依托咪酯对神经胶质细胞IL-1β的影响

张月顺 周 旋 芦相玉 夏洪莲 李 颖 南锡浩

依托咪酯为现阶段我国临床上应用较为广泛的一种全身麻醉诱导用药。近年来, 有研究发现该药物对神经元缺氧损伤具有保护作用［1］。为明确该药物的神经元保护机制, 本研究探讨依托咪酯对神经胶质细胞IL-1β的影响, 现报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料 细胞株：小鼠神经胶质细胞株(购自背景元唐盛兴科技有限公司)。主要仪器及试剂：酶标仪(购自上海纪宁生物科技有限公司)、6孔培养板(购自上海晶安生物科技有限公司)、DMEM高糖培养基(购自上海源叶生物科技有限公司)、胎牛血清(购自杭州四季青生物工程材料有限公司)、酶联免疫吸附试验试剂盒(购自上海纪宁生物科技有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养 使用含有10%胎牛血清的DMEM高糖培养基培养小鼠神经胶质细胞, 培养条件, 温度37℃、二氧化碳5%。

1.2.2 试验研究 细胞培养48 h后, 取对数生长期的细胞以每孔2×105的密度接种在6孔培养板中, 共接种在3张培养板中。每张培养板中均留1个孔作为空白对照, 分别向培养板中其他5个孔中加入0.3、0.6、1.2、2.4、4.8 mg/L共5个浓度的依托咪酯(江苏恒瑞医药股份有限公司, 国药准字H32022379, 规格：10 ml∶20 mg), 继续培养24 h后进行神经胶质细胞IL-1β检测。

1.2.3 神经胶质细胞IL-1β检测及神经胶质细胞神经元存活率计算 应用酶联免疫吸附法检测各张培养板中各培养孔中神经胶质细胞IL-1β的表达水平。检测操作严格按照试剂盒使用说明书进行, 在酶标仪波长570 nm处读取吸光度OD值。神经元存活率(%)=试验组OD值÷空白对照组OD值×100.00%。

1.3 统计学方法 采用SPSS22.0统计学软件进行数据分析。计量资料以均数±标准差(s)表示, 采用t检验。P＜0.05表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 不同浓度依托咪酯环境下神经胶质细胞IL-1β的表达水平比较 3张培养板中, 依托咪酯浓度为4.8 mg/L时, 神经胶质细胞IL-1β的表达水平明显低于其他浓度以及空白对照的表达水平, 差异均具有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

2.2 不同浓度依托咪酯环境下神经胶质细胞神经元的存活率比较 3张培养板中, 依托咪酯浓度为4.8 mg/L时, 神经胶质细胞神经元存活率, 明显高于其他浓度以及空白对照的存活率, 差异均具有统计学意义(P＜0.05)。见表2。

表1 不同浓度依托咪酯环境下神经胶质细胞IL-1β的表达水平比较(s, pg/ml)

表1 不同浓度依托咪酯环境下神经胶质细胞IL-1β的表达水平比较(s, pg/ml)

注：与依托咪酯浓度4.8 mg/L比较, aP＜0.05

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表2 不同浓度依托咪酯环境下神经胶质细胞神经元的存活率比较(s, %)

表2 不同浓度依托咪酯环境下神经胶质细胞神经元的存活率比较(s, %)

注：与依托咪酯浓度4.8 mg/L比较, aP＜0.05

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3 讨论

IL-1β是IL-1存在形式的一种, 为人体正常细胞在应答感染时所产生的炎性细胞因子, 其表达水平升高往往表示正常的细胞功能遭到破坏, 机体出现病理反应［2］。神经胶质细胞是广泛分布于神经元以外的细胞, 具有滋养和支持神经元的作用［3-7］。神经胶质细胞中IL-1β的表达水平变化能够反映中枢神经系统损伤情况［8］。近年来, 有国内研究学者发现, 静脉麻醉药物依托咪酯对神经元损伤具有保护作用,但也有研究学者持反对观点［9］。

基于上述研究现状, 本研究分析依托咪酯对神经胶质细胞IL-1β的影响。结果显示, 随着依托咪酯浓度的升高, 神经胶质细胞IL-1β的表达水平降低, 神经元存活率升高, 表明依托咪酯对神经胶质细胞IL-1β表达能够产生抑制作用,保护神经元不受破坏。分析得到上述结果的原因可能为：依托咪酯能够增强由γ-氨基J酸(GABA)介导的抑制性突触传递, 直接激活GABA受体。激活GABA受体的过程中, 可能会导致细胞膜上的氯离子通透性增加, 细胞电位失衡, 使细胞处于超极化的状态［10］。这一状态下具有电压依赖性的的N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体通道和电压依赖性钙离子通道的开启受到抑制, 从而减少钙离子内流, 抑制IL-1β表达, 发挥神经元保护作用。

综上所述, 依托咪酯对小鼠神经胶质细胞神经元具有保护作用, 用药剂量越大, 保护作用越显著。但由于近年来国内开展的相关课题研究较少, 本研究的试验过程可能受到混杂因素的影响, 故关于依托咪酯对神经胶质细胞IL-1β的具体影响机制, 仍需进行深入研究。