HPLC法测定益气活血通络颗粒中葛根素的含量

冯穗芬

【摘 要】 目的： 建立益气活血通络颗粒中葛根素的含量测定方法。方法： 色谱柱：Eclipse XDB-C18（250mm×4.6mm，5μm）；流动相为甲醇-水（25∶75）；检测波长：250nm；流速：1.0mL/min；柱温：25℃；进样量：10μL。结果：葛根素进样量在0.1210～1.2096μg范围内与峰面积呈良好的线性关系（r=0.9999） ，平均加样回收率为101.24%，RSD为1.34%。结论： 该法简单方便，精密度高，准确可靠，可用于该制剂的质量控制。

【关键词】 益气活血通络颗粒；葛根素；含量测定；高效液相色谱法

【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2018）05-0017-03

Abstract：Objective To establish a method for determination of puerarin in Yiqihuoxue granules by HPLC. Methods The samples were analyzed on a Eclipse XDB-C18（250mm×4.6mm，5μm）column and the mobile phase consisted of methanol-water solution （25∶75） at a flow rate of 1.0mL·min-1， the detection wavelength was set at 250nm， the sample size was 10μL and the column temperature was 25℃. Results Puerarin showed a good linear relationship within the range of 0.1210～1.2096μg （r=0.9999） ，the average recovery was 10124%，and RSD was 1.34%.Conclusions The method is simple and convenient with high precision and accuracy，and can be used in the quality control of the preparation.

Keywords：Yiqihuoxue Granules； Puerarin； Content Determination； HPLC

益气活血通络颗粒是我院研制的纯中药制剂，由葛根、黄芪、桂枝、羌活、赤芍、炙甘草等十味中药以水煎煮提取制备而成，具有舒筋活络、解痉止痛的功效，临床上用于治疗颈椎病、肩周炎、肌筋膜炎等疾病。葛根为方中君药，黄芪、桂枝为方中臣药，现代药理研究表明，葛根异黄酮是葛根中的主要有效成分，其中葛根素占主體[1]，桂枝具有明显的镇痛解痉作用[2]。本研究参照2015版《中国药典》及文献方法[3-6]，采用高效液相色谱法对制剂中的有效成分葛根素进行含量测定研究，为控制制剂质量提供实验依据。

1 仪器与材料

1.1 仪器 1200系列高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；XS205 型电子分析天平（瑞士Mettler Toledo公司）。

1.2 材料 益气活血通络颗粒（规格： 每袋装8g，批号： 20170401、20170506、20170615） 由医院制剂室提供，葛根素（批号：110752-200912，中国药品生物制品检定所），甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其余试剂为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验 色谱柱： Eclipse XDB-C18（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-水（25∶75）；检测波长：250nm；流速：1.0mL/min；柱温：25℃；进样量：10μL，理论板数按葛根素峰计算应不低于4000，葛根素与其他成分分离度符合要求。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 取葛根素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含120.96μg的对照品溶液，备用。

2.2.2 供试品溶液的制备 取本品适量，研细，取细粉约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入30%乙醇50mL，密塞，称定重量，超声处理（ 250W，40kHz） 30min，取出，放冷，再称定重量，用30%乙醇补足减失的重量，摇匀，取上清液，滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 阴性样品溶液的制备 精密吸取不含葛根的阴性样品，按照供试品溶液的制备方法制备阴性对照溶液，即得。

2.3 专属性试验 在2.1项下色谱条件下，分别取对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液各10μL进样，记录色谱图；葛根素保留时间为15.20min，理论塔板数为5660，主峰与杂质峰的分离度大于1.5，阴性对照在葛根素色谱峰位置处无峰干扰。如图1所示。

2.4 线性关系 考察分别精密吸取1、2、4、6、8、10mL葛根素对照品母液至10mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，分别进样10μL，记录色谱图；得到峰面积（Y）与进样量（X）的关系为Y=1.6233X-60.6190，r=0.9999，表明葛根素在0.1210～1.2096μg 进样量范围内线性关系良好。

2.5 精密度试验 取对照品溶液，精密量取10μL，连续测定6次，结果峰面积的RSD为0.51% （n= 6） 。

2.6 稳定性试验 精密吸取供试品（批号：20170401） 溶液10μL，分别在0、2、4、8、12h进样测定一次，结果峰面积的RSD 为1.44% （n=6） ，结果表明，供试品溶液在12h内基本稳定。