荧光素钠水溶液浓度荧光光度法研究

夏春苗

摘要：本文探讨了荧光素钠水溶液浓度的荧光光度法分析，根据不同浓度的荧光素钠水溶液荧光强度的差别绘制浓度标准曲线，用以未知浓度样品的分析，该方法操作简单，测试结果准确。

关键词：荧光素钠水溶液；荧光强度；含量曲线

前言

荧光素钠是一种红棕色的荧光染料，英文名为Fluorescein sodium，中文别名水合荧光胺二钠盐，CAS号我518-47-8，分子式为C20H12Na2O5，易溶于水及乙醇，带有强的黄绿色荧光。

分子结构：由于具有易溶于水的黄绿色荧光，所以常被配成注射液用于医学诊断性眼底和虹膜血管的血管造影检查和引导肿瘤切除，也可做成示踪剂用于地质钻井液研究等。荧光素钠水溶液使用过程中，如何快速准确地检测其浓度就是一个迫切需要解决的问题。由于荧光分光光度法具有相对较高的灵敏性和检测下限，故本文探讨了荧光光度法分析荧光素钠水溶液浓度的方法。

1 实验部分

1.1 实验目的

检测未知的荧光素钠水溶液浓度

实验原理

荧光素钠水溶液在紫外光激发下发射出黄绿色荧光，荧光强度随水溶液的浓度变化而变化，故可以通过荧光光度计检测未知样品的荧光强度，根据荧光强度推算未知样品中荧光素钠的浓度。

1.3主要仪器与试剂

主要仪器：Hitachi F-7000 荧光光度计，万分之一分析天平，

250ml容量瓶10个，药匙，移液管等

主要试剂：纯净水，荧光素钠标准品，未知样品

1.4 实验步骤

1.配制样品

称取荧光素钠标准品0.20g准确至0.001g，放入100ml容量瓶中，用纯净水定容至刻度。摇匀溶解，得试样A。

用移液管吸取试样A 1ml，于100ml容量瓶，用纯净水稀释至刻度，摇匀，得试样B。

分别用移液管吸取试样B 1ml、2ml、4ml、8ml、12ml、16ml和20ml至100ml容量瓶中，用纯净水释至刻度，摇匀，得试样，浓度分别为20μg/ml、40μg/ml、80μg/ml、160μg/ml、320μg/ml、400μg/ml。

2.荧光发射光谱

用荧光光度计分别测试样C1、C2、C3、C4、C5、C6和C7的发射光谱，测试条件：激发波长：490nm，检测范围380-720nm，扫描速度：240nm/min，发射光谱谱如图1所示：

由图1可以看出，荧光素钠在480-600nm有明显荧光，其中最大发射波长是513nm。

3.绘制标准曲线

试样C1、C2、C3、C4、C5、C6和C7的浓度和最大发射波长513nm处的荧光强度如表1所示：

用荧光强度对标准溶液浓度绘制标准曲线，如下：

由上图可知，荧光素钠水溶液在20-400μg/ml的浓度下与荧光强度成很好的线性关系，线性回归方程為：y=10.066x-109.52，R2=0.9988，其中 x为样品浓度（μg/ml），y为样品的荧光强度。

4.未知样品测定

将未知样品稀释至一定浓度后按上述方法测试其荧光强度（荧光强度范围：150-4000），按上述的线性回归方程y=10.066x-109.52即可计算出未知样品中荧光素钠的浓度。

5.结语

本文利用荧光素钠水溶液在紫外光激发下发射出黄绿色荧光的特性，采用荧光光度计，绘制样品浓度与荧光强度的标准曲线y=10.066x-109.52，根据标准曲线即可快速准确地计算出未知样品的浓度。由于不同的荧光光度计等分析仪器测试的荧光强度略有偏差，在使用荧光光度法分析荧光素钠水溶液浓度时，标准曲线标需重新标定。

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