无锡地区CIN患者HPV基因型分布特点初步分析

盛小花

(无锡市中医医院检验科，江苏 无锡 214100)

0 引言

人乳头状瘤病毒（HPV）是一种已被证明在子宫颈形成增生性病变的病毒，类似于皮肤鳞状上皮内湿疣或粘膜组织的乳头状瘤，是宫颈癌最重要的致病因素[1]。大约180种的人乳头状瘤病毒基因型已被确定，其中超过40种属于感染粘膜或皮肤的α属的基因型，该属中有15种属于高危型基因 型， 包 括 HPV16，18，31，33，35，39，45，51，52，56，58，59 和 82，68，73[2]。HPV 基 因分型联合宫颈细胞学检查，能更及时地发现高危宫颈病变，无创性且漏诊率低[3].

本部分临床研究通过分析无锡妇女CIN患者HPV基因型分布特点，探讨HPV分型与CIN的相关性，有助于子宫颈癌前病变的早期发现、早期诊断及早期治疗，降低宫颈癌发病率和死亡率。

1 一般资料及方法

1.1 研究对象

2014年1月至2018年6月在江苏省无锡市中医医院门诊宫颈癌筛查妇女269例，年龄21～65岁(32.5±11.8岁)，其中20-30岁30例、31-40岁112例、41-50岁96例、大于50岁31例。进行妇科检查、宫颈细胞学、HPV基因分型检查，宫颈细胞学结果可疑或异常者再进一步行宫颈组织病理学诊断,均取得患者知情同意。

1.2 CIN分级方法

细胞改变程度和异型细胞范围可将CIN分为三级。

1.3 HPV基因分型

HPV基 因 型 高 危 型：HPV16，18，31，33，35，39，45，51，53，56，58，59，66，68，73，82，83； HPV基因型低危型：HPV6，11，42，43，81。

1.4 仪器和试剂

ThinPrep新柏氏全自动超薄液基细胞检测系统（美国Hologic豪洛捷公司），SLAN基因扩增仪,分子杂交炉(YN-H16)，深圳亚能生物科技有限公司人乳头瘤病毒基因分型（23型）检测试剂盒(PCR-反向点杂交法)。

1.5 实验方法

1.5.1 TCT标本采集

采集宫颈脱落细胞立即放入迪艾细胞保存液，充分漂洗。采用2001年国际癌症协会妇科细胞病理学所用的The Bethesda System(TBS)诊断方法进行检测。

1.5.2 HPV标本采集方法

取宫颈脱落细胞将宫颈刷浸入细胞保存液中，采集的标本4℃冰箱保存，1周内检测。

1.5.3 HPV基因分型检测方法

采用PCR-反向点杂交法。

1.5.4 统计学处理

采用SPSS 11.5软件，实验数据以均数±标准差表示，组间差异采用单因素方差分析，计数资料采用卡方检验(P＜0.05)显示具有统计学意义。

2 结果

2.1 不同年龄组CIN患者HPV基因分型分布情况

共有269例接受宫颈细胞学联合HPV基因型检查的妇女，按每10岁1个年龄段分组，由于50岁以上人数偏少，故将此年龄段合并为大于50岁组。结果显示：31-40岁组HR-HPV构成比高于其他各年龄组，但各年龄组HR-HPV构成百分数比较，差异均无统计学意义( P＞0.05) 见表1。

表1 不同年龄组CIN患者HPV基因型分布构成比

但是CIN患者HPV16患病构成比有显著性，发现大于50岁患者，HPV16构成比为8.3%（表2），其分别与31-40岁组及41-50岁组比较，构成比显著下降，差异具有显著性(P＜0.05)，30-50岁是HPV16感染的高峰期。

表2 不同年龄组CIN患者HPV16基因型分布构成比

2.2 按CIN不同分级分析HPV基因分型分布

在本次调查中宫颈正常组HR-HPV构成比为16.7%，而有宫颈病变(CINⅠ及以上病变)组HR-HPV构成比为77.0%，其中CINⅠ、CINⅡ与CINⅢ组宫颈HR-HPV感染率分别为80.8%、73.2%和77.1%，宫颈正常组与CIN各组HR-HPV感染率差异有统计学意义(P＜0.005)。HR-HPV感染与CIN患者显著相关，优势比为16.69，HR-HPV感染是CIN患者一个重要的危险因素。

在本次调查中，在CINⅡ与CINⅢ组宫颈HPV16型感染率分别为51.7%和42.9%，CINⅠ病变与CINⅡ与CINⅢ组的各组间HPV16基因型感染率比较，差异具有统计学意义。HPV16基因型感染与CINⅡ及以上病变显著相关。

4 讨论

子宫颈上皮内瘤变（CINⅠ、CINⅡ、CINⅢ）是子宫颈鳞状细胞癌和腺癌的直接癌前病变[4]。Wright等报道HPV在诊断CINⅢ+病变的灵敏度为84%[5]。我们通过临床资料统计发现在所收集的宫颈炎患者资料中CINⅡ和Ⅲ患病率从50岁以上年龄段开始增加，表明随着年龄的增长，CIN病程越长，宫颈癌的发病率也会增加。CIN的清除取决于妇女的年龄，随年龄增长CIN清除率降低。妇女的年龄和癌前病变的持续时间，增加癌变的风险[6-7]。江苏无锡地区HPV感染在CIN患者中比正常宫颈组织高，以高危基因型感染者为主，在所有CIN HPV感染患者中HPV16,HPV52，HPV18，HPV33均有检出率,说明HR-HPV感染是CIN患者一个重要的危险因素。夏巧凡等采用核酸分子快速导流杂交基因芯片技术(凯普公司)对皖南地区妇女HPV感染状况研究中发现，常见HR-HPV基因型构成由高到低分别HPV16,HPV52,HPV18，HPV33，此结果与我们研究结果相一致[8]，与王洪珍等有关江苏镇江妇女宫颈病变HR-HPV感染常见基因型相同[9]。蔡静芬等有关无锡HPV流行情况的调查认为HPV52，HPV16,HPV58,HPV68，HPV18基因型常见[10]，相关研究认为，在亚洲国家宫颈癌和宫颈上皮内瘤变妇女HPV感染率达93.8%-97%，其中以HPV16,HPV18,HPV52等高危型为主[11]。而在我们本次研究中也证实，HPV16基因型感染与CINⅡ及以上病变显著相关，HPV-16感染和CIN病变进展率与妇女的年龄和感染的持续时间相关。