hMAM RNA 和CEA RNA在乳腺癌外周血微转移中表达

钱朋飞 黎冠宏 孙宇 邹燕鹏 张树平

乳腺癌是属于肿瘤科中最为常见一类肿瘤疾病, 严重危害到现代患者生命状况, 其疾病发病率并处于逐年上升阶段,而临床上肿瘤转移主要途径之一为外周血必经途径［1］。但是现临床上仍然不清楚乳腺癌疾病临床发病原因、发展以及转移具体机制, 但是如果能在疾病早期找到相关指标, 对于其临床治疗、延长生存率具有重要临床意义。临床上早期进行检测, 有利于其临床治疗以及预后相应判断。本文就对于其外周血中乳腺组织特异性基因hMAM RNA以及CEA RNA表达情况进行探究, 并为其疾病治疗提供依据, 具体如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2016年4月～2017年5月收入80例乳腺癌患者作为本次观察组, 所有乳腺癌患者未实施手术治疗；经过本院专业医师确诊为原发乳腺癌；本次试验经过本院伦理委员会批准；本次试验收入对象均为女性。年龄36～70 岁 , 平均年龄 (45.4±8.2)岁 , 其中浸润性导管癌 67 例 ,单纯癌8例, 黏液癌4例, 乳头派杰病1例。

1.2 方法

1.2.1 试剂盒引物设计 本次试验使用逆转录PCR(RT-PCR)技术进行检测, 本次试验使用试剂盒(Promega公司生产), 淋巴细胞分离液(上海恒信化学试剂有限公司生产),DNA标志(Sangon公司生产), 溴化乙锭(EB)、琼脂糖(华美公司生产)。本次hMAM RNA 和CEA RNA引物按照标准进行设计处理(GIBICO公司合成)。

1.2.2 总RNA提取 抽取患者外周血5 ml, 并做好乙二胺四乙酸(EDTA)抗凝, 整个操作过程按照无菌原则进行, 防止出现污染情况发生。使用淋巴细胞分离液, 并且其密度梯度按照离心法进行提取, 并提取单个核细胞层, 整个操作过程按照试剂盒相应说明术进行。使用RT-PCR整个检测过程中应当按照试剂盒相应说明书进行。其中具体反应条件为：反转录为 48℃ , 共计 45 min, 反转录酶变性为 94℃ , 2 min。并以 35 次循环扩增 , 其中 hMAM RNA 检测条件为 95℃ , 30 s变性处理 , 55℃ , 30 s延伸。CEA RNA 反应条件为 ：退火温度 69℃ , 其他条件如上 , 末次延伸 72℃ , 10 min。

1.2.3 PCR产物分析 并取扩增反应液hMAM RNA以及植物胆色素原脱氨酶 (PBGD)各 5 μl, 并予以上样缓冲液 1 μl混匀 , 并取扩增反应液 CEA RNA 以及 PBGD 各 5 μl, 并予以上样缓冲液1 μl混匀, 并以DNA标志作为分子量标志, 2%琼脂糖凝胶电泳 , 条件为 80 mA, 15～20 min, EB 进行染色 , 紫外检测仪下进行观察。

1.3 观察指标 对不同肿瘤大小、TNM分期以及有无淋巴结转移患者外周血中hMAM RNA 和CEA RNA表达情况进行比较。

1.4 统计学方法 采用SPSS18.0统计学软件处理数据。计数资料以率(%)表示, 采用χ2检验；多组等级资料采用秩和检验。P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

乳腺癌患者不同肿瘤大小、TNM分期以及有无淋巴结转移之间外周血中hMAM RNA及CEA RNA表达阳性情况比较差异具有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

表1 80例乳腺癌患者外周血中hMAM RNA及CEA RNA检测结果与临床病理学特征关系［n(%)］

3 讨论

临床上早期检测乳腺癌患者微转移情况, 对于后期治疗、疾病复发起着重要临床意义。随着我国生物技术不断发展, 其相应检测技术不断完善, RT-PCT是属于临床上重要检测技术, 现已经是属于外周血微转移重要方式之一［2］。

hMAM是属于近年才分离一类新型乳腺组织特异性蛋白水平, 其主要为①为仅限于成年人乳腺组织、乳腺癌细胞株。②在乳腺癌原发灶中其水平表达高于正常乳腺组织。而CEA则是主要表达于胚胎性肿瘤、肺、胃以及乳腺癌组织。CEA主要于大多数导管侵润性乳腺癌组织中呈现阳性, 并且其原位癌以及小叶癌主要阳性率仅为30%, 对于其肿瘤转移起着重要临床意义［3-5］, 其是属于上皮组织中最为标志特异性标志基因, 为外周血中转移提供可能性。

本文研究表明, 乳腺癌患者不同肿瘤大小、TNM分期以及有无淋巴结转移之间外周血中hMAM RNA及CEA RNA表达阳性情况比较差异具有统计学意义(P＜0.05)。在检测肿瘤患者静脉血时, 对于其肿瘤细胞分型诊断起着重要临床意义。如患者一旦在外周血中检测出hMAM RNA以及CEA RNA,说明在患者外周血中已经存在其微小转移情况发生。乳腺癌是属于现在临床上常见一类全身系统性疾病, 即使是早期乳腺癌, 同样也会存在早期隐匿性转移。如果在患者亚临床阶段中检测到微小转移灶, 对于疾病分期、治疗以及预后会产生重要临床意义［6-8］。

综上所述, 在乳腺癌患者疾病诊断之中, hMAM RNA以及CEA RNA能够作为临床上能够有效反映转移灶微转移敏感指标, 对于临床上疾病分期起着重要临床意义。可以作为肿瘤侵润转移指导, 可以作为后期治疗以及预后重要参考指标。