姜黄素对乙型病毒性肝炎模型大鼠转化生长因子-β1、肿瘤坏死因子-α表达水平的影响

胡金杰 王文生 陶 然

(海西州人民医院感染科，青海 海西 817099)

乙型病毒性肝炎(乙肝)不仅影响患者的肝功能，如不及时控制病情可引发肝纤维化，常表现为肝组织修复异常〔1〕。因此，改善乙肝患者的肝功能及延缓肝纤维化是提高乙肝临床治疗的关键。姜黄素(Cur)属于酚类化合物，作为中药材姜黄的提取物〔2〕，具有广泛的药理学作用，如调节细胞周期和凋亡〔3〕、清除氧自由基〔4〕及抑制肿瘤生长〔5〕等。近年来发现Cur具有较强的肝保护作用，如对四氯化碳致实验性肝纤维化大鼠有抗肝纤维化作用〔6〕，对胆管结扎后大鼠有较强的保肝作用〔7〕，对雷公藤甲素肝损伤有较强的保护作用〔8〕。此外，有研究指出Cur具有较强的抗乙型肝炎病毒的效果〔9〕。鉴于Cur较强的抗病毒及肝功能保护作用，本研究推测Cur有助于改善乙肝的肝功能并逆转肝纤维化过程。为此，本研究给予乙肝大鼠Cur治疗，并进一步分析其对转化生长因子(TGF)-β1、肿瘤坏死因子(TNF)-α表达的影响。

1 材料与方法

1.1主要试剂 乙肝病毒抗原购自北京动物传染病实验研究中心。Cur购自美国Sigma公司，丙氨酸转移酶(ALT)、天门冬氨酸转移酶(AST)测定试剂盒购自上海玉兰生物技术研究所，血清总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)测定试剂盒购自南京建成生物科技有限公司，透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)和TGF-β1酶联免疫吸附实验(ELISA)检测试剂盒购自美国Thermo Fisher公司，Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、TNF-α ELISA检测试剂盒购自武汉博士德生物有限公司。

1.2动物模型与分组 采用雄性SD大鼠(体重220～250 g，北京维通利华公司提供，SPF级)尾静脉感染乙型肝炎病毒制备乙肝模型，根据文献〔10〕采用Hank调试剂将乙肝病毒抗原稀释至1×106/ml，每只10 ml/kg尾静脉注射，每周1次，连续3 w。将60只模型大鼠随机分为模型组和Cur组，每组30只，分别每日灌服生理盐水和20 mg/kg Cur，体积为5 ml。另取30只正常SD大鼠灌服生理盐水作对照组。本实验所用大鼠均于适应性喂养1 w后进行造模，整个实验过程饲养于SPF级实验动物房。

1.3肝功能及肝纤维化相关指标检测 药物干预结束即8 w后每组各选取6只大鼠，深度麻醉后开胸心脏采血5 ml，3 000 r/min离心15 min，分离血清，采用日立7600型全自动生化仪检测ALT、AST水平，采用酶法检测TBIL、DBIL水平，采用酶联免疫试剂盒检测HA、LN和PCⅢ水平，整个操作过程均严格遵循试剂盒说明书。

1.4血清TGF-β1、TNF-α水平检测 药物干预期间连续选取4个观察点(2、4、6、8 w)，每组选取6只大鼠，血标本采集及血清分离步骤同1.3，采用酶联免疫试剂盒检测血清TGF-β1、TNF-α水平，整个操作过程严格遵循试剂盒说明书。

1.5统计学处理 采用SPSS19.0软件行t检验、单因素分析。

2 结 果

2.1各组肝功能相关指标比较 与对照组相比，模型组ALT、AST、TBIL和DBIL水平升高，差异均有统计学意义(P<0.05)；Cur组的ALT、AST、TBIL和DBIL水平均低于模型组(P<0.05)，但仍高于对照组(P<0.05)。见表1。

表1 各组肝功能相关指标比较

与对照组比较：1)P<0.05；与模型组比较：2)P<0.05；下表同

2.2各组肝纤维化相关指标比较 与对照组相比，模型组HA、PCⅢ和LN水平升高(P<0.05)；Cur组的HA、PCⅢ和LN水平均低于模型组(P<0.05)，但仍高于对照组(P<0.05)。见表2。

表2 各组肝纤维化相关指标比较

2.3各组血清TNF-α水平比较 与对照组相比，模型组2、4、6、8 w的血清TNF-α水平均升高(P<0.05)；Cur组的血清TNF-α水平均低于模型组(P<0.05)，但仍高于对照组(P<0.05)。见表3。

2.4各组血清TGF-β1水平比较 与对照组相比，模型组2、4、6、8 w的血清TGF-β1水平均升高(P<0.05)；Cur组的血清TGF-β1水平均低于模型组(P<0.05)，但仍高于对照组(P<0.05)。见表4。

表3 各组血清TNF-α水平比较

表4 各组血清TGF-β1水平比较

3 讨 论

肝纤维化通常继发于慢性肝损伤，临床研究发现在乙肝发生发展及转归的过程中均伴有不同程度的肝纤维化〔7〕。作为肝损伤的前期病变，肝纤维化对于乙肝的治疗意义重大，延缓或逆转肝纤维化是防止乙肝发展为肝硬化的关键〔8〕。Cur是姜黄的次生代谢产物，有多种药理作用，可作为治疗各种疾病如哮喘和肝病的有效药物〔11〕。

本研究结果表明，Cur对乙肝导致的肝损伤有明确的保护价值；但经过Cur治疗的乙肝大鼠的以上指标仍未恢复正常水平，可能与本研究使用的Cur剂量和观察时间较短有关，下一步拟提高剂量和延长治疗时程，必要时可联合其他药物提高Cur的治疗效果。

在肝纤维化发生过程中，TGF-β1和TNF-α发挥了重要的促进作用。TGF-β1具有抑制胶原酶和蛋白酶合成的作用，可通过促纤维连接蛋白合成，使胶原及纤维连接蛋白在肝内沉积，同时抑制肝内胶原及基质降解，继而导致肝纤维化的发生〔12〕。此外，TNF-α在发生肝损伤时，可促进胞外基质合成，促进炎症反应，加重肝纤维化程度〔13〕。本研究结果发现，Cur可抑制TGF-β1和TNF-α水平升高，尽管具体机制尚不清楚，但为Cur改善乙肝肝硬化提供了确切证据。