效液相色谱法[3-5]、薄层色谱法[6]、气相色谱法[7]、毛细管电泳法[8]、离子对色谱法[9]等。液相色谱法以其较高的灵敏度和选择性而被广泛使用。周军等[3]对华山参滴丸中生物碱的测定采用乙腈－甲醇－磷酸氢二钠缓冲液（15∶4∶81）为流动相，磷酸氢二钠缓冲液（含30 mmol·L-1磷酸氢二钠、0.08%三乙胺，用磷酸调pH至6.0），结果显示，样品色谱中东莨菪碱、阿托品色谱峰与杂质峰分离较好，但流动相过于复杂。康辉等[6]的研究中，采用甲醇-磷酸水体系，虽然山莨菪碱的分离效果较好，但对于东莨菪碱的分离较差，而且阿托品峰严重拖尾。本研究采用HPLC法同时测定洋金花中东莨菪碱和莨菪碱的含量，为洋金花质量控制及利用提供依据。

1 仪器与材料

1260型高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；ML-800型中药粉碎机；SC2201型超声波处理器；RE52CS-1型旋转蒸发仪。

东莨菪碱标品、莨菪碱标品（纯度≥98%，上海源叶生物科技有限公司）；洋金花（安徽德信佳生物医药有限公司）；除乙腈为色谱纯外，其余试剂均为分析纯，水为纯净水。

2 实验方法

2.1 色谱条件

色谱柱：SGE protecol C18 （5μm，4.6 mm×250 mm），流动相为乙腈-30 mmol/L醋酸铵溶液（含0.02%三乙胺、0.3%四氢呋喃，冰醋酸调pH至6.0）（10∶90，V/V），检测波长为216 nm，流速 1.0 mL/min，柱温 30℃，进样量20μL。

图1 东莨菪碱和莨菪碱标品色谱图

在上述色谱条件下，东莨菪碱和莨菪碱的标准品色谱图如图1所示，东莨菪碱的色谱峰保留时间为21.846 min，莨菪碱的色谱峰保留时间为33.273 min，东莨菪碱的拖尾因子T=0.659，莨菪碱的拖尾因子T=0.989，两者峰型良好，分离效果也较好，符合液相色谱分析的要求。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取标准品东莨菪碱9.1 mg和莨菪碱12.1 mg，用流动相定容于10 mL容量瓶中，配制成含有0.91 mg/mL东莨菪碱和1.21 mg/mL莨菪碱的混合对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

取干燥的洋金花粉末1 g，加氨水润湿，然后按1∶10比例加入二氯甲烷进行超声波提取（功率180 W），提取时间为30 min，过滤得提取液，减压回收二氯甲烷，用流动相复溶，过0.45μm滤膜，即得供试品溶液。

2.4 方法学考查

2.4.1 标准曲线的制备

以2.2项下混合对照品溶液为母液，梯度稀释后，得到东莨菪碱浓度分别为 910、455、227.5、113.75和56.875 μg/mL，莨菪碱浓度分别为 1210、605、302.5、151.25和75.625μg/mL的混合对照品溶液。

依照2.1项下色谱条件依次进样，以峰面积值Y为纵坐标，以各有效成分的浓度值X为横坐标，绘制标准曲线，得：东莨菪碱的线性回归方程为：Y=9.4904X-145.83，R=0.9998；莨菪碱的线性回归方程为：Y=12.407X-298.09，R=0.9998。

2.4.2 精密度试验

精密吸取2.4.1项下东莨菪碱为227.5μg/mL、莨菪碱为302.5μg/mL的对照品溶液，按照2.1项下色谱条件进行检测，连续进样6次，每次进样20μL。

2.4.3 稳定性试验

取2.3中供试品溶液，分别在室温下放置0、2、4、8、16、24 h后，按照2.1项下色谱条件进行检测，每次进样20μL。

2.4.4 重复性试验

取5份干燥的洋金花粉末各1.0 g，按2.3制备供试品溶液，分别进样，按照2.1项下色谱条件进行检测，每次进样20μL。

2.4.5 加样回收试验

取6份干燥的洋金花粉末各1.0 g，按2.3制备供试品溶液，测定每份中东莨菪碱及莨菪碱的含量，然后在各样品中分别加入一定量的东莨菪碱和莨菪碱标品，按照2.1项下色谱条件进行检测，每次进样20μL。

2.5 样品的测定

精密吸取2.3项下供试品溶液20μL，注入液相色谱仪，按照2.1项下色谱条件进样测定，记录峰面积，计算含量。

3 结果与讨论

3.1 精密度、稳定性、重复性、加样回收实验结果

精密度试验中东莨菪碱峰面积的RSD=0.35%，莨菪碱峰面积的RSD=0.51%，精密度良好；稳定性试验中东莨菪碱峰面积的RSD=1.56%，莨菪碱峰面积的RSD=1.83%，表明供试品溶液在24 h稳定；重复性实验中氢溴酸东莨菪碱峰面积的RSD=1.77%，莨菪碱峰面积的RSD=1.81%，重复性良好。加样回收实验结果见表1。