青阳参总苷对社会挫败应激模型大鼠的抗抑郁作用研究

张萌 高博 李勇辉 杨庆雄

【摘 要】 目的：评价青阳参总苷（QYS）的抗抑郁活性。方法：60只大鼠分为对照组、模型组、QYS低中高剂量组，氟西汀作为阳性对照组。首先进行10d社会挫败应激，第5天开始灌胃给药，然后测试糖水偏爱、旷场、惊跳反射和前脉冲抑制等行为。结果：与模型组相比，QYS和氟西汀能显著抑制应激8 d的糖水偏爱下降，旷场试验大鼠自主活动性和不动时间没有显著变化，而QYS高剂量组和阳性对照组能增加大鼠僵直时间；大鼠惊跳反射和前脉冲抑制没有显著变化，而QYS高剂量组能显著降低大鼠105dB惊跳反射幅值；与模型组间的差异有统计学意义（P<0.05）。结论：QYS对社会挫败应激大鼠抑郁行为具有调节作用。

【关键词】 青阳参总苷；社会挫败应激；抗抑郁

【中图分类号】R285.5 【文献标志码】 A【文章编号】1007-8517（2018）15-0017-04

Abstract：Objective To evaluate the antidepressant activity of Qingyangshen glycosides （QYS）. Methods 60 rats were divided into control group， model group and QYS treatment group， and fluoxetine wasused as positive control group. Firstly， rats were stressed 10 days by a social defeat stress program， and drugs were administered intragastrically on the 5th day of the stress. Thebehavioral effectswere tested using syruppreference， open field， startle reflexand prepulse inhibitiontests. Results QYS and fluoxetine could significantly inhibit the decrease of syrup preference value induced by stress， and no significant change was observed in the autonomic activity and immobility of rats. However， the freezing time was increased in high dose of QYS and positive control groups in the open field tests.Nodifference was observed between startle reflex and prepulseinhibition in rats after stress， but the startle reflex amplitude of rats on 105 dB was significantly inhibited in the high dose of QYS group， being comparing with the stress group. And the difference was statistically significant between the model group（P<0.05）.Conclusion QYS showed an antidepressanteffect onsocial defeat stress rats.

Keywords：Qingyangshen Glycosides； Social Defeat Stress； Antidepressant

随着当今社会压力上升，焦虑症、抑郁症等慢性应激相关的精神障碍受到研究者的特别关注。抑郁症是一种慢性的反复发作的精神疾病，临床核心症状表现为快感缺失，患者甚至产生自杀倾向，社会危害性很大。由于抑郁症的病理机制较为复杂，所以不同作用机制的药物对抑郁症的治疗效果也不一样[1-3]，故从不同作用机制出发，开发抗抑郁药物，具有重要意义。

青阳参（Cynanchum otophyllum）为萝藦科鹅绒藤属植物，是西南地区的重要的民族药之一，具有抗癫痫[4-5]、抗抑郁[6]等药理活性作用，研究发现青阳参的抗抑郁活性成分为C21甾体苷类[7-8]。青阳参总苷对强迫游泳和悬尾等绝望筛选模型[6]和慢性不可预知温和应激模型动物[9]的抑郁具有显著的调节作用。基于抑郁症病理机制的多样性，不同的筛选模型代表了不同病理机制下的抑郁症表现。所以，本研究采用较强应激的社会挫败应激模型，考察青阳参总苷的抗抑郁作用。

1 材料

1.1 动物 雄性SD大鼠60只，雄性Long-Evans大鼠30只，均为清洁级，体重（250±10）g。动物购自北京维通利华实验动物技术有限公司，动物合格证：SCXK（京）2016-0011。光周期8：00-20：00，温度20～24℃，湿度40%～70%，自由饮水进食。

1.2 藥品 氟西汀（批号：J20160029，礼来苏州制药有限公司），分析纯蔗糖（批号：20160106，北京化工厂），青阳参总苷（自制）。

2 方法

2.1 动物分组 清洁级SD大鼠60只，根据应激前糖水偏爱基线值对动物进行平均分组，分为6组，每组10只。分别为：对照组、模型组、青阳参总苷低、中、高（5、15、45mg/kg）剂量组和阳性对照组（氟西汀，1.8mg/kg）。

2.2 药物制备 QYS提取方法[8]，取青阳参块根10kg，粉碎，80%乙醇提取3次，合并提取液，浓缩回收溶剂。浓缩液用水稀释，石油醚萃取3次，水层再用氯仿萃取3次，合并氯仿部分。回收氯仿，得浅黄色青阳参总苷粉末230g，得率为2.3%。

2.3 社会挫败应激模型的建立[11] 将SD大鼠放入到Long-Evans大鼠的饲养盒中，Long-Evans大鼠作为居住者会主动攻击SD大鼠，每次打斗1h，前30min让其任意打斗，后30min在饲养盒中间放置一个铁丝网制成的隔板，使两只动物无法直接接触，但存在视觉、嗅觉、触觉的接触，1h后SD大鼠回笼。此后隔天按照上述方法进行应激，共应激10d。

2.4 给药方法 QYS和氟西汀粉末分别溶于蒸馏水，QYS低、中、高给药剂量分别为5、15、45mg/kg，阳性对照组氟西汀剂量为1.8mg/kg，应激前1小时灌胃给药。应激第5天开始每隔一天，QYS灌胃给药1次，共给药6次，同时阳性对照组大鼠每天灌胃给药1次，对照组每天给蒸馏水。

2.5 糖水偏爱行为测试 按照文献方法[10]，单笼大鼠进行1周糖水适应训练，第1天适应双瓶1%的蔗糖水，第2天后均换成一瓶清水和一瓶1%的蔗糖水，在第8天测试糖水偏爱基线值（糖水偏爱=糖水消耗量/（糖水消耗量+清水消耗量）×水消耗量×100%），测试前限制饮水24h。应激前糖水偏爱基线值作为应激0天数据，然后以同样方法在应激第4、8、10天分别测试各组大鼠糖水偏爱值。

2.6 旷场行为测试 旷场测试箱规格：100cm×60cm×50cm。QYS给药结束后用陌生情境旷场箱测试动物的新颖寻求行为，记录10min内大鼠在旷场中僵直行为时间、不动时间和运动距离行为指标。

2.7 惊跳反射行为测试 测试前大鼠放入惊跳反射箱的透明束缚盒进行环境适应，第2天将大鼠全部放入箱内，箱内持续65dB白噪音直至实验结束，适应 300s 后，给予90dB、100dB、110dB，50ms的白噪音刺激各 10 次，刺激顺序随机，刺激间隔10～50s。记录小鼠在声音刺激开始前200ms至声音结束后 1000ms 的惊跳反射幅值，考察QYS能否抑制应激引发的惊跳反射增强现象。

2.8 前脉冲抑制行为测试 前脉冲抑制（PPI）指在惊吓刺激之前给予轻微刺激（前脉冲）可以抑制动物对刺激反应的现象，而强应激后动物会出现PPI缺失行为。惊跳反射行为测试3h后，动物在惊跳反射箱进行前脉冲抑制测试，首先给予30dB前刺激，记录在68dB、71dB 和77dB声音刺激下的惊跳反射幅值[13]，其他程序参数与惊跳反射行为测试一致。考察QYS对应激后动物的PPI行为的影响。

2.9 统计学方法 采用SPSS 19.0进行数据处理，数据均以（x±s）表示，采用双因素及单因素方差分析，P<0.05表示差异具有统计学意义。

3 结果

3.1 青阳参总苷对社会挫败应激大鼠糖水偏爱的影响 由表1可知，随应激时间的延长，社会挫败应激诱发大鼠糖水偏爱值下降。在应激8d，与对照组相比，模型组糖水偏爱值显著下降（P<0.001），QYS低、中、高剂量均能够逆转糖水偏爱值下降（P<0.01，P<0.001，P<0.001），并呈现一定的剂量依赖关系，氟西汀同样能反转应激后大鼠糖水偏爱下降（P<0.001）。应激第10天，与模型组相比，对照组和QYS给药组糖水偏爱值均没有统计学差异（P>0.05）。

3.2 青阳参总苷对社会挫败应激大鼠旷场行为的影响 由表2可知，旷场行为结果发现，僵直时间、不动时间及活动距离3个指标，对照组与模型组无统计学差异（P>0.05），而QYS高剂量组大鼠僵直时间增加（P<0.01），阳性对照组大鼠僵直时间也出现增加（P<0.01）。

3.3 青阳参总苷对社会挫败应激大鼠惊跳反射的影响 由表3可知，模型组与对照组相比，对3个不同强度声音刺激诱发的惊跳反射无统计学差异（P>0.05），但QYS高剂量组对105dB中等刺激诱发惊跳反射有一定的抑制作用（P<0.05），青阳参总苷给药组对95dB、115dB声音刺激诱发惊跳反射没有影响。

3.4 青阳参总苷对社会挫败应激大鼠前脉冲抑制的影响 由表2可知，68 dB、71 dB、77dB 刺激下的PPI，各实验处理组间没有显著变化，模型组与空白对照组相比无统计学差异（P>0.05）。

4 讨论

抑郁样行为反应包括快感缺失、自发活动减少、行为绝望或习得性无助等[14-15]。社会挫败模型中，利用有较强的领地或食物争夺意识的Long-Evans大鼠，诱导动物之间发生激烈争斗，反复应激导致 SD大鼠屈服出现抑郁样行为，与人在社会中经常受到挫败而导致的抑郁行为的诱因类似。社会挫败包括躯体和心理上双重应激，易诱发抑郁样行为。该应激范式能更好地模拟抑郁个体的情绪特征，可避免反复应激导致动物的适应性，抑郁样行为可持久保持，因此该模型对抗抑郁药物研究具有重要作用[11， 16] 研究中发现，社会挫败应激8 d可导致大鼠糖水偏爱值下降，而与模型组相比QYS组和阳性对照组能显著恢复应激后的糖水偏爱，说明QYS著抑制社会挫败应激导致的快感缺失症状，而10 d糖水偏爱值反弹，可能是由于应激时间短、次数少不足以维持稳定的抑郁样行为。旷场结果中，模型组大鼠的自主活动性没有显著变化。與模型组相比，QYS高剂量组和阳性对照组增加大鼠旷场中的僵直时间，这与高剂量QYS给药半小时后动物易现镇定行为符合，可能与大剂量QYS对动物活动的抑制作用有关。除此之外，考虑到该社会挫败应激属于较强烈应激，因此对应激后的惊跳反射增强及PPI缺失行为进行考察。惊跳反射和PPI测试发现，对照组与模型组没有显著差异，这也说明该社会挫败应激未达到急性应激的强度，不足以诱发应激后惊跳反射增强和PPI缺失行为。但与模型组相比，QYS高剂量组能显著抑制大鼠105dB惊跳反射幅值，说明青阳参总苷对较弱刺激诱发的惊跳反射行为具有一定抑制作用，提示青阳参可能对惊跳反射有一定抑制作用。实验结果表明，QYS具有逆转快感缺失、抑制惊跳反射增强作用，具有一定抗抑郁活性。